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    不同類型脂肪酸對SD大鼠血清脂肪酸及胰島素抵抗的影響

    2010-09-08 08:14:30高青松王志紅
    中國比較醫(yī)學(xué)雜志 2010年5期
    關(guān)鍵詞:中鏈高脂抵抗

    高青松,劉 源,趙 爽,張 濤,王志紅

    (軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心,北京 100071)

    研究報告

    不同類型脂肪酸對SD大鼠血清脂肪酸及胰島素抵抗的影響

    高青松,劉 源,趙 爽,張 濤,王志紅

    (軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心,北京 100071)

    目的分析中鏈飽和脂肪酸(MC-SFA,MCF組)、長鏈飽和脂肪酸(LC-SFA,LCF組)、n-6多不飽和脂肪酸(n-6 PUFA,SUF組)和n-3多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA,TUF組)四種脂肪酸對大鼠血清脂肪酸及胰島素抵抗的影響。方法雄性SD大鼠40只隨機(jī)分為5組,對照組給予普通日糧,高脂組給予脂肪熱量比相同的高脂日糧。喂養(yǎng)10周,每18 d測定空腹血糖(GLU)、血清脂肪酸、血清胰島素水平,根據(jù)胰島素敏感性指數(shù)(ISI)=ln1/ (FPG×FINS)評定大鼠的胰島素敏感性。結(jié)果10周后,LCF組和SUF組大鼠體重顯著高于對照組和其它高脂組;LCF組血清胰島素顯著高于對照組(P﹤0.05);LCF組、TUF組 ISI顯著低于對照組(P﹤0.05);各組間血糖無明顯差異(P>0.05)。SUF組、TUF組血清LC-SFA濃度顯著低于LCF組(P﹤0.05);TUF組血清(n-3 PUFA)顯著高于對照組和其它高脂組(P﹤0.05)。結(jié)論不同類型脂肪酸的高脂飼料對SD大鼠的血清脂肪酸組成和含量有顯著的影響,SD大鼠脂肪沉積及胰島素抵抗程度隨血清脂肪酸代謝作用的不同而變化。

    脂肪酸;胰島素抵抗;SD大鼠

    胰島素抵抗(insulin resistance,IR)是胰島素作用的靶器官、組織(主要是骨骼肌、肝臟、脂肪組織)對胰島素的敏感性降低的一種異常狀態(tài),使其對胰島素介導(dǎo)的葡萄糖吸收和利用能力受損的一種代謝紊亂性病理生理現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn),高脂飲食是導(dǎo)致胰島素抵抗的重要原因,是機(jī)體代謝異常的基礎(chǔ),與 2型糖尿病、肥胖、高血壓和血脂異常相關(guān)[1,2]。過量的脂肪攝入,使體內(nèi)的游離脂肪酸濃度增加,對機(jī)體有“脂毒性”作用。脂肪酸與葡萄糖競爭氧化,抑制了組織細(xì)胞對葡萄糖的吸收和氧化利用,造成胰島素抵抗。不同類型的脂肪酸在此過程中所起的作用不同。細(xì)胞膜中不同脂肪酸含量對細(xì)胞膜的流動性和信號傳導(dǎo)應(yīng)答的敏感性不同。如飽和脂肪酸的含量增加,細(xì)胞膜的流動性和反應(yīng)性會受到損傷,細(xì)胞膜內(nèi)外之間的胰島素信號傳導(dǎo)就會受影響,使胰島素的敏感性下降[3-5]。另外,不同種類的脂肪酸在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物不同。例如,n-6型脂肪酸在體內(nèi)代謝產(chǎn)生花生四烯酸,最終導(dǎo)致白三烯類和前列腺素類物質(zhì)增多,使體內(nèi)炎癥因子增加,降低了胰島素的敏感性。而 n-3型脂肪酸則降低炎癥因子的產(chǎn)生,增加胰島素的敏感性[6]。本實驗通過富含中鏈脂肪酸(MC-SFA)、長鏈飽和脂肪酸(LC-SFA)、n-6多不飽和脂肪酸(n-6 PUFA)、n-3多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA)的椰子油、牛油、豆油和亞麻油飼喂大鼠,分析不同類型脂肪酸對大鼠血清脂肪酸及胰島素抵抗的影響。

