中藥陽起石溫腎作用實(shí)驗(yàn)研究

楊明輝，王久源，張蜀武，楊蘇文，戴德銀，李澤興

（1.中國人民解放軍452醫(yī)院，四川 成都 610021； 2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610061）

陽起石是傳統(tǒng)溫腎壯陽藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“主崩中漏下，破子臟中血，瘕結(jié)氣，寒熱腹痛，無子，陰痿不起，補(bǔ)不足?！盵1]后世本草逐漸突出其溫腎壯陽功效。歷代醫(yī)家也多運(yùn)用單味陽起石或配伍成復(fù)方治療腎陽虛型陽痿、早泄，并推崇為治療陽痿的要藥，“于陽之不能起者，克起”[2]。由于陽起石被大量采用，陽起石偽品在古代就已出現(xiàn)，使得人們對(duì)其藥用價(jià)值和安全性產(chǎn)生了懷疑。孫文倩的局部抽樣調(diào)查發(fā)現(xiàn)，67份陽起石商品藥材鑒定結(jié)果為17種礦物（巖石）[3]。為此，對(duì)于陽起石是否具有溫腎壯陽作用，應(yīng)當(dāng)加以研究，給予科學(xué)評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 儀器、動(dòng)物及試藥

CB 3201型數(shù)字、描記式小動(dòng)物測(cè)定儀（中國川北電子工業(yè)公司）。昆明種小白鼠，雄性，體重（28±5）g，由四川抗生素工業(yè)研究所動(dòng)物房提供。氫化可的松注射液（湖北鄖北制藥廠，批號(hào)為20050109）；陽起石購自成都市中藥材公司，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室、西南冶金地質(zhì)勘探公司地質(zhì)研究所共同鑒定為絹云母化透閃石巖，含鐵透閃石巖，為藥用正品陽起石；黃酒，豌豆淀粉，蒸餾水；男寶（天津力生制藥廠，批號(hào)為200506054）；0.9%氯化鈉注射液（生理鹽水）。補(bǔ)體致敏及未致敏酵母菌藥（1×108/mL），由成都中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。

1.2 試驗(yàn)藥液制備

陽起石末制備[4]：刷凈陽起石表面，砸碎，碎至約1 cm大小，單層，置陶瓷盤中，用箱式電阻爐在700℃恒溫加熱，待樣品變紅時(shí)再煅15～25 min，至紅透時(shí)取出，黃酒淬，反復(fù)煅、淬7次，陽起石與黃酒的比例為5∶1（均按質(zhì)量計(jì)算，以下同），將煅淬后的陽起石陰干，研成細(xì)末，過100目篩，備用。

淀粉溶劑制備：將豌豆淀粉過100目篩，篩后將淀粉溶解于蒸餾水中（事先用燒杯盛好蒸餾水，淀粉均勻投放，自然溶解，淀粉與蒸餾水的比例為3∶100），將燒杯加熱，邊加熱邊用玻棒輕輕攪拌，以溶液沸騰為度，制成淀粉膠體助溶劑。

各藥物混懸液制備：取各種試驗(yàn)藥物，均以淀粉膠體助溶劑為溶劑，配制各種質(zhì)量濃度的藥物混懸液，即高（200 g/L）、低（100 g/L）質(zhì)量濃度的陽起石混懸液及男寶（藥末過100目篩）混懸液（16 g/L）。

1.3 動(dòng)物分組方法

讓小鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下適應(yīng)3 d，隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組（A組）、模型組（B組）、淀粉溶劑試驗(yàn)組（C組）、陽起石高質(zhì)量濃度試驗(yàn)組（D1組）、陽起石低質(zhì)量濃度試驗(yàn)組（D2組）、男寶試驗(yàn)組（E組），每組各12只小鼠。

1.4 陽虛小鼠造模方法

[5]方法，按25 mg/kg劑量，用皮試針管、5號(hào)針頭行小鼠臀部肌肉注射氫化可的松注射液，每天1次，連續(xù)7 d。

1.5 給藥方法

A組每天臀部肌肉注射生理鹽水0.1 mL（與造模時(shí)所給氫化可的松容量相當(dāng)），胃管喂飼生理鹽水0.5 mL；其余各組每天除臀部肌肉注射氫化可的松25 mg/kg外，B組胃管喂飼生理鹽水0.5 mL。各組各試驗(yàn)組灌胃給予相應(yīng)藥物，給藥容積為0.5 mL/d。各組給藥從肌肉注射氫化可的松（或生理鹽水）后第2天開始，共6 d。

