• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    影響動物克隆效率因素的研究進展

    2010-08-15 00:54:18李亮亮趙曉鵝馬保華
    中國草食動物科學 2010年4期
    關鍵詞:卵丘克隆技術體細胞

    李亮亮,杜 珊,劉 軍,趙曉鵝,馬保華

    (西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院,陜西 楊凌 712100)

    克隆,即無性繁殖,是通過無性形式由單個細胞產(chǎn)生和親代非常相像的單個動物后代。這里所說的單個細胞從來源上既可以是體細胞,也可以是胚胎細胞;從年齡上看,既可以是成年細胞,也可以是幼年或胎兒細胞。在高等哺乳動物中,細胞核移植技術是生產(chǎn)克隆動物最為有效的克隆技術,因此,動物克隆技術實際上是指細胞核移植技術。

    哺乳動物細胞克隆是20世紀末生命科學領域最引人注目的高新技術,已經(jīng)在畜牧業(yè)生產(chǎn)、醫(yī)藥生產(chǎn)和疾病治療、生物學基礎理論研究、野生珍貴瀕危動物的保護以及轉基因工程等諸多領域蘊藏巨大的潛力。通過科學研究者近十年的努力,哺乳動物的克隆技術在農(nóng)業(yè)和生物制藥等方面取得了劃時代的進步,展示了克隆技術的巨大應用價值和廣闊的發(fā)展前景。

    自1997年首次獲得體細胞克隆綿羊[1]以來,已經(jīng)有牛[2]、小鼠[3]、山羊[4]、豬[5]、兔[6]、貓[7]、騾子[8]、馬[9]、大鼠[10]、狗[11]等多種克隆動物相繼問世,雖然動物克隆已經(jīng)在多種動物上取得成功,但是克隆技術目前仍存在一些問題,如效率低、出生的動物存在生理缺陷等多方面的問題,積極尋求問題的解決方法是關鍵所在。

    哺乳動物體細胞核移植技術形成了一套比較完善的程序,主要包括:核受體胞質的準備、核供體細胞的選擇和處理、重構胚的構建、重構胚激活、重構胚的培養(yǎng)等。

    1 供體細胞因素

    1.1 供體細胞的類型

    自1997年Wilmut I等利用成年綿羊乳腺細胞克隆出綿羊“多莉”以來,人們已分別利用不同的細胞克隆出山羊、豬、貓、兔、騾、馬、大鼠和狗等哺乳動物。但是,不同的細胞類型,對克隆的成功率影響很大。

    Kato Y等[12]比較了牛同一個體卵母細胞和輸卵管細胞及不同個體體細胞:肝細胞、耳細胞、子宮細胞、表皮細胞、輸卵管細胞及卵母細胞對克隆效果的影響,結果認為牛的卵丘/顆粒細胞和輸卵管細胞最適合用于牛的核移植。楊素芳等[13]在水牛研究中采用成體成纖維細胞、胎兒成纖維細胞、胎兒皮膚細胞和卵巢顆粒細胞作為供體細胞來源用于核移植。結果顯示,來源于卵丘/顆粒細胞的重構胚,其融合率、卵裂率和囊胚發(fā)育率都高于其他3類細胞。卵丘/顆粒細胞適合作為供體細胞的可能原因:①卵丘細胞是自然靜止在G0/G1期的細胞;②卵丘細胞是包圍在卵母細胞周圍的細胞,核移植后兩者胞質更易互融;③卵丘細胞內端粒酶活性較高。染色體端粒的長度在核移植胚胎的發(fā)育中可恢復到正常水平[14]。并且,卵丘細胞與卵母細胞在激素水平上趨于一致,所處組織環(huán)境與子宮內環(huán)境相似,利于重構胚的發(fā)育生長。