    1 材料和方法

    1.1 動物與飼料

    1.1.1 實驗動物:SPF級雄性SD大鼠,體重 170± 10 g。實驗動物在SPF級動物房飼養(yǎng),明暗周期12 h(6:00~18:00),自由采食、飲水,溫度(23± 1)℃,濕度(40±5)%。實驗動物由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供[SCXK-(軍)2007-004]。

    1.1.2 實驗分組:40只SPF級雄性 SD大鼠隨機(jī)分為5組,每組8只。對照組(NC group)及四個不同類型脂肪酸的高脂組:LCF組(LCF group,富含長鏈飽和脂肪酸)、MCF組(MCF group,富含中鏈飽和脂肪酸)、SUF組(SUF group,富含n-6多不飽和脂肪酸)、TUF組組(TUF group,富含n-3多不飽和脂肪酸)。

    1.1.3 動物飼料:對照組日糧,熱量為3.29 kcal/ g,脂肪占8.23%,蛋白質(zhì)占23.15%,碳水化合物占68.62%。高脂組日糧在對照組日糧基礎(chǔ)上添加大豆分離蛋白及富含不同類型脂肪酸的油脂等加工而成,利用氣相色譜儀[7]測得LCF組脂肪飽和脂肪酸的含量為54.5%,MCF組脂肪中鏈脂肪酸的含量為56%,SUF組脂肪n-6 PUFA的含量為53.7%,TUF組脂肪n-3 PUFA的含量為45.5%。調(diào)整配方使四個高脂組總熱量及三大類營養(yǎng)物質(zhì)的熱量比相同,熱量為4.44 kcal/g,脂肪占44.75%,蛋白質(zhì)占20.59%,碳水化合物占34.66%。

    1.2 血樣采集

    每18 d采空腹血一次,采血前禁食14 h(18:00~8:00)但不禁水,從眼眶靜脈叢取血并分離血清,進(jìn)行各項指標(biāo)的測定。

    1.3 實驗方法

    測定血糖、胰島素(FINS),記錄大鼠體重、采食量及實驗?zāi)└箛?,用氣相色譜儀 GC-2010測定血清脂肪酸的種類及其含量。

    1.4 檢測指標(biāo)及方法

    1.4.1 血糖水平測定:采用酶法測定血糖,按試劑盒說明進(jìn)行(試劑盒均購自南京建成生物工程研究所)。

    1.4.2 血清脂肪酸譜的測定:用氣相色譜儀GC-2010 FID檢測器分析血清中脂肪酸,色譜柱為Rtx-wax毛細(xì)柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)。血清脂肪酸甲酯化方法參考Guy Lepage的方法[8]。采用程序升溫法分析處理后樣品,起始溫度為120℃,保持1 min,然后以16℃/min速率升溫到 200℃,保持 2 min,在以2℃/min的速率升溫到210℃,保持1 min,最后在以8℃/min的速率升溫到226℃,保持14 min。進(jìn)樣口、檢測器溫度為240℃、260℃。載氣為氫氣,分流進(jìn)樣,分流比為1∶10,線速度為34 cm/s。定量方法:用Rtx公司的脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品配制一系列不同濃度的溶液,用C17:0甲酯做內(nèi)標(biāo)物,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。內(nèi)標(biāo)法分析血清中脂肪酸的含量。

    1.4.3 胰島素測定:血清胰島素(單位uIU/L)采用放免法測定 (北京北方生物技術(shù)研究所測定)。

    1.4.4 胰島素敏感性指數(shù):胰島素敏感性指數(shù)(insulin sensitivity index,ISI)= ln1/(FPG × FINS),ISI值越高,提示胰島素敏感性越強(qiáng)。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    2 結(jié)果

    2.1 采食量及能量攝入量

    四個高脂組平均日飼料消耗量以 MCF組最少(156.72 g/694.29 kcal),LCF組最多(185.48 g/ 817.95 kcal),SUF組、TUF組分別為 180.04 g/ 794.00 kcal、178.13 g/803.39 kcal。對照組平均日采食量(207.94 g)高于四個高脂組,但是能量攝入量(684.12 kcal)低于其它4個高脂組。

