四季感冒片中升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測定

何鴻欽，王二麗，何榮和 ，鄒國華，陳麗卿

（1.同溢堂藥業(yè)有限公司，福建 漳州 363200； 2.漳州衛(wèi)生職業(yè)學院，福建 漳州 363000）

四季感冒片由桔梗、紫蘇葉、陳皮、防風等藥味經(jīng)提取加工制成，具有清熱解表的功效，用于四季風寒感冒[1]。方中防風散風解表，其成分升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為色原酮類化合物[2]，文獻報道具有明顯的解熱、鎮(zhèn)痛及抗炎作用[3]，與本方主治功用一致，故被選作含量測定指標。筆者采用高效液相色譜法測定四季感冒片中升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量，報道如下。

1 儀器與試藥

HP-1100型高效液相色譜儀，包括G1310A泵、G1314 UV檢測器；AG135型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；KQ-500DE型醫(yī)用數(shù)控超聲清洗儀（昆明市超聲儀器有限公司）。升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為111522-200203和111523-200203）；四季感冒片（同溢堂藥業(yè)有限公司，批號分別為031001，031002，031003）；乙腈（色譜純，德國Merck公司）；水為重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈 -水（15 ∶85）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：254 nm；進樣量：10μL。理論板數(shù)按升麻苷峰計算應不低于4000，按5-O-甲基維斯阿米醇苷計算應不低于4500。

2.2 溶液制備

取升麻苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每1 mL含升麻苷0.285 mg的溶液，即得升麻苷對照品溶液。另取5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解，制成每1 mL含5-O-甲基維斯阿米醇苷0.345 mg的溶液，即得5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液。分別移取升麻苷對照品溶液和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液各1 mL，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇溶解，制成每1 mL含升麻苷0.0285 mg和5-O-甲基維斯阿米醇苷0.0345 mg的混合對照品溶液。取本品20片，除去糖衣，研細，取約700 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加20 mL甲醇，振蕩，超聲處理30 min，取出，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10 mL，置25 mL蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘渣加水轉移至10 mL量瓶中，用蒸餾水多次洗滌蒸發(fā)皿，合并洗液，置量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，通過裝量為10 mL柱體積D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑1.0 cm，長15 cm），流速為1.0 mL/min，先以水30 mL洗脫，棄去水液，再用5%乙醇30 mL洗脫，棄去5%乙醇洗脫液，繼續(xù)用30%乙醇60 mL洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，加水溶解，并轉移至10 mL量瓶中，用蒸餾水多次洗滌蒸發(fā)皿，合并洗液至量瓶中，用離子水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。按四季感冒片標準處方量的1%，取除防風外的其他各藥材，按其生產(chǎn)工藝制備防風陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照品溶液，依法進樣。色譜圖見圖1?？梢?，陰性樣品對測定無干擾。

線性關系考察：精密吸取升麻苷對照品溶液（0.0285 g/L）及5-O- 甲基維斯阿米醇苷對照品溶液（0.0345 g/L）各 1，2，4，6，8，10μL，按擬訂的色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標、進樣量為橫坐標繪制標準曲線，得升麻苷回歸方程為 Y=87.756 X+4.4019，r=0.9998（n=6）；5-O- 甲基維斯阿米醇苷回歸方程為 Y=102.43 X-5.6329，r=0.9999（n=6）。結果表明，升麻苷進樣量在0.0285～0.228μg范圍內(nèi)、5-O-甲基維斯阿米醇苷進樣量在0.0345～0.345μg范圍內(nèi)，與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：取同一供試品溶液，連續(xù)進樣6次，依法測定。結果升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷峰峰面積的 RSD分別為0.29% 和 0.42%（n=6），表明儀器具有良好的精密度。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，避光放置，分別于 0，2，4，8，24 h時取樣，依法測定。結果升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量的RSD分別為0.41%和0.76%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)相對穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗：取同一批號的樣品6份，依法制備供試品溶液并測定峰面積，計算含量。結果升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量的 RSD分別為0.43%和0.29%（n=6）。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的同一樣品0.35 g各5份，分別添加升麻苷對照品溶液（0.0285 g/L）4 mL和5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品溶液（0.0794 g/L）1.0 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 加樣回收試驗結果（n=5）

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件測定。結果批號為031001，031002，031003的樣品中，升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總含量分別為0.3040，0.3328，0.3261 mg/片。

3 討論

升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷均可溶于甲醇，故供試品溶液的制備參考2005年版《中國藥典（一部）》中防風含量測定項的方法[4]。但本品除含以上兩種成分外，還含有陳皮苷、連翹苷、桔梗皂苷等多種成分，也均屬于醇溶性成分。筆者發(fā)現(xiàn)，利用甲醇、乙醇超聲提取均能將升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷提出，但乙醇的提取效果不如甲醇，雜質(zhì)較多，色譜干擾大，甲醇提取稍好但也存在干擾，目標成分不能達到基線分離。為此進一步應用大孔吸附樹脂進行純化，使目標成分達到基線分離，結果不僅能減少分離柱系統(tǒng)的污染，而且能保證分離柱有足夠的柱效并延長了使用壽命。曾參考2005年版《中國藥典（一部）》采用甲醇-水系統(tǒng)在同一色譜條件下測定兩種成分的含量[4]，結果不理想，峰形擴散，分離度達不到要求。又參考文獻[5]中兩種流動相系統(tǒng)分別測定兩種成分，結果操作較麻煩。為減少操作步驟，節(jié)約試驗時間，經(jīng)反復試驗，最后選擇乙腈-水（15∶85）為本品的最佳流動相。

采用高效液相色譜法測定升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量，具有簡便、準確、專屬性強等特點，可用于四季感冒片的質(zhì)量控制。

[1]WS3-B-2499-97，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑（第十三冊）[S].

[2]肖永慶，李 麗，楊 濱，等.防風化學成分研究[J].中國中藥雜志，2001，26（2）：117-118.

[3]薛寶云，李 文，李 麗，等.防風色原酮甙類成分的藥理活性研究[J].中國中藥雜志，2000，25（5）：297-299.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學工業(yè)出版社，2005：102.

[5]田 菁，李發(fā)美.HPLC測定感冒清熱顆粒中升麻苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷[J]. 中成藥，2002，24（9）：671-673.