頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定鹽酸地芬尼多原料藥中有機(jī)溶劑的殘留量

宋更申，曹鳳習(xí)，閆凱，姜建國(河北省藥品檢驗(yàn)所，石家莊市050011)

鹽酸地芬尼多(Difenidol hydrochloride)是臨床上常用的抗暈止吐藥，用于治療高血壓、美尼爾氏綜合征等引起的眩暈癥，口服吸收迅速，療效確切。鹽酸地芬尼多在合成過程中，使用了乙醇、異丙醇、四氫呋喃等有機(jī)溶劑，這些溶劑會對人體健康和環(huán)境造成危害，控制其殘留量對保證藥品質(zhì)量和用藥安全有重要意義。關(guān)于鹽酸地芬尼多殘留溶劑的研究，尚未見文獻(xiàn)報道。本文根據(jù)藥品注冊的國際技術(shù)要求·質(zhì)量部分(ICH)[1]的指導(dǎo)原則和《中國藥典》2010年版[2]的相關(guān)規(guī)定，并參考有關(guān)文獻(xiàn)[3，4]，采用頂空氣相色譜法，以二甲亞砜為溶解介質(zhì)，同時測定上述3種溶劑。結(jié)果表明，該方法操作簡便，精密度好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

6890型氣相色譜儀、7694E型頂空進(jìn)樣器、B.02.01-SR1工作站(美國Agilent公司)；BP 211D型電子天平(德國Sartorius公司)。

鹽酸地芬尼多原料藥(江蘇四環(huán)生物股份有限公司，批號:071122、071215、071225，含量:99.8%、99.7%、99.9%)；乙醇、異丙醇、四氫呋喃均為色譜純(天津光復(fù)精細(xì)化工廠)；試驗(yàn)用水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-624毛細(xì)管柱(60 m×530 μm×3 μm)，柱溫:85℃；氫火焰離子化檢測器(FID)，檢測器溫度:250℃；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度:150℃；載氣:氮?dú)?，流?5.0 mL·min－1；頂空進(jìn)樣，平衡溫度:90℃，平衡時間:30 min，頂空瓶加壓時間:0.2 min，進(jìn)樣時間:1 min，定量環(huán)體積:1 mL，定量環(huán)溫度:100℃，傳輸線溫度:110℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液:精密稱取乙醇250 mg、異丙醇250 mg、四氫呋喃36 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液:精密量取對照品貯備液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液:精密稱取本品約0.25 g，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加二甲亞砜5 mL，密封，振搖使溶解，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下的對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜，見圖1。

圖1結(jié)果表明，3種溶劑分離良好，理論板數(shù)均不低于5000。

2.4 線性關(guān)系

精密稱取四氫呋喃36 mg，置于100 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取10、10、5、5、5、2 mL，分別置于10、25、25、50、100、100 mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻；再精密稱取乙醇250 mg、異丙醇250 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取10、5、5、5、2、0.2 mL，分別置于25、25、50、100、100、100 mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取5 mL，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 3種溶劑線性關(guān)系考察結(jié)果(n＝6)Tab 1Linear ranges of 3 kinds of organic solvents(n＝6)

2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取對照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算乙醇、異丙醇、四氫呋喃的RSD分別為1.0%、0.8%、1.3%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取本品(批號:071122)約0.5 g，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共6份，精密加二甲亞砜5 mL，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，檢出本品中乙醇含量平均為0.02%，RSD＝1.1%；異丙醇為0.02%，RSD＝0.7%；四氫呋喃未檢出。

2.7 中間精密度試驗(yàn)

取批號為071122樣品，由3名不同試驗(yàn)者在不同時間、以不同儀器、采用不同色譜柱測定本品的有機(jī)溶劑殘留量，結(jié)果檢出本品中乙醇?xì)埩袅科骄鶠?.02%，RSD＝1.3%；異丙醇?xì)埩袅科骄鶠?.02%，RSD＝1.7%；四氫呋喃均未檢出。表明本方法中間精密度良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知各溶劑殘留量的樣品(批號:071122)0.5 g，置于20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，共9份，分別精密加入對照品貯備液0.40、0.50、0.60 mL，各3份，再分別用二甲亞砜稀釋至5.0 mL，密封，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，以外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果，乙醇、異丙醇、四氫呋喃的平均回收率分別為99.1%、99.6%、98.5%，RSD分別為0.7%、0.8%、1.3%。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下的對照品溶液，于室溫下放置0、1、2、4、8、12 h，分別按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析。結(jié)果，乙醇、異丙醇、四氫呋喃在12 h內(nèi)測定的峰面積的RSD分別為0.6%、1.1%、1.2%，表明本溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 定量限試驗(yàn)

用逐步稀釋法進(jìn)行測定，以信噪比約為10時計(jì)算乙醇、異丙醇、四氫呋喃的定量限。結(jié)果定量限分別為5.05、3.05、0.91 μg·mL－1。

2.11 樣品中有機(jī)溶劑的殘留量測定

取乙醇、異丙醇、四氫呋喃和3批樣品，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，以外標(biāo)法計(jì)算3種有機(jī)溶劑的殘留量，結(jié)果3批樣品中乙醇的殘留量均為0.02%，異丙醇的殘留量均為0.02%，四氫呋喃均未檢出。

3 討論

試驗(yàn)中先后選擇了HP-1、HP-INNOWax、DB-624等不同極性的色譜柱，結(jié)果以供試品在DB-624上的峰形和分離度最佳。

鹽酸地芬尼多在甲醇中易溶，在乙醇和二甲亞砜中溶解，在水、N，N-二甲基甲酰胺和三氯甲烷中略溶，由于選用頂空進(jìn)樣方式，所以不宜用甲醇作溶解介質(zhì)，故選擇二甲亞砜作溶解介質(zhì)。

試驗(yàn)考察了不同的頂空溫度和頂空平衡時間對樣品測定的影響。結(jié)果表明，樣品在70、80、90℃的頂空溫度下均穩(wěn)定，為了提高檢測靈敏度，本試驗(yàn)選擇90℃作為頂空平衡溫度；由于本品在30、40 min的頂空平衡時間內(nèi)得到的峰面積基本一致，因此本試驗(yàn)選擇30 min作為頂空平衡時間。

本方法3種有機(jī)溶劑的定量限為0.91～5.05 μg·mL－1，靈敏度完全可以滿足鹽酸地芬尼多中有機(jī)溶劑殘留量測定的需要。

ICH[1]和《中國藥典》2010年版[2]都規(guī)定，四氫呋喃屬第2類殘留溶劑，在藥品中應(yīng)限制使用，限度均為0.072%；乙醇、異丙醇屬第3類低毒性溶劑，限度均為0.5%。本試驗(yàn)測得3批樣品中3種有機(jī)溶劑的殘留量均符合ICH和《中國藥典》2010年版的規(guī)定。

[1]周海鈞主譯.藥品注冊的國際技術(shù)要求·質(zhì)量部分[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:343.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(二部)[S].2010年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:63.

[3]宋更申，姜建國，張西如.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定羅庫溴銨中的殘留溶劑[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2009，26(10):849.

[4]李珂珂，譚豐蘋.毛細(xì)管氣相色譜法測定拉米夫定中有機(jī)溶劑的殘留量[J].中國藥房，2007，18(19):1502.