固相萃取-GC-MS聯(lián)用法測定何首烏中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量Δ

周洪波，房志堅(jiān)，楊立偉，莫結(jié)麗，陳浩桉#

（1.廣東藥學(xué)院中山校區(qū)，中山市 528458；2.廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣州市 510180）

有機(jī)氯類農(nóng)藥價(jià)廉、殺蟲效率高，曾廣泛被應(yīng)用，造成環(huán)境污染；且其具有毒性，可造成慢性中毒或致畸、致癌、致突變等，還易在動(dòng)植物體內(nèi)蓄積，因而世界各國已相繼禁止使用該類農(nóng)藥。但由于該類農(nóng)藥化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、半衰期長，所以在土壤、地表水中仍有殘留。藥材安全問題是受到國內(nèi)、外廣泛關(guān)注的一個(gè)話題，成為影響中藥材出口的重要因素之一[1，2]。因此，筆者以10批不同來源根類藥材何首烏為研究對(duì)象，應(yīng)用固相萃取技術(shù)結(jié)合氣-質(zhì)（GC-MS）聯(lián)用法[3，4]檢測了其中9種有機(jī)氯農(nóng)藥[5]。

1 儀器與試藥

GC-MS聯(lián)用儀，包括GC6890N型GC儀、5975B inert MS檢測器、7983B型自動(dòng)進(jìn)樣器、MSD化學(xué)工作站（美國Agilent公司）；LABOROTA 4003型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國Heidolph公司）；KQ-300DA型超聲儀（功率300 W，頻率50 Hz，昆山市超聲儀器有限公司）。

乙酸乙酯、正己烷、乙醚均為農(nóng)殘級(jí)（美國TEDIA公司）；無水硫酸鈉為分析純（廣州化學(xué)試劑廠）；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：六六六（BHC，包括α-BHC、β-BHC、γ-BHC 和δ-BHC）、滴滴涕（DDT，包括pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT和pp′-DDT）、五氯硝基苯（PCNB），均購于國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心（純度均≥99%）；何首烏藥材分別來源于廣州清平藥材市場（1）、河南濟(jì)源（2）、廣州市藥材公司（3）、湖北恩施（4）、江西井岡山（5）、廣西靖西（6）、廣東肇慶（7）、廣西田陽（8）、四川峨眉山（9）、廣東德慶（10），均由廣東藥學(xué)院房志堅(jiān)教授鑒定為蓼科植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）。

2 方法與結(jié)果

2.1 GC條件

毛細(xì)管柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm），F(xiàn)lorisil固相萃取小柱（6 mL，Supleco，美國）；載氣：高純氦氣；流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：230℃；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL；柱溫：初始溫度為100 ℃，保持2 min，然后以8 ℃·min-1升溫至220℃，再以5℃·min-1升溫至250℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度：230℃。

2.2 MS條件

電離方式：EI；電離能量：70 eV；接口溫度：280℃；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；全掃描離子范圍：50～1000 amu，采用選擇離子方式進(jìn)行定量分析，溶劑延遲為5 min。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備

分別精密吸取α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC，pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT和PCNB適量，分置200 mL量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為0.2 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，備用。

2.4 供試品溶液的制備

精密稱取何首烏藥材粉末（過40目篩）2.0 g，置具塞錐形瓶中，加水4 mL，混勻，浸泡2 h，精密加入乙酸乙酯50 mL，稱重，密塞，超聲處理1 h，放冷，用乙酸乙酯補(bǔ)足失重，搖勻，傾取上清液，加無水硫酸鈉2 g，振搖，靜置，精密吸取上清液25 mL，置50 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，于40℃水浴減壓濃縮至近干，在濃縮過程中加適量正己烷-乙醚（85∶15）混合溶液反復(fù)洗滌濃縮除盡乙酸乙酯，再用正己烷-乙醚（85∶15）混合溶液多次溶解并轉(zhuǎn)移至Florisil固相萃取柱（正己烷-乙醚（85∶15）混合溶液15 mL預(yù)洗）上，然后用上述混合溶液洗脫，收集洗脫液至10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備與檢測限的測定

分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，以正己烷稀釋，制備成一系列不同濃度（1.0、5.0、10、25、50、100、200 ng·mL-1）的混標(biāo)溶液，分別注入GC儀，按上述條件測定。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，制備9種有機(jī)氯農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并按3倍信噪比確定檢測限。結(jié)果，最低檢測限為0.5 ng·mL-1，各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)在0.9990～0.9995范圍之內(nèi)，線性范圍為1～200 ng·mL-1。色譜見圖1。

從圖1中可以看出，對(duì)9種有機(jī)氯農(nóng)藥標(biāo)樣基本實(shí)現(xiàn)了基線分離，可以滿足分析的要求。

圖1 何首烏的GC-MS圖譜A.對(duì)照品全掃描色譜圖；B.對(duì)照品選擇離子色譜圖；C.樣品選擇離子色譜圖Fig 1 GC-MS chromatogram of P.multiflorumA.full scan chromatograms of reference substance；B.SIM chromatogram of reference substance；C.SIM chromatograms of samples

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次樣品共6份，按“2.4”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，測定并計(jì)算各農(nóng)藥含量。結(jié)果，各農(nóng)藥含量的RSD在5.7%～8.3%之間，表明方法重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的何首烏樣品，加入同一濃度的9種有機(jī)氯農(nóng)藥混標(biāo)溶液適量，平行操作6份，揮干溶劑后按“2.4”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按上述方法分析，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.8 樣品殘留量測定

精密稱取何首烏樣品，按上述方法測定9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中各有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量測定結(jié)果（mg·kg-1）Tab 2 Result of the content determination of the residues of organochlorinated pesticides in samples（mg·kg-1）

3 討論

《中國藥典》采用磺化法凈化樣品，再以GC-電子捕獲檢測器（ECD）法檢測，有其局限性。本試驗(yàn)采用硅酸鎂固相萃取小柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化處理，GC-MS法測定樣品中9種有機(jī)氯農(nóng)藥，方法靈敏、準(zhǔn)確，有機(jī)溶劑消耗量少，結(jié)果令人滿意，該法也是目前國際通用方法。

參考2005年版《中國藥典》（一部）規(guī)定甘草、黃芪等藥材中 BHC 不得高于 0.2 mg·kg-1、DDT 不得高于 0.2 mg·kg-1、PCNB不得高于0.1 mg·kg-1可知，本試驗(yàn)所測樣品除1種超出規(guī)定外，其余均符合規(guī)定。

[1]陳家春，賈敏如.中、美、日和歐洲藥典中植物藥重金屬和農(nóng)藥殘留量的限量規(guī)定及分析[J].華西藥學(xué)雜志，2003，20（6）：525.

[2]馬虹英.淺談中藥中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留問題[J].中國藥房，2005，16（21）：1667.

[3]Michelangelo Anastassiades，Steven J Lehotay.Evaluation of analyte protectants to improve gas chromatographic analysis of pesticides[J].J Chromatogr A，2003，1015：163.

[4]Katerina Mastovska，Steven J Lehotay.Optimization and evaluation oflow-pressure gas chromatography-mass spectrometry for the fast analysis of multiple pesticide residues in food commodity[J].J Chromatogr A，2001，926：291.

[5]國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：59.