    2.2 體重及腹圍變化情況

    整個實驗過程中以 LCF組和SUF組大鼠體重增長較快,到實驗結(jié)束時,SUF組(542.11±41.59) g和LCF組(536.88±42.03)g體重顯著高于MCF組(492.38±44.60)g、TUF組(481.50±29.47)g和對照組(479.38±40.68)g(P<0.05)。對照組、MCF組和TUF組增長趨勢相似,實驗結(jié)束時它們之間在統(tǒng)計學(xué)上無顯著差異(P>0.05)(圖1)。

    實驗結(jié)束時,LCF組(21.67±0.76)cm和SUF組(21.53±0.97)cm腹圍顯著高于對照組(20.17 ±0.42)cm(P<0.05),MCF組(20.78±1.07)cm和TUF組(20.41±0.60)cm腹圍高于對照組但沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

    圖1 各組體重變化Fig.1 Change of body weight in the rats of different groups

    2.3血糖(GLU)

    在整個實驗過程中,各組GLU測定值在統(tǒng)計學(xué)上沒有顯著差異(P>0.05),但實驗過程中變化情況不同。實驗開始時各組之間無明顯差異,實驗結(jié)束時以LCF組的血糖最高(表1)。

    表1 血糖測定值Tab.1 The level of serum glucose

    2.4 血清胰島素水平

    各組血清胰島素水平變化有較大差別(表 2),對照組血清胰島素水平先上升后下降。高脂組血清胰島素實驗?zāi)y定值均高于開始值,但實驗過程中變化情況不同,LCF組呈上升趨勢,MCF組、SUF組和TUF組血清胰島素水平有起伏變化。實驗開始時,各組之間無明顯差異(P>0.05)。第72天測定結(jié)果,LCF組(23.10±11.18)uIU/mL顯著高于對照組的(13.01±3.17)uIU/mL(P<0.05)。高脂組之間血清胰島素水平?jīng)]有統(tǒng)計學(xué)上的差異,對照組的血清胰島素水平最低,低于MCF組、SUF組和TUF組,但沒有統(tǒng)計學(xué)上的差異。

    表2 血清胰島素測定值Tab.2 The level of serum insulin

    2.5 胰島素敏感性分析(ISI)

    實驗過程中各組ISI均呈下降趨勢,實驗結(jié)束時LCF組(-4.89±0.45)胰島素敏感性最差,TUF組(-4.82±0.53)次之,對照組(-4.26±0.31)胰島素敏感性最好(表3)。實驗開始各組ISI無明顯差異(P>0.05)。至第72天時,LCF組和TUF組的ISI顯著低于對照組(P﹤0.05),MCF組和SUF組的ISI低于對照組,但在統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異(P>0.05)。

    表3 胰島素敏感性指數(shù)Tab.3 Insulin sensitivity index

    2.6 血清脂肪酸譜的分析

    2.6.1 血清總脂肪酸濃度:在整個實驗過程中,對照組血清總脂肪酸水平較穩(wěn)定,高脂組變化較大(表4)。LCF組在短時間內(nèi)迅速上升,在第19天測定結(jié)果顯著高于TUF組(P﹤0.05)。第37天測定結(jié)果 LCF組顯著高于 SUF組和 MCF組(P﹤ 0.05)。第54天測定結(jié)果對照組和 LCF組顯著高于SUF組和TUF組(P﹤0.05)。第72天測定結(jié)果,對照組和LCF組顯著高于SUF組和TUF組(P﹤0.05),MCF組顯著低于對照組(P﹤0.05),TUF組顯著低于MCF組(P﹤0.05),SUF組和TUF組之間無統(tǒng)計學(xué)上差異(P>0.05)。