    1.2 供體細胞周期

    細胞周期對核移植成功率的影響至關重要。“多莉”誕生以后,其研究者認為[1],成功的關鍵因素之一是供體細胞經(jīng)血清饑餓后,處于G0期,認為這種細胞易于重編程。但是,細胞同步化處理是否是克隆成功的必要條件,并無定論。Cibelli J B等[15]利用非靜止期細胞克隆出了轉基因牛。因此認為,處于分裂狀態(tài)的細胞群通過核移植仍具有支持分化細胞發(fā)育到正常個體的能力。Beyhan Z等[16]認為,長時間低血清濃度處理可能破壞核細胞內DNA結構,影響移植成功率。目前,由于S期細胞處于DNA合成階段,重構胚易形成2倍化和4倍化之間的非整倍體動物,而沒有克隆個體的報道以外,其他G1、G2和M 期[17]的細胞都被證明可作為供體,用于克隆研究。

    1.3 細胞傳代次數(shù)

    細胞的傳代是否利于克隆個體方面的說法不一。但是大多數(shù)研究者使用的是原代培養(yǎng)或短期培養(yǎng)的細胞,認為這類細胞利于核移植胚的發(fā)育。但 Kasinathan等[18]利用傳至18代細胞用于核移植,結果并未影響移植胚的發(fā)育潛能。Arat S等[19]的研究認為,傳代培養(yǎng)15代的細胞核移植后,囊胚率高于培養(yǎng)10、11、13代的細胞。說明培養(yǎng)代數(shù)高的細胞比代數(shù)低的細胞克隆效率高。究竟是什么機制控制這種高傳代數(shù)高移植效率的發(fā)育呢?目前尚無定論。可能是細胞在傳代過程中,一些老化細胞,如染色體破壞嚴重,DNA結構受損的細胞被淘汰。剩余的細胞具有比較完整的核酸結構,對外部環(huán)境有較強適應性的細胞保留下來,同時能適應核移植過程中的一些機械損傷,最后與卵母細胞融合并發(fā)育成克隆個體。

    2 受體細胞的因素

    迄今已有3類受體細胞用于核移植培育了后代 ,第1類是去除原核的合子 ,但僅局限于用原核或假原核作為供體。第2類是早期胚胎 ,但也只適合于用具有全能性的卵裂球作為供體。第3類是卵母細胞,也是哺乳動物核移植使用最多的一類受體,這類受體接受各階段胚胎的卵裂球,早期胎兒細胞、體細胞或胚胎干細胞均獲得了后代。

    受體細胞的去核是核移植中關鍵環(huán)節(jié),去核不完全將導致重構胚的染色體倍性異常,進而導致胚胎發(fā)育異常。此外去核過程還會給卵母細胞帶來不同程度的物理和化學損害,因此不斷優(yōu)化去核方法和選擇適合于不同動物的去核方法有助于提高克隆動物的效率。目前,應用比較廣泛的去核方法有盲吸去核法和化學誘導去核法。

    2.1 盲吸去核法

    通常,盲吸法去核的時間選擇在第一極體剛排出時,因隨時間延長卵細胞核遠離第一極體,影響去核效率。嚴興榮報道[20],注射hCG 10 h后去小鼠卵核,去核率達90%以上;而12 h后去核,去核率下降22%。不同動物的最佳去核時間不同,牛卵母細胞一般為體外成熟18~20 h后,而豬卵母細胞則在體外成熟44~48 h后為宜。此外,不同動物卵母細胞的結構特點不同,其盲吸法的去核效率也不同。崔奎青[21]利用兔卵母細胞在相差顯微鏡下觀察到染色體的特點,將盲吸法與spingdle view系統(tǒng)結合,去核率達98.4%,且損失的胞質少;因小鼠卵母細胞抗機械損傷能力差,去核后卵母細胞成活率低,小鼠卵母細胞法借助Piez系統(tǒng),去核率高達99%,且成活率也達95%,這種方法對那些抗損傷能力差的動物卵母細胞不失為一種有效的替代盲吸法的機械去核法。

