奧沙利鉑原料藥3種含量測(cè)定方法比較

費(fèi)瑞娟，陳祥峰，任 鳳

（1.江蘇省電業(yè)職工療養(yǎng)院，江蘇無(wú)錫 214164；2.江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，江蘇南京 211112）

奧沙利鉑原料藥3種含量測(cè)定方法比較

費(fèi)瑞娟1，陳祥峰2，任 鳳2

（1.江蘇省電業(yè)職工療養(yǎng)院，江蘇無(wú)錫 214164；2.江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，江蘇南京 211112）

目的：建立奧沙利鉑原料藥的含量測(cè)定方法。方法：采用反相高效液相色譜法測(cè)定奧沙利鉑原料藥的含量，并與UV法及熾灼殘?jiān)ㄟM(jìn)行比較。結(jié)果：3種檢測(cè)方法均具可行性。結(jié)論：高效液相色譜法測(cè)定干擾小，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確。

奧沙利鉑；HPLC；含量測(cè)定

奧沙利鉑(Oxaliplatin)為為繼順鉑、卡鉑之后，由法國(guó)Sanofi Winthrop公司開(kāi)發(fā)，并于1996年首次在法國(guó)上市的第三代鉑類(lèi)抗癌藥物[1]。該藥是對(duì)結(jié)、直腸轉(zhuǎn)移癌，尤其是對(duì)耐氟尿嘧啶的結(jié)、直腸癌有較好療效的第一個(gè)鉑類(lèi)藥物。2004年1月FDA批準(zhǔn)了奧沙利鉑聯(lián)合方案作為晚期結(jié)直腸癌的一線(xiàn)方案[2]。此外Missct JL[3]報(bào)道，奧沙利鉑對(duì)卵巢癌、淋巴瘤、非小細(xì)胞肺癌、頭頸部腫瘤也有比較客觀(guān)的療效[4]。本文主要依據(jù)奧沙利鉑分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)并參照文獻(xiàn)資料以及中國(guó)藥典2000年版二部上原料藥的有關(guān)規(guī)定及新藥(西藥)的審批要求進(jìn)行[5]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10A高效液相色譜儀系統(tǒng)（包括LC-10AT泵，SPD-10A紫外檢測(cè)器，C-R6A色譜數(shù)據(jù)處理儀）、756MC紫外分光光度儀（上海第三分析儀器廠(chǎng)）。

1.2 試藥

甲醇（色譜純）、奧沙利鉑（合肥海通藥物研究所，980807、980811、980815）、對(duì)照品（上述奧沙利鉑原料經(jīng)重結(jié)晶三次，經(jīng)檢查符合奧沙利鉑對(duì)照品暫訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)）。

2 方法與結(jié)果

2.1 高效液相色譜法(HPLC)

2.1.1 色譜條件

色譜柱：C18柱，150×4.6 mm，5 μm（phnomenex U.S.A）；流動(dòng)相：甲醇-水(5∶95)；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；流速：1 ml/min；進(jìn)樣量：20 μl。

2.1.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按上述色譜條件，分別量取含量測(cè)定項(xiàng)下對(duì)照品溶液及供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀，理論板數(shù)按奧沙利鉑峰計(jì)算不低于3000。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

取奧沙利鉑對(duì)照品適量(約18 mg)，精密稱(chēng)定，置25 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 1、2、3、4、5 ml于 10 ml量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，奧沙利鉑峰峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為：A=20778.0C-250.3，r=0.999 7，表明奧沙利鉑在1.384～6.920 μg范圍內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系。

2.1.4 進(jìn)樣精密度

取奧沙利鉑適量，配制一樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算精密度RSD為0.39%。

2.1.5 精密度試驗(yàn)

取同一批號(hào)奧沙利鉑原料5份，約20 mg，精密稱(chēng)定，置100 ml量瓶中，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，并計(jì)算奧沙利鉑的含量，結(jié)果奧沙利鉑峰面積的RSD為0.18%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.1.6 含量測(cè)定

取本品約20 mg，精密稱(chēng)定，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取奧沙利鉑對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，同法制成每1毫升中約含奧沙利鉑0.2 mg的溶液為對(duì)照品溶液。分別量取供試品及對(duì)照品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定奧沙利鉑峰峰面積，計(jì)算即得，測(cè)定本品三批（980807、980811、980815）的含量分別為 99.72%，103.1%，101.1%。

2.2 紫外分光光度法(UV法)

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

取奧沙利鉑對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用水溶解，制成每1毫升約含奧沙利鉑0.5 mg的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，精密量取標(biāo)準(zhǔn)貯備液 1、3、5、7、10 ml，置 25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照紫外分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄ⅣA)于250 nm波長(zhǎng)處，測(cè)定各溶液的吸收度，以?shī)W沙利鉑濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸收度(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為A=-0.00282+0.00664 C，r=0.999 9。結(jié)果顯示奧沙利鉑在18.56～185.6 μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.2 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)項(xiàng)下的標(biāo)準(zhǔn)溶液置室溫下，立即測(cè)定，并分別在 1、2、4、6、8 h 及 1、2、3、4 d 測(cè)定溶液的吸收度， 以 0 小時(shí)的吸收值為100%計(jì)算4 d內(nèi)溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示日內(nèi)差的RSD為0.15%，日間差的RSD為0.13%，溶液在4 d內(nèi)吸收度沒(méi)有明顯的變化。