1.6 觀察項(xiàng)目及方法

一般狀態(tài)：觀察被毛、姿態(tài)、攝食、活動(dòng)、皮膚溫度變化、死亡情況。

體重變化：于試驗(yàn)前1 d和末次給藥后12 h時(shí)分別稱量小鼠體重。

自主活動(dòng)計(jì)數(shù)：于末次給藥后12 h時(shí)，用數(shù)字、描記式小動(dòng)物測(cè)定儀測(cè)定各組小鼠活動(dòng)情況。在暗環(huán)境下，先將小鼠放入籠內(nèi)適應(yīng)3 min，開動(dòng)秒表，計(jì)數(shù)小鼠5 min內(nèi)籠內(nèi)活動(dòng)次數(shù)。

紅細(xì)胞免疫指標(biāo)測(cè)定：采用紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)試驗(yàn)（RBCC3bRR）和紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)試驗(yàn)（RBC-ICR）測(cè)定[6]。取小鼠尾血1～2滴，加入2 mL生理鹽水中，洗滌離心3次，每次以1000 r/min離心5 min，配成1.25×107/mL的RBC懸液，備用。取兩支試管，每管加入待測(cè)RBC懸液0.075 mL，第1管再加補(bǔ)體致酸酵母菌液（1×108/mL）0.075 mL，均搖勻放入37℃水浴箱中水浴30 min，取出后加生理鹽水0.15 mL混勻，再加0.25%戊二醛0.05 mL，輕輕混勻，取1/3量水平涂片、干燥、瑞氏染色，高倍鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)RBC，以黏附2個(gè)以上酵母菌的RBC為花環(huán)陽性細(xì)胞，算出百分率。第1管為RBC-C3bRR，第2管為RBC-ICR。試驗(yàn)由成都中醫(yī)藥大學(xué)微生物與寄生蟲實(shí)驗(yàn)室協(xié)助完成。

低溫游泳時(shí)間測(cè)定：末次用藥后12 h時(shí)，將小鼠放入8℃水浴箱中（小鼠尾根部用保險(xiǎn)絲纏繞，質(zhì)量占小鼠體重的10%，水深13 cm），記錄小鼠從放入水中至鼠鼻孔不再露出水面的時(shí)間。

2 結(jié)果

一般狀態(tài)：A組小鼠形態(tài)正常，體重增加，活潑，無死亡，皮溫正常。B組小鼠用藥3 d后出現(xiàn)消瘦、豎毛、被毛失去光澤、拱背、蜷縮、尾發(fā)涼，繼之出現(xiàn)被毛枯槁、嗜睡、食欲不振，第5天個(gè)別小鼠開始出現(xiàn)身體發(fā)涼，數(shù)小時(shí)（幾小時(shí)至十幾小時(shí)）后死亡，第6天時(shí)死亡率為25.00%。D1組小鼠用藥第2天出現(xiàn)消瘦，皮毛基本光澤，活動(dòng)較正常，無死亡。D2組小鼠用藥第2天出現(xiàn)消瘦、懶動(dòng)、毛色欠光澤，第4天出現(xiàn)死亡，第6天時(shí)死亡率為25.00%。C組小鼠整個(gè)試驗(yàn)過程中外觀稍差于D1組，比較活潑，死亡1只。E組小鼠外觀稍差于D2組，無死亡。

體重：結(jié)果見表1。可見，與用藥前比較，除A組小鼠體重增加外，其余各組小鼠用藥后體重均有不同程度下降，尤以D1組和D2組下降明顯。

活動(dòng)頻數(shù)：結(jié)果見表1?？梢?，D1組、C組、E組陽虛小鼠活動(dòng)情況明顯改善，尤以D1組突出。

紅細(xì)胞免疫指標(biāo)：結(jié)果見表1?？梢姡虲3b受體花環(huán)率而言，與A組比較，B組明顯不足，而其他各組無明顯差異；與B組比較，D2組小鼠明顯較優(yōu)，D1組、C組、E組也較高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。就免疫復(fù)合物循環(huán)率而言，各組間無明顯差異。