    盲吸去核法雖然存在這樣一些不足,但其操作簡捷、迅速,仍是目前哺乳動物克隆普遍采用的方法。該法的不足在于造成胞質流失和一些重要因子的丟失,從而影響到核的重編程和重構胚的后續(xù)發(fā)育,此外還給卵母細胞帶來機械損傷。

    2.2 化學誘導去核法

    其機理是在極體排出階段,采用干擾染色體分離或紡錘體功能的化學試劑,使所有染色體與紡錘體牢固結合,同時蛋白合成抑制劑抑制細胞周期蛋白B合成,降低促成熟因子濃度,極體借助于慣性將染色質和紡錘體帶出胞外,達到去核的目的。脫羰秋水仙堿(demecolcine,DC)是目前最常用的化學誘導去核劑。與盲吸法等建立在顯微操作系統(tǒng)基礎之上的機械去核法相比,化學去核法程序簡單、機械損傷小、胞質丟失少、重復性好、適合大規(guī)模卵母細胞去核,具有很樂觀的應用前景。

    3 重構胚激活因素

    重構胚的激活是體細胞克隆技術的關鍵環(huán)節(jié),體細胞克隆胚胎的充分激活是保證胚胎正常發(fā)育的先決條件,只有在去核卵母細胞充分激活的情況下才可以指導移入的核發(fā)生重編程(reprogramming)。目前,動物細胞核移植的總效率很低,這可能與卵母細胞未被充分激活有關。由于化學激活方法能大大提高體細胞克隆胚胎的激活效率,許多研究者使用重復性好、結果較穩(wěn)定的化學方法來激活卵母細胞,近年來已成為小鼠、牛、豬、山羊等體細胞克隆成功的重要原因。在此基礎上,科學家們經(jīng)過不斷的努力,核移植的成功率不斷提高。

    常用的重構胚的激活物質有乙醇、氯化鍶、放線菌酮、離子霉素和6-DMAP。另外還有電激活法。乙醇是發(fā)現(xiàn)較早的一種化學激活劑,其對卵母細胞的激活主要是通過水解細胞膜上 4,5-二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)產(chǎn)生1,4,5-三磷酸肌醇(IP3),從而誘發(fā)細胞內源鈣釋放到細胞質,提高細胞內的鈣濃度。盡管乙醇對克隆胚的激活無種間特異性,但不同動物克隆胚對乙醇激活的反應不同。關于氯化鍶(SrCl2)引起激活的機制,有人認為Sr2+作為與Ca2+同族的二價陽離子,可能是通過細胞膜上的Ca2+離子通道進入細胞內,并進入鈣庫(內質網(wǎng)和線粒體等),置換出內源鈣,釋放入胞質中,引起Ca2+離子波動,導致卵母細胞的激活。放線菌酮是一種蛋白質合成抑制劑,通過作用80 S核糖體抑制肽鏈的移動,從而抑制蛋白質的合成;單獨的放線菌酮不能使豬體外成熟卵母細胞激活,其機制尚不清楚,可能是豬卵母細胞對其不敏感,只有與其他刺激因素聯(lián)合使用時,才起到協(xié)同促進的作用,這也說明,放線菌酮引起的卵母細胞激活不是通過Ca2+被動起作用的,而是通過抑制有關蛋白質的合成起作用。SrCl2與放線菌酮聯(lián)合使用對豬卵母細胞的激活有協(xié)同促進作用。離子霉素是一種近年來發(fā)現(xiàn)的高效Ca2+載體,也是一種有效的人工激活劑,已被人們廣泛地應用于哺乳動物卵母細胞的激活中。離子霉素并不直接引起Ca2+的跨膜轉運,而是動員細胞內的Ca2+,依次觸發(fā)Ca2+內流。盡管離子霉素能激活受體卵母細胞,但只有與蛋白質磷酸化抑制劑6-DMAP和蛋白質合成抑制劑放線菌酮協(xié)同作用,才可以有效地被激活;6-DMAP是蛋白磷酸化抑制劑,它能阻止蛋白質的磷酸化進而抑制成熟促進因子和細胞靜止因子的活性。

