Ezrin在胰腺癌組織中的表達及意義

任學群,李宜雄

(1.河南大學淮河醫(yī)院普通外科,河南 開封 475000;2.中南大學湘雅醫(yī)院普通外科,湖南 長沙 410008)

Ezrin在胰腺癌組織中的表達及意義

任學群1,李宜雄2*

(1.河南大學淮河醫(yī)院普通外科,河南 開封 475000;2.中南大學湘雅醫(yī)院普通外科,湖南 長沙 410008)

目的:探討Ezrin在胰腺癌組織中的表達及其與胰腺癌生物學行為的關系。方法:采用免疫組織化學染色方法檢測46例胰腺癌組織及13例正常胰腺組織中Ezrin的表達情況,并分析其表達與胰腺癌臨床病理因素和預后的關系。結果:胰腺癌組織中Ezrin陽性表達率顯著高于正常胰腺組織(89.1%vs 53.8%,P＜0.01)。胰腺癌組織中Ezrin強陽性表達率為45.7%(21/46),強陽性表達率隨腫瘤分化程度的降低而增高(P＜0.05);有淋巴結轉移者Ezrin強陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移者(P＜0.05)。Ezrin強陽性表達組術后生存時間為9～36 mon,中位生存時間為16 mon;Ezrin呈弱陽性及陰性表達組術后生存時間為8～50 mon,中位生存時間為24 mon;2組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論:Ezrin在胰腺癌組織中存在過表達,且其表達與胰腺癌不良生物學行為密切相關,可作為判別胰腺癌預后的一種有價值的分子標志物。

Ezrin;胰腺癌;免疫組織化學

腫瘤細胞運動侵襲能力增強是腫瘤轉移的前 提[1-4]。研究表明,細胞的運動和遷移能力與細胞骨架的動態(tài)循環(huán)密切相關,而由肌動蛋白絲組成的微絲骨架是細胞運動的基礎。Ezrin是ERM(Ezrin-radixin-moesin)家族成員之一,是細胞骨架(主要為微絲骨架)與細胞膜之間的連接蛋白。通過參與細胞生長和信號傳導過程中膜與細胞骨架的重要聯(lián)系和調節(jié),在細胞的運動、遷移、有絲分裂等過程中發(fā)揮重要作用。近年來,越來越多的研究[3-10]表明,Ezrin過表達或亞細胞定位改變與腫瘤的惡性進展和預后密切相關。作者采用免疫組織化學SABC法對胰腺癌組織中Ezrin蛋白表達進行檢測,以探討其在胰腺癌侵襲和轉移中的作用及其對胰腺癌預后的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

取1997年2月至2005年9月中南大學湘雅醫(yī)院和河南大學淮河醫(yī)院手術切除且隨訪資料完整的46例胰腺癌石蠟包埋組織標本,所有標本均由兩位病理專家按照WHO診斷標準進行組織病理學診斷和分級。組織學類型均為胰腺導管腺癌,其中高分化腺癌10例,中分化腺癌 25例,低分化(或未分化)腺癌11例?；颊咝g前均未接受任何化療、放療和免疫治療,其中男 32例,女 14例,年齡35～80(65±9)歲,同時取同期其他手術切除的13例正常胰腺石蠟包埋組織標本作為對照。主要試劑:鼠抗人Ezrin單克隆抗體(工作濃度1∶50)及SABC免疫組織化學試劑盒,購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

采用SABC免疫組織化學法,染色步驟按試劑盒說明書進行。染色前用微波抗原修復10min,用PBS代替一抗作空白對照、正常羊血清代替一抗作陰性對照、已知陽性切片作陽性對照。結果判定:Ezrin陽性顯色呈棕黃色顆粒,以細胞膜或細胞漿內出現明確的棕黃色顆粒為陽性細胞。每例的評判均為高倍(×400)鏡下觀察10個視野所得的結果。由2位病理科醫(yī)生進行雙盲讀片,參考Mathew等[11]報道的方法,綜合染色強度和陽性細胞占總細胞數的百分比進行分析:陰性(-)為無表達;弱陽性(+)為＜50%細胞陽性表達或淺染;強陽性(++)為≥50%細胞陽性表達且深染。

