腸內(nèi)免疫營(yíng)養(yǎng)物對(duì)癌性惡病質(zhì)小鼠營(yíng)養(yǎng)和免疫狀態(tài)的調(diào)控作用

鄭亞兵，馬勝林 ，姜初明 ，孔祥鳴，周衛(wèi)民

（1.浙江省腫瘤醫(yī)院，浙江 杭州 310004； 2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州 310053）

癌性惡病質(zhì)是癌癥晚期的一個(gè)重要并發(fā)癥，60%～80%的晚期腫瘤患者都存在此綜合征，是癌癥患者死亡的重要原因，約占50%以上[1]。筆者采用腫瘤特異性腸內(nèi)免疫營(yíng)養(yǎng)物supportan治療小鼠癌性惡病質(zhì)，觀察其生理狀況并對(duì)與癌性惡病質(zhì)相關(guān)的血清細(xì)胞因子加以分析，探討supportan的治療作用，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與試藥

清潔級(jí)C57小鼠[合格證號(hào)為SCXY（滬）2003-0003，中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心]40只，雌雄各半，體重18～20 g，近交系。Lewis肺癌細(xì)胞株（中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）。supportan（華瑞制藥有限公司，批號(hào)為050908）；醋酸甲羥孕酮（南京先河制藥有限公司，批號(hào)為20051106，用蒸餾水配置成質(zhì)量濃度為3 mg/mL的溶液）；白細(xì)胞介素 1α（IL-1α）試劑盒（批號(hào)為 EK0391），白細(xì)胞介素 6（IL-6）試劑盒（批號(hào)為 EK0411），腫瘤壞死因子 α（TNF- α）試劑盒（批號(hào)為EK0527），均由博士德公司提供。

1.2 試驗(yàn)方法

建立癌性惡病質(zhì)動(dòng)物模型：在無(wú)菌條件下，剝離Lewis肺癌荷瘤鼠皮下瘤塊，用手術(shù)刀切取瘤塊外周供血豐富的瘤塊組織，剪碎，放入細(xì)胞勻漿器中勻漿，將勻漿液用200目過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾，取過(guò)濾液顯微鏡下計(jì)數(shù)并調(diào)整濃度到1×107個(gè)瘤細(xì)胞（活細(xì)胞），取制好的瘤細(xì)胞混懸液接種于C57小鼠右上肢腋窩皮下處，每只0.1 mL（1×107個(gè)瘤細(xì)胞）。接種第8天各荷瘤組出現(xiàn)瘤塊；接種第14天后，小鼠明顯消瘦，體重下降且出現(xiàn)厭食、虛弱、衰竭，進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)。

分組及試驗(yàn)方法：將40只小鼠隨機(jī)均分成4組，非荷瘤空白對(duì)照（NTB）組、癌性惡病質(zhì)（CC）組、supportan（ST）組、醋酸甲羥孕酮治療（MPA）組，每組10只。取0.1 mL細(xì)胞混懸液按常規(guī)方法接種于CC，ST，MPA 3組小鼠的右上肢腋窩皮下，NTB組小鼠同部位注射等量生理鹽水。接種14 d后惡病質(zhì)狀態(tài)出現(xiàn)，ST組予supportan腸內(nèi)免疫營(yíng)養(yǎng)治療，200 mL/kg，灌胃，連續(xù)10 d；MPA組予醋酸甲羥孕酮，120 mg/kg灌胃，連續(xù)10 d。除ST組予supportan腸內(nèi)免疫營(yíng)養(yǎng)外，其余各組均予同一飼料和自來(lái)水飲食。

1.3 觀察與測(cè)定指標(biāo)

每2天稱重1次，精確到0.1 g，稱重時(shí)間選在上午8點(diǎn)至10點(diǎn)，各接種腫瘤組小鼠體重為除去瘤重（按腫瘤體積計(jì)算）后的體重。皮下接種第8天開(kāi)始用游標(biāo)尺測(cè)定腫瘤的三徑，公式為腫瘤體積（V）=π/6·L·W·D。其中 L，W，D分別代表腫瘤的長(zhǎng)、寬、深。取小鼠眼眥靜脈血，放置1 h左右，待凝后經(jīng)2 500 r/min離心15 min，即得小鼠血清標(biāo)本，置-20℃凍存?zhèn)錂z。用ELISA試劑盒測(cè)定（博士德公司，測(cè)定方法根據(jù)試劑盒說(shuō)明）TNF-α，IL-1，IL-6。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

荷瘤組小鼠接種Lewis肺癌瘤細(xì)胞第8天右腋下出現(xiàn)瘤塊；接種第14天后，瘤塊明顯增大，小鼠明顯消瘦，體重下降且出現(xiàn)厭食、活動(dòng)減少，進(jìn)入惡病質(zhì)狀態(tài)；第21天，CC組小鼠較其他組小鼠明顯消瘦，活動(dòng)減少，攝食量下降，體重下降明顯，并有1只雌性小鼠死亡；第24天，荷瘤組小鼠更加虛弱，攝食量減少，以CC組更明顯。各組小鼠體重變化見(jiàn)表1。可見(jiàn)，第14天CC組、ST組、MPA組小鼠體重明顯較NTB組下降，差異有顯著性（P＜0.05）。治療后ST組、MPA組小鼠在第18天體重?zé)o明顯下降，與CC組比較有顯著性差異（P＜0.05），第24天有非常顯著性差異（P＜0.01），提示經(jīng)免疫腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)治療和醋酸甲羥孕酮治療后體重?zé)o明顯下降。