    電激活是應用較為廣泛的一種激活卵母細胞的方式,其激活卵母細胞并不是因為電場本身激活了卵母細胞,而是電脈沖使卵母細胞膜的磷酸二酯雙分子結構的穩(wěn)定性發(fā)生改變,細胞膜上形成很多可恢復的微小孔洞,使細胞外(介質)中Ca2+進入細胞,或通過激活IP3系統(tǒng)誘導細胞內鈣庫釋放Ca2+,并使胞質內Ca2+濃度升高,從而引起卵母細胞的激活,電場強度和脈沖寬度是電激活的2個重要的參數(shù),與細胞膜上孔洞的形成有關。

    4 小結

    不斷地解決克隆技術在生產(chǎn)實踐中出現(xiàn)的問題 ,以期完善克隆技術理論體系、提高克隆效率、促進體細胞核移植為核心的克隆技術的轉基因動物研究的發(fā)展,運用克隆技術造福人類。

    [1]Wilmut I,Schnieke A E,Mcwhir J,et al.Viable offspring derived from fetal and adult mammalian cells[J].Nature,1997,385:810-813.

    [2]Kato Y,Tani T,Sotomaru Y,et al.Eight calves cloned from somatic cells of single adult[J].Science,1998,282:2095-2098.

    [3]Wa Ka Yama T,Yana Gimachi R.Cloning of male mice from adult tail-trip cells[J].Nature Genetics,1999,22:127-128.

    [4]Ba Guisi A,Behboodi E,Mel Ican D T,et al.Production of goats by somatic cell nuclear transfer[J].Nat Biotechnol,1999,17(5):456-461.

    [5]Pol Ejaeva I A,Chen S H,Vau Ght T D,et al.Cloned pig s produced by nuclear transfer from adult somatic cells[J].Nature,2000,407:86-90.

    [6]Chesne P,Adenot P G,Vigl Ietta C,et al.Cloned rabbits produced by nuclear transfer from adult somatic cells[J].Nat Biotechnol,2002,20(4):366-369.

    [7]Shin T,K raemer D,Pryor J,et al.A cat cloned by nuclear transplantation[J].Nature,2002,415:859.

    [8]Woods G L,White K L,Vanderwall D K,et al.A mule cloned from fetal cells by nuclear transfer[J].Science,2003,301:1063.

    [9]Galli C,Lagutina I,Crotti G,et al.A cloned horse born to its dam twin[J].Nature,2003,424:635.

    [10]Zhou Q,Renard J P,Friec G L,et al.Generation of fertile cloned rats by regulating oocy te activation[J].Science,2003,302:1179.

    [11]Lee B C,Kim M K,Jang G,et al.Dog cloned form adult somatic cells[J].Nature,2005,436:641.

    [12]Kato Y,T ani T,T sunoda Y.Cloning of calves from various somatic cell ty pes of male and female adult,newborn and fetal cows[J].J Reprod Fertil,2000,120:231-223.

    [13]楊素芳,石德順,韓 杰,等.供體核種類對水牛核移植效果的影響[J].廣西農(nóng)業(yè)生物科學,2004,23(3):233-237.

    [14]Betts D H,Bo rdignon V,Hill J R,et al Reprogramming of telomerase activity and rebuilding of telomere length in cloned cattle[J].Proc Natl Acad Sci USA,2001,98(3):1077-1082.

    [15]Cibelli J B,Stice S L,Golueke P J,et al.Cloned transgenic calves produced from nonquiescent fetal fibroblasts[J].Science,1998,289:1256-1258.

    [16]Beyhan Z,Mitalipova M,Chang T C.First donor cell passage,starvation period and fusion-activation interval affect preimplantation development of bovine nuclear transfer embryos[J].T heriogenology,2002,57:396-402.

