食涼茶中揮發(fā)油成分分析

食涼茶是畬族同胞享用了數(shù)百年的保健飲品，是以野生的蠟梅科植物柳葉蠟梅(Chimonanthussalicifolius)或浙江蠟梅的葉片和嫩芽為原料制成。食涼茶富含揮發(fā)油、黃酮、生物堿、微量元素及多種維生素和氨基酸[1]，具有鎮(zhèn)咳、平喘、防治感冒等功效[2]，其提取物對腹瀉、應(yīng)激性潰瘍、腸蠕動亢進(jìn)有顯著抑制作用，能明顯降低胃液分泌量、總酸排出量[3]。為進(jìn)一步開發(fā)利用食涼茶的藥用保健作用，全面系統(tǒng)地分析其揮發(fā)性成分十分必要。作者在此采用超臨界CO2萃取(SFE)技術(shù)和氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)對食涼茶中揮發(fā)油成分進(jìn)行了提取分離和鑒定。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 藥材

食涼茶，浙江中強(qiáng)醫(yī)藥有限公司。

1.2 儀器

HA121-50-01型超臨界CO2萃取設(shè)備，江蘇華安科研儀器有限公司；6890N-5973N型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(帶有7683B自動進(jìn)樣器)、19091S-433HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm )色譜柱，Agilent公司。

1.3 揮發(fā)油的提取

超臨界CO2萃取流程：CO2鋼瓶→冷凍系統(tǒng)→高壓泵→萃取釜→分離釜I→分離釜Ⅱ→冷凍系統(tǒng)(循環(huán))。

將食涼茶清洗、干燥、粉碎過60目篩后，稱量213.1960 g投入萃取釜中進(jìn)行萃取。 萃取條件：萃取釜的壓力25 MPa、溫度55℃；分離釜I的壓力12 MPa、溫度60℃；分離釜Ⅱ的壓力6 MPa、溫度35℃；CO2流速25 L·h-1；萃取時(shí)間2 h。

1.4 GC-MS分析條件

GC條件：進(jìn)樣口溫度250℃，載氣為氦氣。色譜柱：進(jìn)樣量為1 μL，分流比為2∶1，進(jìn)樣口溫度260℃，程序升溫：分離釜I：初始溫度35℃，以4℃·min-1升至60℃(保留1 min)，再以5℃·min-1升至200℃(保留1 min)，再以3℃·min-1升至250℃(保留1 min)；分離釜Ⅱ：初始溫度35℃，以3℃·min-1升至150℃(保留3 min)，再以8℃·min-1升至200℃(保留5 min)，再以3℃·min-1升至260℃(保留5 min)。

MS條件：EI離子源，電子能量70 eV，離子源溫度230℃，接口溫度280℃，電子倍增電壓2400 V，采取全掃描模式，掃描范圍30～400 amu。

1.5 數(shù)據(jù)處理與質(zhì)譜檢索

樣品經(jīng)GC-MS分析，兩分離釜中各分離組分經(jīng)美國國家標(biāo)準(zhǔn)局NIST2.0譜庫檢索定性，采用色譜峰面積歸一法進(jìn)行相對定量。再根據(jù)兩分離釜揮發(fā)油的總量確定各個(gè)化合物的相對含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 食涼茶揮發(fā)油產(chǎn)率

分離釜I得到棕黑色固體、產(chǎn)物量為1.1888 g；分離釜Ⅱ得到棕綠色粘稠物和少量近無色的油狀液體、產(chǎn)物量為6.6569 g。揮發(fā)油總質(zhì)量為7.8457 g，總產(chǎn)率為3.68%。與傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法[4]相比，產(chǎn)率大幅提高。

2.2 食涼茶中揮發(fā)油成分

用乙醚分別溶解分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ中的揮發(fā)油，用毛細(xì)管氣相色譜法對食涼茶的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，分離釜Ⅰ中共分離出 107個(gè)組分，分離釜Ⅱ中共分離出118個(gè)組分。經(jīng)GC-MS檢測和質(zhì)譜解析，最終鑒定出組分?jǐn)?shù)：分離釜Ⅰ為42個(gè)；分離釜Ⅱ?yàn)?8個(gè)，分別列于表1、表2。

表1 SFE法提取分離釜Ⅰ中的食涼茶揮發(fā)油化學(xué)成分

表2 SFE法提取的分離釜Ⅱ中的食涼茶揮發(fā)油化學(xué)成分

2.3 討論

(1)本研究共鑒定出食涼茶揮發(fā)性組分68個(gè)，占揮發(fā)油提取物總量的57.6%。主要是烯烴類和醇類物質(zhì), 其中烯烴類最多(27種),占39.90%;其次是有機(jī)酸類物質(zhì)(3種),占4.24%；其它物質(zhì)中醇類物質(zhì)(13種)，占4.23%，酯類(9種)，其中含量為3.68%，酮類(3種)，占1.81% 。其中含量最高的組分是3-(4,8-二甲基-3,7-壬二烯)-呋喃(黑蟻素)(19.33%) ,其次是4-(3,7-二甲基-3-乙烯基-1,6-辛二烯)-苯酚(5.09%)、喇叭烯氧化物(4.94%)、α-松油醇乙酸酯(2.88%)、n-十六烷酸(2.09%)、白菖烯環(huán)氧化物 (2.04%)、異香橙烯環(huán)氧化物(1.75%)、亞麻酸(1.44%)。

