替米沙坦對(duì)胰島素抵抗OLETF大鼠血清單核細(xì)胞趨化蛋白1表達(dá)的影響

姚瑞棟 田鳳石 雒 瑢 趙紫琴 鄭喜蘭

胰島素抵抗（IR）是一種慢性亞臨床炎癥過(guò)程[1]。多種炎性細(xì)胞因子能影響血糖濃度，可能是IR的啟動(dòng)因素。單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）正是重要的炎癥趨化因子之一，本研究旨在觀察血管緊張素Ⅱ1型（AT1）受體阻滯劑替米沙坦對(duì)IR大鼠炎癥因子表達(dá)的影響，并探討AT1受體阻滯劑改善IR新的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 （1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：OLETF（otsuka long－evans tokushima fatty）SPF 級(jí)雄性大鼠 20只，4周齡，體質(zhì)量 150～200 g，購(gòu)自日本大冢研究所。（2）飼料：大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料、高脂飼料，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所。（3）儀器與試劑：全自動(dòng)生化分析儀（德國(guó)ROCHE MODULAR SWA公司）；Stat-Fax 2100型酶標(biāo)儀（美國(guó)Awareness公司）；血糖儀（美國(guó)強(qiáng)生醫(yī)療器材有限公司）；ELISA試劑盒（美國(guó)Calabasas公司）；替米沙坦（北京萬(wàn)生藥業(yè)有限責(zé)任公司）。

1.2 方法

1.2.1 造模與分組 所有大鼠予以高脂飼料分籠喂養(yǎng)（2～4只/籠），自由攝水，明暗周期為 12 h（7：00～19：00），溫度控制在（23±2）℃，相對(duì)濕度（55±5）%，高脂喂養(yǎng) 8周后隨機(jī)均分為2組：模型組（MX）大鼠一直以高脂飼料喂養(yǎng)；替米沙坦組（MT）大鼠在高脂喂養(yǎng)32周后，體質(zhì)量均大于560 g，成功建立了IR動(dòng)物模型[2]，后用替米沙坦[5 mg/（kg·d）]于每天8：00左右灌胃1次，共干預(yù)16周。48周后所有大鼠禁食12 h，用毛細(xì)玻璃管于眼內(nèi)眥靜脈竇采血3 mL，并測(cè)空腹血漿葡萄糖（FBG），離心血清后測(cè)胰島素（FINS）水平。

1.2.2 指標(biāo)檢測(cè) 游離脂肪酸（FFA）、FINS、MCP-1采用ELISA法[3]測(cè)定；FBG采用葡萄糖氧化酶法[4]測(cè)定；血脂采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定；HOMA-胰島素抵抗指數(shù)（HOMAIRI）=（FINS×FBG）÷22.5[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組 FBG、FINS、HOMA-IRI及 MCP-1結(jié)果比較 MT組大鼠行替米沙坦干預(yù)16周后，F(xiàn)BG、FINS、HOMA-IRI及MCP-1水平均顯著低于 MX組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

表12 組大鼠FBG、FINS、HOMA-IRI及MCP-1 比較 （±s）

表12 組大鼠FBG、FINS、HOMA-IRI及MCP-1 比較 （±s）

觹P ＜ 0．05

組別n HOMA-IRI MX MT t 10 10 FBG(mmol/L)15.90±7.11 9.98±5.85 2.90*FINS(mIU/L)28.96±9.49 15.87±4.11 3.95*19.31±8.78 6.55±4.21 4.15*MCP-1(ng/L)43.90±6.73 34.65±7.60 2.88*

2.2 替米沙坦干預(yù)對(duì)IR大鼠FFA、血脂等的影響 MT組大鼠在替米沙坦干預(yù)16周后，F(xiàn)FA、低密度脂蛋白（LDL）、三酰甘油（TG）、膽固醇（TC）均明顯低于MX組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），高密度脂蛋白（HDL）則高于MX組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表 2。

表2 2組大鼠FFA及血脂水平比較 （±s）

表2 2組大鼠FFA及血脂水平比較 （±s）

觹P ＜ 0．05

組別n MX MT t 10 10 FFA(μg/L)5.32±1.84 2.85±0.68 3.97*LDL(mmol/L)1.72±0.46 0.86±0.33 5.65*TG(mmol/L)2.11±0.44 1.25±0.32 4.42*TC(mmol/L)3.48±0.98 2.55±1.18 7.47*HDL(mmol/L)2.11±0.71 2.75±0.39 2.49*

2.3 HOMA-IRI影響因素的相關(guān)分析 MCP-1與HOMA-IR、FFA、TC、TG、LDL、FINS 均呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與HDL、FBG無(wú)相關(guān)性，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表3。

表3 HOMA-IRI影響因素的相關(guān)分析結(jié)果

3 討論

OLETF大鼠自發(fā)持續(xù)高血糖動(dòng)物模型，特點(diǎn)為多食、體質(zhì)量易急劇增加、易患高胰島素血癥、高TG血癥及高血糖癥。IR是大鼠發(fā)生2型糖尿病過(guò)程中的一個(gè)重要的病理生理過(guò)程，與人類2型糖尿病發(fā)生發(fā)展進(jìn)程相似。Leinonnen等[6]證明IR患者M(jìn)CP-1、CRP、IL-6及TNF-a等炎癥因子水平較正常對(duì)照組明顯升高，認(rèn)為細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與IR發(fā)病過(guò)程密切相關(guān)，在IR的發(fā)病機(jī)制中起誘導(dǎo)作用。

