VEGF和CD147在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義

邸麗雙 王德華

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，尤其晚期及復(fù)發(fā)宮頸癌對(duì)患者危害更大。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過程，涉及腫瘤細(xì)胞與宿主之間復(fù)雜的相互作用，多個(gè)基因及其產(chǎn)物參與了這一過程的調(diào)控。CD147分子是一種表達(dá)于多種組織的單次跨膜糖蛋白，其在肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤組織中表達(dá)增高，在腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中起重要作用。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）可直接參與誘導(dǎo)血管生成，在腫瘤生長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用。本研究探討CD147和VEGF蛋白在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為宮頸癌的發(fā)病機(jī)制及預(yù)后判斷提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2006年10月—2008年10月門診活檢或住院手術(shù)病理標(biāo)本100例，其中宮頸癌組織59例、宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）組織21例、正常宮頸組織20例。宮頸癌按FIGO分期（2000年）：Ⅰ期12例，Ⅱa期14例，Ⅱb期18例，Ⅲ期13例，Ⅳ期2例。宮頸癌患者手術(shù)31例：Ⅰ期12例，Ⅱa期14例，Ⅱb期5例（新輔助化療）；手術(shù)病理發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例，未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者21例。所有切片經(jīng)病理專家復(fù)核。宮頸癌組、CIN組、正常宮頸組平均年齡分別為（47.06±11.49）歲、（44.37±11.76）歲及（49.15±6.17）歲，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.563，P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 試劑和方法 兔抗人CD147多克隆抗體、兔抗人VEGF單克隆抗體，稀釋濃度勻?yàn)?∶50，即用型免疫組化試劑盒，均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化SP法，DAB顯色，具體操作按說明書進(jìn)行。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，采用生物公司提供的陽性切片為陽性對(duì)照。

1.2.2 結(jié)果判斷VEGF和CD147分別以胞漿和胞膜中出現(xiàn)棕色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。按半定量積分法判斷兩者表達(dá)情況，根據(jù)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞所占比例分別記為0～3分。染色強(qiáng)度:未著色或與背景一致淺棕色為0分，淺著色為1分，中度著色為2分，深著色為3分。陽性細(xì)胞百分率:高倍鏡（×400）下隨機(jī)抽取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算其平均陽性百分率。根據(jù)平均陽性細(xì)胞百分率分為：陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，5%～24%為1分，25%～49%為2分，≥50%為3分。兩項(xiàng)指標(biāo)相加，0分為陰性（－），1～2分為弱陽性（＋），3～4分為陽性（＋＋），5～6分為強(qiáng)陽性（＋＋＋）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 13.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，多組有序分類變量采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，各組之間兩兩比較采用Mann-Whitney檢驗(yàn)；按不同臨床病理指標(biāo)進(jìn)行分組，各組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)及精確概率法檢驗(yàn)。CD147和VEGF相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)。采用雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 CD147和VEGF在不同病變宮頸組織中的表達(dá) 宮頸癌組中CD147表達(dá)（91.53%）高于正常宮頸組（35.00%）及CIN組（76．19%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0．05）。宮頸癌 組 織 中VEGF的表 達(dá)（76.27%） 高于正常宮頸組（10.0%）、CIN組（57．14%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05），而在CIN組與宮頸癌組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），見表1。

表1 CD147及VEGF在正常宮頸、CIN及宮頸癌組織中的表達(dá) （例）

2.2 不同臨床病理情況宮頸癌患者組織中CD147和VEGF的表達(dá)情況 伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中CD147、VEGF陽性表達(dá)較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者升高（P<0.05）。不同年齡、大體類型、組織類型、分化程度的患者CD147和VEGF的表達(dá)差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05），見表2。

表2 不同臨床病理情況宮頸癌患者CD147和VEGF的表達(dá)情況 （例）

2.3 宮頸癌組織中CD147和VEGF兩者表達(dá)相關(guān)性CD147與VEGF呈正相關(guān)（rs=0.268，P<0.05），見表3。

表3 CD147與VEGF在宮頸癌中表達(dá)的關(guān)系 （例）

3 討論

CD147分子屬于免疫球蛋白超家族,在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)升高，并刺激腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP），促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[1]。Belton等[2]發(fā)現(xiàn)Basigin-2可作為可溶性CD147的受體起作用，激活ERK1/2信號(hào)途徑導(dǎo)致MMP-1、MMP-2等表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，CD147的陽性表達(dá)率隨宮頸病變加重呈逐漸升高趨勢(shì)。且伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中CD147的表達(dá)明顯高于無轉(zhuǎn)移者，提示在宮頸癌的演變過程中，CD147可能通過刺激腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞分泌、活化MMPs，導(dǎo)致細(xì)胞間質(zhì)和基底膜成分降解，促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。

VEGF是一類特異性作用于內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)因子，可促進(jìn)血管腔化及新生血管形成，并參與維持淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的存活，與腫瘤細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。本研究結(jié)果表明，VEGF在正常宮頸、CIN、宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率逐漸升高，且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中VEGF的表達(dá)明顯升高，這與Hammes等[4]研究結(jié)果基本一致，說明VEGF的表達(dá)升高可能與宮頸癌的發(fā)生浸潤(rùn)有關(guān)，在宮頸癌中血管形成可能是一個(gè)早發(fā)事件。

本研究表明CD147和VEGF在宮頸癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，但兩者之間的作用機(jī)制尚不完全明確。王冬等[5]發(fā)現(xiàn)VEGF和MMP-9的表達(dá)與宮頸癌密切相關(guān)。CD147的高表達(dá)可促進(jìn)MMP-9 mRNA的表達(dá)，進(jìn)而使刺激產(chǎn)生的MMPs降解周圍細(xì)胞外基質(zhì)，有利于VEGF發(fā)揮作用促進(jìn)新生血管的形成。Tang等[6]認(rèn)為CD147促進(jìn)VEGF的表達(dá)可能是通過PI3K-Akt信號(hào)途徑完成，說明CD147可間接或直接地促進(jìn)VEGF表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)血管內(nèi)皮增生，為腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移所需營養(yǎng)奠定了基礎(chǔ)。

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