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    黑龍江省馬鈴薯干腐病菌種類鑒定及致病性

    2010-06-12 02:44:00閔凡祥王曉丹胡林雙董學(xué)志李鳳蘭李鶴春劉偉婷
    植物保護(hù) 2010年4期
    關(guān)鍵詞:干腐病變種薯塊

    閔凡祥, 王曉丹, 胡林雙 魏 琪, 董學(xué)志李鳳蘭, 李鶴春, 劉偉婷, 郭 梅*

    (1.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院脫毒苗木所,哈爾濱 150086; 2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué),哈爾濱 150030)

    我國是馬鈴薯種植面積最大的國家[1]。隨著種植面積的不斷擴(kuò)大,馬鈴薯的各種病害日趨嚴(yán)重,成為限制馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素。其中馬鈴薯干腐病是馬鈴薯貯藏期主要病害之一,據(jù)報道,因馬鈴薯鐮刀菌干腐病導(dǎo)致窖貯損失率高達(dá)60%[2],該病已成為馬鈴薯產(chǎn)業(yè)進(jìn)一步發(fā)展的瓶頸問題[3]。因此,研究馬鈴薯干腐病鐮刀菌的種類,做到有目的防治,具重要的意義。本試驗將采自黑龍江省馬鈴薯主要產(chǎn)區(qū)的干腐病樣品進(jìn)行了病原菌分離和純化,根據(jù)病原菌的形態(tài)特征和培養(yǎng)性狀對其進(jìn)行種類鑒定,并對不同種類鐮刀菌的致病性進(jìn)行比較,從而初步了解黑龍江省馬鈴薯主要產(chǎn)區(qū)鐮刀菌種類、分布及不同種鐮刀菌的致病性,為馬鈴薯干腐病有效防治提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    1.1.1 供試菌種

    對2005-2008年采集于哈爾濱、加格達(dá)奇、鶴崗、牡丹江、訥河、寧安、嫩江、克山、巴彥等100份樣品進(jìn)行病原菌分離純化,得到27個鐮刀菌菌株。

    1.1.2 供試培養(yǎng)基

    馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA),馬鈴薯蔗糖瓊脂(PSA),水瓊脂(WA),米飯培養(yǎng)基,Joffe修改的 Bilai’s培養(yǎng)基[4]。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 分離純化方法

    采用常規(guī)真菌分離純化技術(shù)[5]。

    1.2.2 病原菌致病性測定

    選易感病的馬鈴薯‘Favorita’作為供試品種,試驗設(shè)4次重復(fù),每次重復(fù)選5個塊莖,以不接菌的5個塊莖為對照,用直徑0.5cm打孔器在經(jīng)75%乙醇表面消毒的健康馬鈴薯塊莖上打3個小孔,將在PSA平板上培養(yǎng)4d的直徑為0.5cm病菌菌絲塊接種于孔中,再將原薯塊組織塞回并用透明膠帶封口,置于25℃暗培養(yǎng),10d后調(diào)查發(fā)病率和病情指數(shù)[6]。淘汰不發(fā)病菌株,將發(fā)病菌株進(jìn)行下一步種類鑒定。

    馬鈴薯鐮刀菌干腐病分級標(biāo)準(zhǔn):0級,薯塊無病斑;1級,病斑面積占薯塊的5%以下;2級,病斑面積占薯塊的6%~15%;3級,病斑面積占薯塊的16%~30%;4級,病斑面積占薯塊的31%~50%;5級,病斑面積占薯塊的50%以上[7]。

    1.2.3 鑒定方法

    根據(jù)測定菌株生長速度(在pH5.6左右的PSA培養(yǎng)基上,24~25℃下,4d后測得的菌落直徑),菌絲形狀,菌落色澤(培養(yǎng)物色澤是指病原菌在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4d后,取出置于室內(nèi)散射光下2周后記載色澤。PSA上:PSA基物表面色澤指試管斜面的顏色;基物色澤指培養(yǎng)基有無變色,即菌株有無分泌色素。米飯和Bilai’s上記載綜合顏色。色澤名稱依據(jù)《色譜》一書進(jìn)行判斷[8]),小型分生孢子、大型分生孢子的數(shù)量及形狀,產(chǎn)孢細(xì)胞,厚垣孢子的有無,子實體類型,菌核以及子囊殼的有無等,按Booth C[9]分類系統(tǒng)的描述、圖譜及檢索表進(jìn)行比對,并參考John[10]和王拱辰[4]有關(guān)鐮刀菌鑒定方法進(jìn)行對比鑒定,根據(jù)綜合性狀確定不同鐮刀菌種類。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 通過致病性鑒定篩選出不同地區(qū)馬鈴薯鐮刀菌菌株

    將采自黑龍江省不同地區(qū)的病樣分離培養(yǎng)及單孢分離純化獲得27株鐮刀菌菌株,再通過馬鈴薯塊莖接種,調(diào)查薯塊病情指數(shù),與自然病薯的癥狀進(jìn)行比較。18個菌株侵染均表現(xiàn)不同程度黑褐色凹陷斑塊,切開薯塊,18℃下病組織呈黑色至黑褐色,5℃下病組織呈淡褐色。病薯通常進(jìn)一步發(fā)展形成空洞,并且空洞內(nèi)有白色菌絲。與自然發(fā)病馬鈴薯干腐病癥狀相同,從回接發(fā)病馬鈴薯塊莖中可分離得到原接種病菌。以下是發(fā)病菌株來源、采集時間及編號,如表1所示。