    表4 血清總脂肪酸測定值Tab.4 The level of serum total fatty acids

    2.6.2 血清長鏈飽和脂肪酸濃度:高脂組血清長鏈飽和脂肪酸濃度變化隨飼料中不同類型脂肪酸的不同而有明顯變化,對照組濃度較為恒定(表 5)。LCF組在第19天測定時顯著上升,顯著高于 SUF組和TUF組 (P﹤0.05),在以后的測定中高脂組的血清長鏈飽和脂肪酸濃度都有不同程度的下降,以TUF組下降最為顯著。第72天測定結(jié)果,對照組、LCF組和MCF組血清長鏈飽和脂肪酸濃度顯著高于SUF組和TUF組(P﹤0.05)。

    2.6.3 血清中鏈飽和脂肪酸濃度:氣相色譜的測定結(jié)果顯示,血清中鏈飽和脂肪酸濃度在實驗開始時未檢出,在整個實驗過程中除了MCF組外其它各組未檢出。MCF組第19、37、54、72天血清中鏈飽和脂肪酸的平均濃度為 44.46 μmmol/L、25.06 μmmol/L、22.83 μmmol/L、32.52 μmmol/L。

    2.6.4 血清n-6 PUFA濃度:開始實驗時各組血清n-6 PUFA濃度沒有差異(P>0.05)。對照組的血清n-6 PUFA濃度較恒定,LCF組、MCF組和TUF組下降明顯,SUF組的濃度先上升后下降(表6)。第72天的測定結(jié)果顯示,對照組顯著高于SUF組(P﹤0.05),SUF組顯著高于LCF組和MCF組(P﹤0.05),LCF組和MCF組顯著高于TUF組(P﹤0.05)。

    2.6.5 血清n-3 PUFA濃度:在整個實驗過程中,除TUF組外對照組和其它高脂組的血清n-3 PUFA濃度均下降,TUF組先上升后又呈恢復(fù)至開始時水平(表7)。至第72天測定結(jié)果顯示TUF組顯著高于對照組和其它高脂組(P﹤0.05)。

    表5 血清長鏈飽和脂肪酸測定值Tab.5 The level of serum long chain saturated fatty acids

    表6 血清n-6 PUFA測定值Tab.6 The level of serum n-6 polyunsaturated fatty acids

    2.6.6 血清單不飽和脂肪酸濃度:第一天的測定結(jié)果顯示,TUF組的單不飽和脂肪酸含量最高,隨著實驗組攝入脂肪酸類型的不同,不同組的含量發(fā)生了顯著變化。從第19天至實驗結(jié)束的測定結(jié)果顯示,LCF組的單不飽和脂肪酸的含量顯著高于對照組和其它高脂組(P﹤0.05)。對照組和MCF組的單不飽和脂肪酸水平在整個實驗過程中較穩(wěn)定(表8)。

    表7 血清n-3 PUFA測定值Tab.7 The level of serum n-3 polyunsaturated fatty acids

    表8 血清單不飽和脂肪酸測定值Tab.8 The level of serum monounsaturated fatty acids

    3 討論

    動物實驗發(fā)現(xiàn),改變飲食脂肪酸的類型對胰島素抵抗有明顯不同的影響,飽和脂肪酸明顯增加胰島素抵抗,而中鏈飽和脂肪酸以及多不飽和脂肪酸對胰島素抵抗的影響較小[9,10]。Storlein及其同事在用不同類型脂肪酸的研究中發(fā)現(xiàn),不同類型脂肪酸對胰島素敏感性的影響不同[11]。大鼠攝入不同類型的脂肪酸后,在體內(nèi)消化、吸收代謝中有不同的方式。首先體現(xiàn)在血清脂肪酸類型及含量的變化上,其在體內(nèi)的代謝及代謝后產(chǎn)物的作用不同,導(dǎo)致胰島素敏感性有不同的變化。不同類型脂肪酸的代謝及代謝后產(chǎn)物的作用不同可能是產(chǎn)生這種差異的主要原因。

