反相高效液相色譜法測(cè)定血府逐瘀口服液中柚皮苷含量

胡安青

（江蘇省鎮(zhèn)江藥品檢驗(yàn)所，江蘇 鎮(zhèn)江 212003）

血府逐瘀口服液[1]由桃仁、紅花、枳殼等11種中藥組方，功能活血化瘀、行氣止痛，柚皮苷為枳殼的主要有效成分。筆者采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測(cè)定產(chǎn)品中柚皮苷含量，進(jìn)一步提高了藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

AG135型電子天平（瑞士梅特勒）；紫外分光光度計(jì)（日本島津）；Waters2695型高效液相色譜儀，包括 Waters2696型 DAD，empowera工作站（美國Waters）。柚皮苷對(duì)照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110722-200309）；乙腈為色譜純；水為純化水；血府逐瘀口服液（吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)分別為0810013，0809002，0804005）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈 - 水 （21 ∶81）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長：283 nm。理論塔板數(shù)7054，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取柚皮苷對(duì)照品5.03 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對(duì)照品貯備液（每1 mL含柚皮苷201.2μg），再精密量取貯備液2 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（每1 mL含柚皮苷20.12μg）。取樣品5支，精密量取3 mL，置分液漏斗中，用水飽和正丁醇振搖提取5次，每次15 mL，合并正丁醇液，用水洗滌2次，正丁層蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，并轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻過濾，用微孔濾膜（0.45μm）過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例稱取除枳殼外的其他11味藥，同法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別精密量取柚皮苷對(duì)照品貯備液（201.2μg/mL）1，2，3，4，5 mL，置 20 mL 量瓶中，定容，搖勻，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=16.891 X-1.45，r=0.9999（n=5），質(zhì)量濃度線性范圍為10.05～50.25μg/mL。

精密度試驗(yàn)：取柚皮苷對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積的 RSD 為0.4% （n=5）。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取樣品依法測(cè)定。結(jié)果平均含量為1.69 mg/支，RSD 為 0.6% （n=5）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液室溫放置10 h，每隔一段時(shí)間進(jìn)樣。結(jié)果峰面積平均值為1715，RSD為0.3%。

加樣回收試驗(yàn)：取6份已知含量的樣品（批號(hào)為0810013）1.5 mL，精密加入柚皮苷對(duì)照品貯備液各4，5，6 mL，分別置50 mL量瓶中，照供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 柚皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取供試品溶液和對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣10μL，讀取峰面積值，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為0810013，070516，070518的樣品中柚皮苷含量分別為1.69，1.70，1.67 mg/mL。

3 討論

通過試驗(yàn)得知柚皮苷在283 nm波長處有較大吸收，其他成分無干擾。曾嘗試甲醇 - 醋酸 -水（35 ∶4 ∶65）[2]、乙腈 -水（30 ∶70）為流動(dòng)相，經(jīng)比較，選用乙腈-水（21∶81）時(shí)峰形及柱效較好。該方法結(jié)果可靠、方法簡便，為血府逐瘀口服液的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

[1]YBZ1172204，國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S].

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：180.