    [17]Ono Y,Shimozawa N,Ito M,et al.Cloned mice from fetal fibroblast cells arrested at metaphase by a serial nuclear transfer[J].Biology of Reproduction,2001,64:44-50.

    [18]Kasinathan P,Knot t J G,M oreira P N,et al.Effect of fibroblast donor cell age and cell cycle on development of bovine nuclear transfer embryos in vitro[J].Biol Reprod,2001,64(5):1487-1493.

    [19]Arat S,Rzucidlo S J,Gibbons J,et al.Production of transgenic bovine embryos by transfer of transfected g ranulose cells into enucleated oocy tes[J].Mol Reprod Dev,2001,60(1):20-26.

    [20]嚴興榮,雷安民 .小鼠不同卵齡卵母細胞紡錘體位置及對去核率的影響[J].中國農(nóng)學通報,2005(5):88.

    [21]崔奎青,石德順,楊素芳.兔卵母細胞去核方法的研究[J].遺傳繁育,2005,32(7):33.

    猜你喜歡
    卵丘克隆技術體細胞
    AREG對綿羊卵丘細胞葡萄糖代謝的影響
    浙江:誕生首批體細胞克隆豬
    新型冠狀病毒入侵人體細胞之謎
    科學(2020年4期)2020-11-26 08:27:10
    用馬克思主義的觀點來看待生殖性克隆技術
    新生代(2019年3期)2019-11-14 09:13:35
    卵丘細胞對豬卵母細胞成熟及發(fā)育的影響
    內皮前體細胞亞型與偏頭痛的相關性分析
    非洲菊花托的體細胞胚發(fā)生及植株再生
    科研應拒絕短視行為
    卵丘細胞在卵母細胞發(fā)育過程中的作用
    卵母細胞授精前剝除部分卵丘細胞對體外受精-胚胎移植結局的影響
    久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 九草在线视频观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 性少妇av在线| 午夜日本视频在线| 最近中文字幕2019免费版| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 高清黄色对白视频在线免费看| 十八禁网站网址无遮挡| 97在线人人人人妻| 欧美 日韩 精品 国产| a级毛片黄视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 大码成人一级视频| 国产一区二区三区av在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 热99久久久久精品小说推荐| 啦啦啦 在线观看视频| 久久av网站| 精品人妻在线不人妻| 久久久久精品人妻al黑| 老司机影院毛片| 成人免费观看视频高清| 青春草国产在线视频| 看免费av毛片| 黄片无遮挡物在线观看| 国产在线视频一区二区| 亚洲久久久国产精品| 熟妇人妻不卡中文字幕| 丁香六月欧美| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久99一区二区三区| 蜜桃在线观看..| 国产 精品1| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲精品国产av成人精品| 国产免费视频播放在线视频| 黄片播放在线免费| 国产精品一区二区在线不卡| 黑人欧美特级aaaaaa片| 成人漫画全彩无遮挡| av一本久久久久| videosex国产| 丁香六月天网| 亚洲三区欧美一区| 一本大道久久a久久精品| 国精品久久久久久国模美| 国产片内射在线| 免费不卡黄色视频| 两性夫妻黄色片| 国产成人精品久久久久久| 欧美人与善性xxx| 国产一区有黄有色的免费视频| 韩国高清视频一区二区三区| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产精品女同一区二区软件| 久久久久视频综合| 亚洲天堂av无毛| 人成视频在线观看免费观看| 女人久久www免费人成看片| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产精品一二三区在线看| 久久精品国产综合久久久| 黄片播放在线免费| 丰满乱子伦码专区| 一区二区av电影网| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费观看av网站的网址| 亚洲第一青青草原| 丁香六月天网| 成年av动漫网址| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 99热网站在线观看| 91国产中文字幕| 母亲3免费完整高清在线观看| 99国产综合亚洲精品| 成人午夜精彩视频在线观看| 日本欧美视频一区| 伊人久久国产一区二区| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品中文字幕在线视频| 曰老女人黄片| 曰老女人黄片| 热99国产精品久久久久久7| 欧美日韩av久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| netflix在线观看网站| 高清不卡的av网站| 成人影院久久| av国产精品久久久久影院| 久久久久精品国产欧美久久久 | 青青草视频在线视频观看| 日日撸夜夜添| 日本色播在线视频| 操出白浆在线播放| 久久性视频一级片| 久久99精品国语久久久| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 午夜福利免费观看在线| 午夜福利网站1000一区二区三区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 丝袜人妻中文字幕| 日本午夜av视频| 极品人妻少妇av视频| 99香蕉大伊视频| e午夜精品久久久久久久| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品国产国语对白av| 