    LCF組在實驗結(jié)束時產(chǎn)生了嚴(yán)重的胰島素抵抗,胰島素敏感性顯著下降,體重、腹圍顯著高于對照組。血清總脂肪酸及飽和脂肪酸濃度在整個實驗過程中先上升后又趨于下降,隨后又有上升的趨勢。實驗?zāi)?,單不飽和脂肪酸顯著高于對照組和其它高脂組,n-6PUFA、花生四烯酸及DHA水平顯著低于對照組。大鼠在采食大量的長鏈飽和脂肪酸后,血清中的脂肪酸水平上升。長期的高濃度飽和脂肪酸與葡萄糖產(chǎn)生競爭性氧化,影響了胰島素對葡萄糖的調(diào)節(jié)作用。過量的脂肪酸,超過機(jī)體的需要,造成脂肪在腹腔沉積甚至異位沉積(肝臟)。脂肪酸的“脂毒性”作用損傷了胰島素敏感性,誘發(fā)大鼠產(chǎn)生胰島素抵抗。另外長鏈飽和脂肪酸參與到細(xì)胞膜的構(gòu)建中,影響了細(xì)胞膜的流動性和信號傳導(dǎo)。這些不利因素最終導(dǎo)致了大鼠的胰島素抵抗。這與大部分研究結(jié)果相符[12,13]。

    MCF組在實驗結(jié)束時,胰島素的效應(yīng)并未受到明顯的損傷。體重、腹圍及胰島素敏感性與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。血清中中鏈飽和脂肪酸水平顯著升高,血清總脂肪酸及棕櫚酸顯著低于對照組,但是花生四烯酸、DHA及 n-6PUFA也顯著低于對照組。中鏈脂肪酸相對與其它類型的脂肪酸,較易溶于水,能快速從膳食脂肪中水解被腸道細(xì)胞吸收,吸收后大部分繞過淋巴系統(tǒng)直接通過門靜脈轉(zhuǎn)移到肝臟代謝,因此不易在體內(nèi)脂肪組織內(nèi)蓄積[14]。而且中鏈脂肪酸進(jìn)入線粒體不依賴肉堿轉(zhuǎn)移酶,使之氧化更加迅速,可通過氧化磷酸化解耦聯(lián)等機(jī)制,相當(dāng)一部分能以熱的形式散失,表現(xiàn)為較高的食物熱效應(yīng)[15],因為其代謝的特殊性,可能避免脂肪酸代謝異常引發(fā)的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積增多,并有助于改善胰島素抵抗。因此中鏈脂肪酸可有效的控制體重增長及體脂蓄積的作用。長期過量的攝入中鏈飽和脂肪酸也會對體內(nèi)DHA的水平造成一定影響。

    SUF組在實驗結(jié)束時并沒有發(fā)生明顯的胰島素抵抗,但是過量的n-6PUFA攝入及脂肪酸的代謝作用對大鼠機(jī)體健康造成很大的隱患。SUF組大鼠體重、腹圍顯著高于對照組,引起大鼠肥胖或超重。血清中總脂肪酸、飽和脂肪酸(棕櫚酸、硬脂酸)及n-6PUFA(花生四烯酸)顯著低于對照組,DHA水平也顯著下降。有實驗顯示大鼠在攝入一定量的 n-6PUFA會改善胰島素敏感性[16]。但過量攝入時,在滿足代謝需求后,n-6PUFA更傾向于在體內(nèi)沉積及異位沉積(肝臟有明顯的脂肪沉積)??赡苁沁^多脂肪酸的“脂毒性”作用造成體內(nèi)DHA水平下降。另外有研究顯示 n-6PUFA攝入過多會造成體內(nèi)炎癥因子增多[6],會對胰島素生物活性造成損傷。本實驗雖然沒有發(fā)生明顯的胰島素抵抗,但是測定的各項指標(biāo)顯示大鼠機(jī)體處在“脂毒性”及炎癥因子損傷的不利環(huán)境中,將會對機(jī)體造成損傷,誘發(fā)產(chǎn)生胰島素抵抗綜合征。