1.3 隨訪

自手術當天起開始計算生存時間,通過門診、信訪、電話等方式對患者進行隨訪,患者死亡或失訪定為隨訪結束點。

1.4 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件對數據進行統(tǒng)計學處理。兩樣本率的比較采用4格表資料的 χ2檢驗或Fisher精確檢驗;多樣本率的比較采用行×列表資料的χ2檢驗或秩和檢驗(Kruskal-Wallis H)。生存分析采用Kaplan-Meier法和log-rank檢驗。顯著性水準α取為0.05。

2 結果

2.1 Ezrin在正常胰腺組織和胰腺癌組織中的表達情況

在13例正常胰腺組織中,7例(53.8%)呈現Ezrin弱陽性表達,陽性顆粒彌漫性分布于細胞漿中。而在胰腺癌組織中,不同標本之間、同一標本的不同癌巢之間,Ezrin表達存在明顯的異質性,從只有少量癌細胞陽性著色到全部癌細胞均呈陽性染色,染色強度亦強弱不等。Ezrin陽性染色多數分布于細胞膜和細胞漿,部分呈細胞膜陽性或細胞漿陽性,見圖1。Ezrin在胰腺癌組織中的陽性表達率為89.1%(41/46),其中強陽性表達率為45.7%(21/46)。癌組織中陽性表達率顯著高于正常胰腺組織(P=0.009,Fisher精確檢驗)。

圖1 Ezrin蛋白在胰腺癌組織中的表達(×400)

2.2 胰腺癌組織Ezrin表達與臨床病理因素之間的關系

Ezrin強陽性表達率隨腫瘤分化程度的降低呈遞增趨勢,3組間差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.725,P=0.021);有淋巴結轉移者Ezrin強陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移者(χ2=3.989,P=0.046)。Ezrin表達與患者年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期無關,見表1。

表1 Ezrin表達與胰腺癌臨床病理因素之間的關系

在6例組織切片(中分化腺癌2例,低分化腺癌4例)中,可見腫瘤浸潤淋巴管或血管,Ezrin在淋巴管或血管癌栓組織中均呈強陽性表達,見圖2。

圖2 Ezrin在淋巴管或血管癌栓組織中的強陽性表達(×400)

2.3 Ezrin表達與胰腺癌術后生存期之間的關系

全部患者術后均獲隨訪(100%),隨訪時間6～54 mon。Ezrin強陽性表達組術后生存時間為9～36 mon,中位生存時間為16 mon,其中1、3 a生存率分別為66.7%(14/21)和4.8%(1/21);Ezrin弱陽性及陰性表達組術后生存時間為8～50 mon,中位生存時間為24 mon,其中1、3 a生存率分別為 80.0%(20/25)和20.0%(5/25)。經log-rank檢驗,2組間差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.860,P=0.0276),見圖3。

圖3 Ezrin強陽性表達組與弱陽性及陰性表達組患者生存曲線

3 討論

胰腺癌發(fā)展迅速,臨床經過兇險,預后極差。雖然在過去的幾十年里,胰腺癌的基礎和臨床研究取得了極大進展,但胰腺癌的綜合治療效果和5 a生存期并未得到根本上的改善[1-2]。大量研究表明,胰腺癌的不良臨床經過除與其特殊解剖學位置及缺乏早期診斷標記物外,還與胰腺癌具有高頻率侵襲轉移的獨特生物學行為密切相關。這必然有其一定的分子基礎,但確切機制尚不完全清楚[1-2]。近年來的研究[3-10]發(fā)現,腫瘤細胞的侵襲轉移能力與細胞骨架的動態(tài)循環(huán)密切相關。癌細胞侵襲進入周圍組織是腫瘤轉移的關鍵,這個過程需要癌細胞的趨化性移行,這不僅要克服上皮細胞間的致密連接、基底膜和細胞外基質的限制,而且還要推開或避開遷移過程中其他細胞的阻擋。細胞間粘附性降低以及癌細胞變形穿過基底膜、降解細胞外基質的能力的獲得均與癌細胞肌動蛋白微絲骨架的聚合、解聚及重排失控有關。因此,細胞骨架可能是腫瘤轉移相關基因和分子促腫瘤侵襲轉移的最終靶點和效應子,成為研究侵襲轉移機制的熱點之一。其中Ezrin由于介導肌動蛋白微絲與細胞膜的連接而尤為引人注目。