低溫游泳時(shí)間：由表1可見，與A組比較，B組和D2組小鼠低溫游泳時(shí)間明顯縮短（P＜0.01），其他各組縮短較明顯（P＜0.05）；與B組比較，D1組、C組、E組小鼠低溫游泳時(shí)間明顯延長（P＜0.05）。

表1 中藥陽起石溫腎作用實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果（）

表1 中藥陽起石溫腎作用實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果（）

注：與 A 組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01；與 B組比較，□P＜0.05，■P＜0.01；與 C組比較，○P＜0.05，●P＜0.01。

組別低溫游泳時(shí)間（s）給藥 紅細(xì)胞免疫指標(biāo)（%）活動(dòng)頻數(shù)（次）動(dòng)物死亡數(shù)（只） 體重增加（g）A 組（n=12）B 組（n=12）C 組（n=12）D1組（n=12）D2組（n=12）E 組（n=12）藥物生理鹽水氫化可的松淀粉溶劑陽起石陽起石男寶途徑胃管喂飼肌肉注射胃管喂飼胃管喂飼胃管喂飼胃管喂飼劑量等容量25 mg/kg等容量5 mg/kg 2.5 mg/kg 0.4 mg/kg 0310302.090±1.21-1.420±1.44▲-1.309±0.76▲-3.760±1.24▲□●-3.540±1.97▲●-2.27±1.11▲447.0±37274.0±23▲343.0±26■398.7±12□279.0±51▲●388.0±30□RBC-C3bRR 16.29±5.389.29±1.93△13.41±5.9815.29±7.5114.71±2.81■12.71±5.85 RBC-ICR 13.14±5.3114.43±2.2614.57±4.4715.71±6.2011.14±6.6311.43±3.4692.14±26.245.64±13.2▲57.84±19.4△□60.84±14.1△□48.64±12.1▲62.5±23.1△□

3 討論

利用腎上腺皮質(zhì)激素造成“陽虛”動(dòng)物模型在國內(nèi)已有30多年的歷史。對(duì)每只小鼠以大劑量（0.5～1.0 mg/d）氫化可的松肌肉注射后，5 d左右出現(xiàn)形寒、萎靡、蜷縮、毛色不光潔現(xiàn)象；陽虛小鼠肝脾體積縮小，顏色較淡，特別是脾臟體積只有正常對(duì)照組小鼠的1/4～1/5，肝脾組織結(jié)構(gòu)、組織化學(xué)均發(fā)生了改變[6]。臨床上陽虛患者表現(xiàn)為形寒肢冷、畏縮懶言、舌體胖淡、脈沉細(xì)，病理解剖檢查多顯示其有組織退化及垂體、腎上腺、睪丸、卵巢等各種內(nèi)分泌腺質(zhì)量下降[7]。陽虛動(dòng)物模型也可見到細(xì)胞免疫功能降低。本試驗(yàn)中，模型組與正常對(duì)照組的紅細(xì)胞免疫情況存在明顯差異，與臨床報(bào)道[8-9]相吻合。因此，腎上腺皮質(zhì)激素造成的“陽虛”小鼠模型與人的“陽虛”表現(xiàn)極為相似，且用助陽藥特別是溫腎陽藥后可得到部分糾正，故尤其類似“腎陽虛”。本試驗(yàn)中，應(yīng)用氫化可的松25 mg/kg造成小鼠陽虛模型，模型組第3天即出現(xiàn)瘦削、蜷縮、皮膚松弛、毛色不潔等虛寒表現(xiàn)，死亡率達(dá)25.00%，活動(dòng)頻數(shù)、體重、低溫游泳時(shí)間、紅細(xì)胞免疫指數(shù)明顯降低，說明造模成功。但由于經(jīng)費(fèi)原因，尚未作有關(guān)組織結(jié)構(gòu)、組織化學(xué)指標(biāo)的比較。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，陽起石高質(zhì)量濃度組對(duì)陽虛小鼠觀察指標(biāo)改善情況優(yōu)于陽起石低質(zhì)量濃度組，初步說明陽起石具有溫補(bǔ)腎陽作用，但要?jiǎng)┝枯^大時(shí)才能起效；同時(shí)要注意，陽起石對(duì)體重有負(fù)面影響，原因有待進(jìn)一步研究。

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