(2)本研究用不同的GC條件分別分析了分離釜Ⅰ和分離釜Ⅱ中揮發(fā)油的成分，共鑒定出22個(gè)相同的化合物，其余不同的化合物之間也有一定的聯(lián)系，有些是同分異構(gòu)體。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，若用相同的GC-MS條件分析兩個(gè)分離釜中的揮發(fā)油，得到的總離子流圖存在很大差異，且分離釜Ⅱ的揮發(fā)油量約為分離釜I的6倍。

(3)劉力等[5]利用氣相色譜法從柳葉臘梅中檢測到8種成分:α-蒎烯、β-莰烯、蒎烯、1,8-桉葉素、芳樟醇、樟腦、龍腦、異龍腦, 其相對含量依次是6.84%、7.30%、9.43%、32.59%、0.46%、17.84%、1.57%、7.95%。本研究檢測到了其中4個(gè)化合物(α-蒎烯、1,8-桉葉素、樟腦、龍腦)，但含量均不是很高。上述8種化合物的沸點(diǎn)都偏低、揮發(fā)性強(qiáng)、極性低，GC-MS分析時(shí)出峰較早，而本實(shí)驗(yàn)得到的總離子流圖中前時(shí)間段的峰較少、中間時(shí)間段的峰較多，這說明超臨界萃取技術(shù)對低沸點(diǎn)化合物的萃取率不夠，而對于中高沸點(diǎn)的揮發(fā)性物質(zhì)的萃取率較高。

(4) 中藥大詞典記載了臘梅[C.praecox(L. ) Link]中揮發(fā)油主要含1,8-桉葉素、龍腦、芳樟醇、金合歡醇、松油醇、吲哚、苯甲醇、乙酸芐酯等[6]。本研究鑒定出食涼茶中含有其中4種化合物(1,8-桉葉素、龍腦、合金歡醇和松油醇)，而且合金歡醇還以醋酸合金歡醇酯和β-合金歡烯形式存在。

(5)徐年軍等[7]用揮發(fā)油提取器、GC-MS對山蠟梅中揮發(fā)性成分進(jìn)行提取鑒定，共鑒定出72個(gè)揮發(fā)性化合物，主要為烯烴類和醇類物質(zhì)。與山蠟梅相比，食涼茶(柳葉蠟梅葉)中揮發(fā)性組分主要是烯烴類和有機(jī)酸類物質(zhì)，兩者均含有烯烴類物質(zhì)，且食涼茶(柳葉蠟梅葉)和山蠟梅中同時(shí)存在的化合物多達(dá)15種，進(jìn)一步證實(shí)了柳葉蠟梅和山蠟梅同屬于蠟梅屬，兩者存在一定的相似性。

3 結(jié)論

采用超臨界CO2萃取技術(shù)提取食涼茶中揮發(fā)油成分，經(jīng)GC-MS分析，鑒定了68個(gè)揮發(fā)性化合物。其揮發(fā)性化合物主要是烯烴類和有機(jī)酸類，含量分別為39.90%和4.24%。用該法提取出的揮發(fā)性成分含量最高的是3-(4,8-二甲基-3,7-壬二烯)-呋喃(黑蟻素)(19.33%)，其次為4-(3,7-二甲基-3-乙烯基-1,6-辛二烯)-苯酚(5.09%)、喇叭烯氧化物(4.94%)、α-松油醇乙酸酯(2.88%)、n-十六烷酸(2.09%)、白菖烯環(huán)氧化物 (2.04%)、異香橙烯環(huán)氧化物(1.75%)、亞麻酸(1.44%)等。

參考文獻(xiàn)：

[1] 衛(wèi)生部藥典委員會. 中國藥典(一部)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1977：50.

[2] 劉忠達(dá)，袁宙新.石涼茶提取物在制藥中的應(yīng)用[P].CN 2005 10 06 0788,2007-03-21.

[3] 胡長玉，唐欣昀.野生柳葉蠟梅葉營養(yǎng)成分分析[J].黃山學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，9(3)：91-93.

[4] 李建良，趙宏偉.畬藥食涼茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2007，13(7)：60-61.

[5] 劉力, 張若蕙, 劉洪諤, 等.蠟梅科7樹種的葉精油成分及其分類意義 [J].植物分類學(xué)報(bào),1995,33(2):171-174.

[6] 江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大詞典(下冊)[M]. 上海: 上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1997：2552.

[7] 徐年軍，白海波，嚴(yán)小軍，等.山蠟梅中揮發(fā)油成分分析[J].分析測試學(xué)報(bào),2006,25(1)：90-93.