本研究中,經(jīng)替米沙坦處理后大鼠HOMA-IRI、FFA、TG、TC及LDL水平均明顯降低，HDL水平明顯增高，提示替米沙坦改善IR的作用與其對(duì)血脂的調(diào)節(jié)有關(guān)，機(jī)制與調(diào)節(jié)細(xì)胞脂肪因子有關(guān)[7]；相關(guān)分析中 OLETF大鼠血清MCP-1水平與FINS、HOMA-IRI、FFA、TC、TG 及 LDL 均呈正相關(guān)，提示MCP-1水平與IR發(fā)生密切相關(guān)，上述因子共同參與了IR發(fā)生發(fā)展過(guò)程；替米沙坦組OLETF大鼠血清MCP-1表達(dá)水平顯著低于模型組，提示替米沙坦通過(guò)抑制IR大鼠血清MCP-1的表達(dá)改善機(jī)體IR。MCP-1是一種胰島素反應(yīng)因子,其誘發(fā)IR的可能機(jī)制：（1）胰島素促進(jìn)MCP-1的表達(dá)和分泌。Sell等[8]研究發(fā)現(xiàn)MCP－1下調(diào)成熟脂肪組織中的脂蛋白脂酶（LPL）及其他脂肪來(lái)源基因表達(dá)，抑制了脂肪細(xì)胞對(duì)外源性脂質(zhì)的攝入，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂肪分解，使FFA水平升高，同時(shí)促進(jìn)脂肪組織中炎癥反應(yīng)的發(fā)生，激活核因子－κB（NF－κB），NF－κB 的激活又使MCP－1表達(dá)上調(diào)，從而導(dǎo)致單核／巨噬細(xì)胞的活化聚集及浸潤(rùn)，促進(jìn)了炎癥過(guò)程的發(fā)生、發(fā)展。（2）MCP-1抑制胰島素介導(dǎo)的組織對(duì)葡萄糖攝取，導(dǎo)致機(jī)體糖代謝障礙。Sartipy等[9]在3T3-L1脂肪細(xì)胞株中加入MCP-1（1 ng/mL）孵化6 h，發(fā)現(xiàn)脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖基礎(chǔ)攝取率下降了25%。（3）MCP-1與其他因子共同作用促進(jìn)IR的發(fā)生。Piemonti等[10]發(fā)現(xiàn)瘦素（leptin）、腫瘤壞死因子（TNF）-α 與 IR 的密切關(guān)系可能是通過(guò)誘導(dǎo)產(chǎn)生大量MCP-1而進(jìn)行調(diào)節(jié)的。

因此，MCP-1水平過(guò)度表達(dá)與IR密切相關(guān)，長(zhǎng)期應(yīng)用替米沙坦能有效改善IR，其機(jī)制與其抑制血清因子MCP-1的表達(dá)，調(diào)節(jié)血脂有關(guān)，目前針對(duì)降低IR的治療，尚無(wú)特異性的治療手段，而替米沙坦具有降低FFA、改善血脂及抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)的雙重作用，可成為IR防治新的干預(yù)靶點(diǎn)。

[1] Banks WA,Willoughhby LM,Thomas DR,et al.Insulin resistance syndrome in the elderly:assessment of functional,biochemicial,metabolic,and infiammatory status[J].Diabetes Care,2007,30（9):2369-2373.

[2] 劉彥軍.自發(fā)的2型糖尿病動(dòng)物模型—OLETF大鼠[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)·內(nèi)分泌學(xué)分冊(cè),1999,19（1）：26-29.

[3] 李浩,劉開群,俸軍林.丹參酮IIA對(duì)鼠腦缺血再灌注損傷MCP-1和TNF-a含量的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2009,27（1）：160.

[4] 李鳳華.葡萄糖氧化酶法與己糖激酶法測(cè)定血糖的比較[J].四川省衛(wèi)生管理干部學(xué)院學(xué)報(bào),1994,13（4）：18-22.

[5] Hanley A J,Williams K,Gonzalez C,et al.Prediction of type 2 diabetes using simple measures of insulin resistance:combined results from the San Antonio Heart Study,the Mexico City Diabetes Study,and the Insulin Resistance Atherosclerosis Study[J].Diabetes care,2003，52（2）:463-469.

[6]Leinonnen E,Hurt-Camejo E,Wiklund O,et al.Insulin resistance and adiposity correlate with acute-phase reaction and soluble cell adhesion molecules in type 2 diabetes[J].Atherosclemsis,2003,166（2):387-394.

[7] Shiuchi T,Iwai U,Li HS.Huan-Sheng.AngiotensⅡType-1receptor blocker valsarter enhances insulin sensitivity in skeletal muscles of diabetic mice[J].American Heart Association,2004,43（5):1003-1010.

[8] Sell H,Eckel J.Monocyte chemotactic protein-1 and its role in insulin resistance[J].Curr Opin Lipidol,2007,18（3）:258-262.

[9]Sartipy P,Loskutoff DJ.Monocyte chemoatt ractant protein 1 in obesity and insulin resistance[J].Proc Natl Acad Sci USA,2003,10(3):7265-7270.

[10]Piemonti L,Calori G,Mercalli A,et al.Fasting plasma leptin,tumor necrosis factor-alpha receptor 2,and monocyte chemoat tracting protein 1 concentration in a population of glucose-tolerant and glucose intolerant women:impact on cardiovascular mortality[J].Diabetes Care,2003,26（5）:2883-2289.