欧美国产精品va在线观看不卡| 一区二区三区激情视频| 丝袜在线中文字幕| 999久久久国产精品视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美精品亚洲一区二区| 日本欧美国产在线视频| 国产1区2区3区精品| 日日爽夜夜爽网站| 咕卡用的链子| 老司机亚洲免费影院| 日韩 亚洲 欧美在线| 老司机在亚洲福利影院| 韩国av在线不卡| 久久精品国产a三级三级三级| av在线老鸭窝| 人妻 亚洲 视频| 免费看不卡的av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 精品亚洲成国产av| 亚洲五月色婷婷综合| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 看免费av毛片| 啦啦啦在线免费观看视频4| 人人澡人人妻人| av在线播放精品| 男男h啪啪无遮挡| 日本欧美国产在线视频| 热re99久久精品国产66热6| 国产日韩欧美视频二区| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲精品国产区一区二| 999久久久国产精品视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲男人天堂网一区| 看十八女毛片水多多多| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 亚洲七黄色美女视频| 久久免费观看电影| 国产精品无大码| 久久这里只有精品19| 一级片'在线观看视频| 青青草视频在线视频观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产人伦9x9x在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 精品少妇内射三级| 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品第二区| 亚洲av综合色区一区| 丁香六月天网| 免费在线观看完整版高清| 久久毛片免费看一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 亚洲久久久国产精品| 欧美激情极品国产一区二区三区| 婷婷色麻豆天堂久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| av在线播放精品| 青春草国产在线视频| 1024香蕉在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 婷婷色麻豆天堂久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 男女边吃奶边做爰视频| 咕卡用的链子| 999精品在线视频| 波多野结衣av一区二区av| 91精品三级在线观看| 香蕉丝袜av| 成人国产麻豆网| 大码成人一级视频| xxxhd国产人妻xxx| 曰老女人黄片| 乱人伦中国视频| 国产在线免费精品| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲av日韩在线播放| 女人久久www免费人成看片| 99国产综合亚洲精品| 69精品国产乱码久久久| 七月丁香在线播放| 国产视频首页在线观看| 嫩草影院入口| 曰老女人黄片| 国产一级毛片在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 少妇精品久久久久久久| 蜜桃在线观看..| 国产av精品麻豆| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 免费在线观看黄色视频的| 少妇人妻久久综合中文| 中国国产av一级| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲av综合色区一区| 免费少妇av软件| 国产成人精品福利久久| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产 一区精品| 亚洲欧洲日产国产| 观看美女的网站| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产精品久久久久久精品古装| 中文字幕亚洲精品专区| 纯流量卡能插随身wifi吗| videos熟女内射| 欧美老熟妇乱子伦牲交| av有码第一页| 亚洲精品aⅴ在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 丰满乱子伦码专区| 午夜福利视频精品| 午夜激情av网站| 如何舔出高潮| 欧美在线黄色| 深夜精品福利| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99久久精品国产亚洲精品| 两个人看的免费小视频| www.精华液| 综合色丁香网| 精品国产国语对白av| 韩国av在线不卡| 久久久久久久国产电影| 宅男免费午夜| 成人毛片60女人毛片免费| 欧美精品一区二区免费开放| 国产成人91sexporn| 青青草视频在线视频观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 伦理电影大哥的女人| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一级毛片 在线播放| √禁漫天堂资源中文www| 国产成人免费无遮挡视频| 水蜜桃什么品种好| 成年av动漫网址| 午夜福利乱码中文字幕| 国产高清不卡午夜福利| 一级片免费观看大全| 人人妻人人澡人人看| 国产精品欧美亚洲77777| 色播在线永久视频| 亚洲熟女毛片儿| 日本欧美视频一区| 亚洲成人av在线免费| 少妇被粗大猛烈的视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲色图综合在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 90打野战视频偷拍视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 综合色丁香网| 国产精品一二三区在线看| 秋霞伦理黄片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 极品人妻少妇av视频| 久久青草综合色| 亚洲精品第二区| avwww免费| 国产精品一区二区在线观看99| 看非洲黑人一级黄片| www.