    表1 不同鐮刀菌菌株來源、采集時間及編號

    2.2 馬鈴薯干腐病菌種類鑒定

    將以上得到的18個馬鈴薯鐮刀菌致病菌株依據(jù)其培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征綜合分析,鑒定結(jié)果為:F.sambucinum,F(xiàn).avenaceum,F(xiàn).trichothecioides,F(xiàn).solanivar.coeruleum,F(xiàn).solani,F(xiàn).sporotrioides。其中F.sporotrioides所占比例最高,為35.29%,F(xiàn).solanivar.coeruleum比例最小,為5.88%。如表2所示。

    表2 鐮刀菌種類鑒定結(jié)果

    圖1 接骨木鐮孢(Fusarium sambucinum)培養(yǎng)性狀和形態(tài)學(xué)特性

    圖2 茄病鐮孢藍(lán)色變種(F.solani var.coeruleum)培養(yǎng)性狀和形態(tài)學(xué)特性

    圖3 茄鐮孢(F.solani)培養(yǎng)性狀和形態(tài)學(xué)特性

    圖4 擬枝孢鐮孢(F.sporotrioides)培養(yǎng)性狀和形態(tài)學(xué)特性

    圖5 燕麥鐮孢(F.avenaceum)培養(yǎng)性狀和形態(tài)學(xué)特性

    圖6 擬絲孢鐮孢(F.trichothecioides)培養(yǎng)性狀和形態(tài)學(xué)特性

    2.3 黑龍江省不同馬鈴薯鐮刀菌的致病性鑒定

    圖7 不同鐮刀菌引起馬鈴薯干腐病病情指數(shù)(p<0.05)

    由圖7可見,不同鐮刀菌在感病品種‘Favorita’病情指數(shù)各不相同,統(tǒng)計分析結(jié)果顯示各菌株間致病力差異顯著,致病力由強(qiáng)到弱依次為F.sambucinum,F(xiàn).avenaceum,F(xiàn).trichothecioides,F(xiàn).solanivar.coeruleum,F(xiàn).solani,F(xiàn).sporotrioides。說明6個菌株中,有3個菌株致病力較強(qiáng),另外3個致病力中等。

    3 結(jié)論與討論

    馬鈴薯干腐病是由鐮刀菌引起,據(jù)統(tǒng)計世界上引起馬鈴薯干腐病病原有10種[11-12]之多,不同國家或地區(qū)鐮刀菌的種類不同。國內(nèi)對這方面報道不多,1994年葉琪明[13]報道了浙江省馬鈴薯干腐病鐮刀菌9個種和變種,分別為茄鐮孢(F.solani)、茄病鐮孢藍(lán)色變種(F.solanivar.coeruleum)、串珠鐮孢(F.moniliforme)、串珠鐮孢中間變種(F.moniliformevar.intermedium)、串珠鐮孢浙江變種(F.moniliformevar.zhejiangense)、尖鐮孢(F.oxysporum)、擬枝孢鐮孢(F.sporotrioides)、擬絲孢鐮孢(F.trichothecioides)和芳香鐮孢(F.redolens)。其中,致病力較強(qiáng)的種類有茄鐮孢及其變種、串珠鐮孢及其變種和擬絲孢鐮孢;2004年何蘇琴[15]報道甘肅省定西地區(qū)馬鈴薯干腐病,通過種類鑒定為硫色鐮刀菌(F.sulphureumSchlechlendahl);2007年陳彥云[16]報道寧夏西吉縣馬鈴薯干腐病主要病原為茄病鐮孢藍(lán)色變種(F.solanivar.coeruleum)和接骨木鐮孢(F.sambucinum)。2008年彭學(xué)文[14]報道河北省馬鈴薯干腐病主要由茄鐮孢(Fusariumsolani)和半裸鐮孢(F.semitectum)引起;黑龍江省是我國馬鈴薯主要產(chǎn)區(qū)之一,每年馬鈴薯干腐病均有不同程度發(fā)生,對其主要病原菌分類還沒有相關(guān)報道,本研究結(jié)果表明黑龍江省馬鈴薯干腐病主要病原有6個種和變種,分別為F.sambucinum,F(xiàn).avenaceum,F(xiàn).trichothecioides,F(xiàn).solanivar.coeruleum,F(xiàn).solani,F(xiàn).sporotrioides。其中,致病力較強(qiáng)的為F.sambucinum,F(xiàn).avenaceum和F.trichothecioides。燕麥鐮孢(F.avenaceum)作為馬鈴薯干腐病主要病原為國內(nèi)首次報道。黑龍江省是否有其他種類鐮刀菌,還需要繼續(xù)廣泛采集樣品,進(jìn)一步鑒定。

    鐮刀菌在自然界中分布廣泛,通過研究發(fā)現(xiàn)鐮刀菌分生孢子(特別是大分生孢子)、分生孢子座、產(chǎn)孢細(xì)胞形態(tài)及培養(yǎng)性狀等方面具有多樣性,易受環(huán)境影響產(chǎn)生變異,因此,鑒定和識別不同鐮刀菌種類比較復(fù)雜和困難,但隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,采用分子檢測技術(shù)與傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定相結(jié)合的方法,可以快速、準(zhǔn)確鑒定鐮刀菌種類,將是鐮刀菌鑒定的發(fā)展方向,同時可進(jìn)一步完善我國馬鈴薯鐮刀菌檢測鑒定技術(shù),為馬鈴薯干腐病防治奠定堅實基礎(chǔ)。

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    [16]陳彥云.寧夏西吉縣馬鈴薯貯藏期病害調(diào)查及藥劑防治研究[J].耕作與栽培,2007,3:15-16.

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