表1 各組小鼠體重變化（± s，g）

表1 各組小鼠體重變化（± s，g）

注：與 NTB組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01；與 CC組比較，□P＜0.05，■P ＜0.01（下表同）。

第24天23.47±0.58 16.10±1.85 20.03±1.32■20.04±1.16■組別NTB組CC組ST組MPA組第8天21.78±0.75 21.09±1.46 20.96±2.74 20.94±2.20第14天22.47±0.62 20.52±2.29△20.31±1.88▲20.51±2.31△第18天22.83±0.71 18.62±1.20 20.09±1.35□20.22±1.75□

血清細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2?？梢?jiàn)，IL-1，IL-6及TNF-α CC組、ST組、MPA組較NTB組均有不同程度升高，CC組升高最明顯（P＜0.01）；用藥后ST組及MPA組較CC組明顯下降，有顯著性差異（P＜0.05）；ST組與MPA組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表2 各組小鼠血清細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果（± s，pg/mL）

表2 各組小鼠血清細(xì)胞因子測(cè)定結(jié)果（± s，pg/mL）

組別NTB組CC組ST組MPA組IL-1 14.67±5.68 32.93±14.69▲22.89±6.18△□21.27±7.74△□IL-6 69.87±27.73 126.32±30.63▲85.79±19.48□92.63±31.18□TNF-α 63.42±12.94 89.03±12.90▲75.89±9.83△□73.97±10.82□

3 討論

癌癥患者發(fā)生惡病質(zhì)的一個(gè)重要原因是營(yíng)養(yǎng)底物代謝異常[2]。碳水化合物代謝異常主要表現(xiàn)為糖異生增加和胰島素敏感性下降引起的葡萄糖利用下降。脂肪代謝異常表現(xiàn)為脂肪動(dòng)員（包括脂肪降解和脂肪酸氧化）增加。腫瘤細(xì)胞由于缺乏脂肪代謝的關(guān)鍵酶，因此對(duì)脂肪利用障礙，主要利用葡萄糖作為能量來(lái)源。由于乳酸和成糖氨基酸大量糖異生時(shí)需要消耗大量的熱量，致使基礎(chǔ)代謝增加，蛋白分解加速。

在一些惡病質(zhì)模型中，細(xì)胞因子IL-1，IL-6，TNF-α與惡病質(zhì)的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。Bossola等[3]的研究中，TNF-α被認(rèn)為是導(dǎo)致惡病質(zhì)的一個(gè)重要因子，持續(xù)靜脈注射TNF-α可引起試驗(yàn)動(dòng)物厭食、體重減輕、蛋白質(zhì)和脂肪分解。本研究證實(shí)，IL-1，IL-6，TNF-α均隨著小鼠的去瘤體重下降而升高。因TNF-α能抑制脂蛋白脂酶（LPL）活性，由此推測(cè)IL-1和IL-6兩種細(xì)胞因子也能抑制LPL活性，增加脂肪分解，降低蛋白質(zhì)合成，從而導(dǎo)致小鼠體重減輕，出現(xiàn)惡病質(zhì)。應(yīng)用IL-1受體拮抗劑、抗IL-6抗體均可抑制惡病質(zhì)的進(jìn)一步發(fā)展[4]。

目前，尚無(wú)有效的治療方法可以逆轉(zhuǎn)進(jìn)行性消瘦。近年來(lái)研究表明，免疫營(yíng)養(yǎng)對(duì)腫瘤手術(shù)患者的免疫和炎性反應(yīng)具有調(diào)節(jié)作用，可以減少手術(shù)并發(fā)癥的發(fā)生[5]。supportan是根據(jù)癌癥患者的代謝特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的腸內(nèi)免疫營(yíng)養(yǎng)制劑，其組成特點(diǎn)是高熱量密度，高蛋白、高脂肪含量（占熱量的50%），富含免疫營(yíng)養(yǎng)物ω-3脂肪酸、核苷酸和抗氧化劑維生素A，E，C。ω-3多不飽和脂肪酸（ω-3 PUFA）被認(rèn)為在減緩腫瘤生長(zhǎng)和癌性惡病質(zhì)方面具有一定的治療效果，其可能機(jī)制在于抑制NF-κB以減少環(huán)氧化酶2（COX-2）的表達(dá)，減少由NF-κB誘導(dǎo)產(chǎn)生的其他細(xì)胞因子對(duì)腫瘤細(xì)胞的促進(jìn)作用。ω-3脂肪酸同時(shí)具有強(qiáng)有力的抗炎作用，可以抑制免疫抑制物前列腺素E2（PGE2）的產(chǎn)生。核苷酸具有免疫增強(qiáng)作用，可以提高腫瘤患者的免疫功能[6]。維生素E、維生素C可以幫助清除氧自由基，對(duì)手術(shù)創(chuàng)傷引起的缺血-再灌注損傷具有防治作用[7]。

由本試驗(yàn)結(jié)果可知，supportan具有明顯抑制體重下降，明顯下調(diào)與癌性惡病質(zhì)發(fā)生相關(guān)的細(xì)胞因子TNF-α，IL-1，IL-6的血清水平，其抗癌性惡病質(zhì)的作用機(jī)理與其配方符合腫瘤患者的代謝特點(diǎn)。與甲羥孕酮相比，無(wú)論是在改善攝食量、增加體重方面還是在下調(diào)細(xì)胞因子水平方面都無(wú)顯著性差異，這肯定了supportan抗癌性惡病質(zhì)的作用。

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