    TUF組在實驗結(jié)束時發(fā)生胰島素抵抗,大鼠體重及腹圍與對照組沒有顯著差異,沒有發(fā)生肥胖或超重。血清中總脂肪酸、飽和脂肪酸(棕櫚酸、硬脂酸)及n-6PUFA(花生四烯酸)水平顯著下降,但是血清中n-3PUFA及 EPA水平顯著升高。Elswyk[17]研究顯示,n-3 PU FA可促進(jìn)哺乳動物脂肪在過氧化小體內(nèi)的 β-氧化。可以推斷,這也是 n-3 PU FA降低血清脂肪酸的一個原因。有研究顯示 n-3PUFA在體內(nèi)的氧化代謝速率相對較快[18-19]。過量的n-3PUFA攝入造成其與葡萄糖的競爭性氧化,抑制了組織細(xì)胞對葡萄糖的吸收和氧化利用,造成大鼠胰島素抵抗。n-3 PUFA作為生長、細(xì)胞代謝及肌肉運動供能只是其功能的一部分,其主要的功能是作為結(jié)構(gòu)物質(zhì)和功能調(diào)節(jié)物。n-3PUFA作為有益必需脂肪酸對機(jī)體代謝產(chǎn)生重要的作用,改善細(xì)胞膜的流動性和信號傳導(dǎo),其本身和代謝后產(chǎn)物作為活性物質(zhì)對胰島素敏感性也起著重要的作用。其適量的攝入對機(jī)體十分有益,但過量的攝入會造成與葡萄糖的競爭氧化,影響組織對葡萄糖的吸收和利用,不利于胰島素效應(yīng)的發(fā)揮。

    本實驗通過不同類型的脂肪酸對大鼠血清脂肪酸及胰島素抵抗的影響的分析,發(fā)現(xiàn)不同類型脂肪酸代謝的不同及其對機(jī)體的影響有顯著的差異。特別是SUF組和TUF組的差異。中鏈脂肪酸對胰島素敏感性造成的損害最小,雖然采食高含量的中鏈飽和脂肪酸,但大鼠體重、腹圍及胰島素敏感性與對照組比較均未受到明顯的影響。因此,擬在本實驗的基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析不同類型脂肪酸在機(jī)體代謝中發(fā)揮的作用和其對胰島素敏感性影響的機(jī)制。

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    The Effect of Different Types Fatty Acids on Serum Fatty Acid and Insulin Resistance in SD Rats

    GAO Qing-song,LIU Yuan,ZHAO Shuang,ZHANG Tao,WANG Zhi-h(huán)ong
    (Laboratory Animal Center of Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071,China)

    ObjectiveTo analyze the effect of serum fatty acid and insulin resistance in SD rats induced by four types fatty acids:medium-chain saturated fatty acids(MC-SFA,MCF group),long-chain saturated fatty acids(LC-SFA,LCF group),n-6 polyunsaturated fatty acids(n-6 PUFA,SUF group)and n-3 polyunsaturated fatty acids(n-3 PUFA,TUF group)。MethodsNormal male SD rats were fed on standard laboratory chow(8.23%of calories as fat)or isocaloric high fat diets(44.75%of calories as fat)for 10 weeks.Serum glucose(GLU),serum fatty acid and insulin were measured 18 days interval.The insulin sensitivity was estimated by ISI index,ISI=ln1/(FPG×FINS)。ResultsAfter 10 weeks,body weight was obviously higher in LCF group and SUF group compared with normal group and other high-fat groups,Serum insulin significantly increased in LCF group compared to other groups(P﹤0.05);As for ISI,LCF group and TUF group were both lower than normal group(P﹤0.05);However there was no significant difference in GLU among the five groups.SUF group and TUF group exhibited obviously lower serum LC-SFA than LCF group(P﹤0.05).Serum n-3 PUFA was obviously higher in TUF group compared with other groups(P﹤ 0.05)。Conclusions The level and composition of serum fatty acids were significantly influence by the type of fatty acid consumed,the metabolic of serum fatty acids caused disparity fatty deposition and insulin resistance in SD rats.

    Fatty acids;Insulin resistance;SD rats

    S962.1

    A

    1671-7856(2010)05-0050-07

    2009-12-10

    高青松(1984-),男,碩士生,研究方向:實驗動物營養(yǎng)及相關(guān)動物模型。E-mail:gqs0404@163.com

    劉源,研究員,主要從事實驗動物營養(yǎng)研究。E-mail:Bj_liuyuan@163.com

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