熟女人妻精品国产| 2021少妇久久久久久久久久久| 一个人免费看片子| 成人亚洲精品一区在线观看| 99热国产这里只有精品6| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 嫩草影视91久久| 亚洲在久久综合| 久久99精品国语久久久| 高清av免费在线| 亚洲综合精品二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 制服人妻中文乱码| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 极品人妻少妇av视频| 好男人视频免费观看在线| 国产成人系列免费观看| 国产免费福利视频在线观看| 国产麻豆69| av在线播放精品| 亚洲精品中文字幕在线视频| 午夜福利,免费看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产在线一区二区三区精| 欧美最新免费一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 午夜福利视频精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产一卡二卡三卡精品 | 哪个播放器可以免费观看大片| 观看美女的网站| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲国产日韩一区二区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 黄色视频在线播放观看不卡| 在线观看一区二区三区激情| 国产精品av久久久久免费| 日韩大片免费观看网站| av国产久精品久网站免费入址| www.自偷自拍.com| 精品少妇黑人巨大在线播放| 18在线观看网站| 久久久久精品国产欧美久久久 | 国产一卡二卡三卡精品 | 激情五月婷婷亚洲| 亚洲成人一二三区av| 天天添夜夜摸| 久久久国产一区二区| 亚洲一区中文字幕在线| 日韩电影二区| 亚洲精品视频女| 久久青草综合色| 九九爱精品视频在线观看| 欧美在线一区亚洲| 国产视频首页在线观看| 日日啪夜夜爽| 久久99精品国语久久久| 色播在线永久视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产男女超爽视频在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 欧美精品av麻豆av| 国产精品免费视频内射| 国产av一区二区精品久久| 一区二区三区精品91| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 人体艺术视频欧美日本| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产精品99久久99久久久不卡 | 少妇人妻久久综合中文| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 人成视频在线观看免费观看| 国产99久久九九免费精品| 精品一区二区三卡| 日本色播在线视频| 久久韩国三级中文字幕| 精品一品国产午夜福利视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产亚洲av高清不卡| 国产一卡二卡三卡精品 | 精品午夜福利在线看| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 只有这里有精品99| 色视频在线一区二区三区| 国产精品久久久久久精品古装| 国产精品二区激情视频| 欧美日韩视频精品一区| 国产av国产精品国产| 成年av动漫网址| 免费观看av网站的网址| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产精品国产av在线观看| 十八禁人妻一区二区| 日本av手机在线免费观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 七月丁香在线播放| 老司机影院成人| 热99久久久久精品小说推荐| 91aial.com中文字幕在线观看| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产亚洲最大av| 18禁观看日本| 天堂中文最新版在线下载| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 成年人免费黄色播放视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产国语露脸激情在线看| 午夜激情av网站| 在线天堂中文资源库| 日韩av免费高清视频| 妹子高潮喷水视频| 色网站视频免费| av一本久久久久| 秋霞在线观看毛片| 国产熟女欧美一区二区| 一边亲一边摸免费视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 在线天堂中文资源库| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲中文av在线| 亚洲欧洲日产国产| 午夜精品国产一区二区电影| 国产伦人伦偷精品视频| 搡老乐熟女国产| 国产亚洲精品第一综合不卡| 婷婷色麻豆天堂久久| av国产久精品久网站免费入址| 精品国产一区二区三区四区第35| av在线观看视频网站免费| 嫩草影院入口| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品av麻豆狂野| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲天堂av无毛| 91精品伊人久久大香线蕉| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 毛片一级片免费看久久久久| 在线观看一区二区三区激情| 男人操女人黄网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产成人精品福利久久| 成人三级做爰电影| 亚洲精品第二区| 欧美日韩综合久久久久久| 伦理电影免费视频| 免费看av在线观看网站| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 