2.2.3 精密度試驗(yàn)

2.2.3.1 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)奧沙利鉑原料5份，約25 mg，精密稱(chēng)定，置50 ml量瓶中，加水振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液5 ml置25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定各樣品中奧沙利鉑的含量，結(jié)果含量測(cè)定的平均值為99.61%，RSD為0.20%，表明本方法的重現(xiàn)性良好。

2.2.3.2 中間精密度 分別于不同時(shí)間和不同的儀器上，照含量測(cè)定項(xiàng)下方法進(jìn)行同一批號(hào)樣品（批號(hào)：980807）的含量測(cè)定，測(cè)得平均含量為（99.42±0.15）%，RSD 為 0.15%。

2.2.4 含量測(cè)定

取本品約25 mg，精密稱(chēng)定，置50 ml量瓶中，加水適量振搖（或超聲）使溶解，并定容至刻度，搖勻，精密量取5 ml置25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取奧沙利鉑對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，同法制成每1毫升中約含奧沙利鉑100 μg的溶液為對(duì)照品溶液，照分光光度法（中國(guó)藥典2000年版二部附錄ⅣA）于250 nm波長(zhǎng)處測(cè)定供試品及對(duì)照品溶液的吸收度，計(jì)算，得本品三批樣品（980807、980811、980815）測(cè)定結(jié)果分別為 99.56%、99.43%、99.27%。

2.3 熾灼殘?jiān)?/h3>

2.3.1 精密度試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品(批號(hào):980807)5份，精密稱(chēng)定，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法操作，計(jì)算含量，測(cè)定結(jié)果奧沙利鉑峰面積的RSD為0.68%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.3.2 含量測(cè)定

取本品約1.0 g，照中國(guó)藥典2000年版二部附錄ⅧN熾灼殘?jiān)鼨z查法操作，置已熾灼至恒重的坩鍋中，精密稱(chēng)定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫，在400℃熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷至室溫，精密稱(chēng)定后，再在400℃熾灼至恒重，測(cè)得本品 3 批（980807，980811，980815）的含量為 99.65%，99.95，99.42%。

3 討論

分別采用高效液相色譜法（HPLC）[6]、紫外分光光度法（UV）和熾灼殘?jiān)ㄟM(jìn)行本品含量測(cè)定。奧沙利鉑分子結(jié)構(gòu)內(nèi)存在共軛體系，在紫外光區(qū)有明顯的特征吸收，因此可采用紫外分光光度法測(cè)定本品含量。中國(guó)藥典2000年版二部收載的順鉑為本品的同類(lèi)化合物，其含量測(cè)定采用熾灼殘?jiān)姆椒?，因此可采用此方法進(jìn)行本品的含量測(cè)定。結(jié)果顯示：3種方法的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異。

考慮到本品為原料藥，且高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定干擾較小，因此推薦選用高效液相色譜法進(jìn)行本品的含量測(cè)定。

[1]郭德嵩.第三代鉑類(lèi)抗癌藥物奧沙利鉑的研究進(jìn)展[J].國(guó)外醫(yī)學(xué):藥學(xué)分冊(cè),1999,26(1):4-5,7．

[2]張文.晚期結(jié)直腸癌的化療進(jìn)展[J].中國(guó)癌癥雜志,2004,14(4):380．

[3]Missct JL.Oxaliolatin in practice[J].Br J Cancer,1998,77(Suppl4):S4-S7．

[4]任鵬，孫堅(jiān)彤，沈云玉,等.反相高效液相色譜法測(cè)定奧沙利鉑的含量[J].抗感染藥學(xué),2005,2(1):24-26.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄 XI,XA1．

[6]田琳.HPLC法測(cè)定注射用奧沙利鉑主藥含量[J].中外醫(yī)療,2009,28(14):14.

Determination of Oxaliplatin by three methods

FEI Ruijuan1,CHEN Xiangfeng2,REN Feng2
(1.Jiangsu employee arcadia resorts of electricity power,Jiangsu Province,Wuxi214164,China;2.Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co.,Ltd,Jiangsu Province,Nanjing 211112,China)

Objective:To develop a method for determining the content of oxaliplatin.Methods:RP-HPLC,UV and residue on ignition method were used to determine oxaliplaitin,respectively,and the results were compared with each other..ResultsAll the three mothods were feasible for determining oxaliplatin.Conclusion:RP-HPLC method is simple and more accurate.

Oxaliplatin；HPLC；Content

R943

B

1674-4721（2010）12（a）-057-02

2010-10-29）