精品久久久精品久久久| 日韩一区二区视频免费看| 青草久久国产| 丝袜美足系列| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产一区二区三区av在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| 中文字幕最新亚洲高清| 男女午夜视频在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 90打野战视频偷拍视频| 欧美另类一区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 午夜老司机福利片| 久久热在线av| 97在线人人人人妻| 国产精品 国内视频| 丝袜美足系列| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久这里只有精品19| 秋霞在线观看毛片| 国产男女超爽视频在线观看| 在线观看国产h片| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 成人手机av| 成人亚洲欧美一区二区av| 十分钟在线观看高清视频www| 久久人人爽人人片av| 99国产综合亚洲精品| 91老司机精品| 日韩电影二区| 亚洲美女视频黄频| 秋霞在线观看毛片| av.在线天堂| 黄片播放在线免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 交换朋友夫妻互换小说| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品一区二区在线不卡| 美女中出高潮动态图| 亚洲精品乱久久久久久| 嫩草影视91久久| 青草久久国产| 国产精品一区二区精品视频观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 色播在线永久视频| www.av在线官网国产| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产色婷婷99| 国产麻豆69| 纯流量卡能插随身wifi吗| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲,欧美精品.| 日韩av免费高清视频| tube8黄色片| 性少妇av在线| 男人舔女人的私密视频| 久久性视频一级片| 国产亚洲av高清不卡| 中文天堂在线官网| 亚洲四区av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 九色亚洲精品在线播放| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲精品日本国产第一区| 免费观看人在逋| 午夜91福利影院| 在线天堂中文资源库| 成人漫画全彩无遮挡| 久久久欧美国产精品| 午夜久久久在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 女人精品久久久久毛片| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品免费视频内射| 永久免费av网站大全| 超碰成人久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 中文字幕av电影在线播放| 人妻一区二区av| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩欧美一区视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 免费不卡黄色视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 日本一区二区免费在线视频| 18禁观看日本| 性少妇av在线| 亚洲成人一二三区av| 天堂中文最新版在线下载| 精品久久久精品久久久| 国产成人精品无人区| 国产精品免费视频内射| 欧美日韩视频精品一区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲,欧美精品.| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 黄片小视频在线播放| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲在久久综合| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 宅男免费午夜| 黑人猛操日本美女一级片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 成人三级做爰电影| 亚洲国产看品久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| svipshipincom国产片| 少妇被粗大的猛进出69影院| 黑人猛操日本美女一级片| 国产av一区二区精品久久| 精品一区在线观看国产| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产片内射在线| 久久狼人影院| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 日日爽夜夜爽网站| 啦啦啦 在线观看视频| netflix在线观看网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产日韩欧美视频二区| 观看av在线不卡| 丝袜在线中文字幕| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 99久久人妻综合| 中国三级夫妇交换| 国产又爽黄色视频| 午夜久久久在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久ye,这里只有精品| 久久av网站| 高清不卡的av网站| 国产精品.久久久| 亚洲国产最新在线播放| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 人妻人人澡人人爽人人| 大话2 男鬼变身卡| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 99热全是精品| 制服诱惑二区| 韩国精品一区二区三区| 亚洲免费av在线视频| 美女午夜性视频免费| 一级毛片电影观看|