Ezrin是Ezrin亞家族的原型,主要存在于上皮細胞的刷狀緣和胎盤的微絨毛中。20多年前,Bretscher[5]首先在雞小腸上皮細胞刷狀緣中發(fā)現存在著大量的這種成分。隨后,陸續(xù)在脊椎動物發(fā)現該家族有4個成員,分別是Ezrin、根蛋白(radixin)、膜突蛋白(moesin)及merlin(也稱schwannomin),前三者在結構和功能上非常相似,故合稱為 ERM家族。生理狀態(tài)下,Ezrin參與細胞絨毛、偽足、粘附位點和分裂期收縮環(huán)的形成。研究證實,作為細胞骨架動態(tài)循環(huán)的組織者,Ezrin通過參與許多腫瘤轉移相關分子如生長因子(如 c-Met等)、粘附分子(如CD44、CD43,ICAM-1 、ICAM-2 、ICAM-3)等介導的信號傳導,和這些分子一起共同組成了腫瘤生長、侵襲和轉移的調節(jié)網絡,其中Ezrin可能起著重要的樞紐作用。大量研究[5-10]顯示,在多種腫瘤組織中,Ezrin過表達或亞細胞定位改變與腫瘤浸潤、轉移和預后密切相關。Bruce等[6]用組織芯片技術對包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結腸癌及多種肉瘤等十多種腫瘤組織和近20種正常組織在內的近5000例標本中Ezrin的表達進行了檢測,結果發(fā)現Ezrin在腫瘤組織中均呈現高表達,其中Ezrin表達與乳腺癌、各種肉瘤的組織學分級或預后密切相關。Kobel等[7]用免疫組織化學的方法研究164例FIGO分期I期的子宮內膜癌患者。結果顯示,Ezrin陽性表達率高達93%,多數呈胞漿表達,且Ezrin陽性表達的腫瘤細胞之間連接較為松散。多因素分析顯示,Ezrin過表達是FIGO分期I期子宮內膜癌患者預后的獨立影響因素。Weng等[8]進一步評估了Ezrin在AJL軟組織肉瘤中的預后價值,發(fā)現Ezrin表達與腫瘤遠處轉移顯著相關,多因素分析表明Ezrin表達可以作為軟組織肉瘤患者低生存率的獨立預后標志。Yeh等[9]研究發(fā)現,在胰腺實性假乳頭狀瘤、黏液囊腺瘤和導管內乳頭狀黏液瘤中,良性腫瘤Ezrin陽性表達主要在細胞漿,而惡性腫瘤主要在細胞膜,提示Ezrin可能在上述腫瘤的惡性轉化中起重要作用;在胰腺導管癌組織中,Ezrin陽性表達主要位于細胞膜,Ezrin膜表達陽性是患者獨立的預后因素。但Torer等[10]研究顯示,胰腺癌組織中,Ezrin表達與腫瘤大小及能否切除密切相關,而與預后無關,認為Ezrin主要在胰腺癌的局部侵襲中起重要作用。但在卵巢癌中,Ezrin低表達或表達丟失則提示腫瘤預后不良[11-12]。提示Ezrin在腫瘤侵襲轉移過程中的作用更具復雜性和組織特異性,其作用機制有待進一步深入研究。

本研究結果顯示,Ezrin在胰腺癌組織中存在過表達,且其過表達與腫瘤分化程度、淋巴結轉移密切相關,而與年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期等因素無關。尤其值得注意的是,在淋巴管或血管癌栓組織中,Ezrin均呈強陽性表達,提示Ezrin可能在胰腺癌侵襲轉移過程中具有重要作用。Ezrin過表達的癌組織可能具有更強的侵襲性和轉移能力。本研究結果還顯示,Ezrin強陽性表達組胰腺癌術后生存時間顯著縮短,提示Ezrin還可作為判斷胰腺癌術后預后的一項重要指標。

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[責任編輯 姬 荷]

Significance of Ezrin expression in pancreatic adenocarcinoma tissues

REN Xue-qun1,LI Yi-xiong2*(1.Department ofGeneral Surgery,Huaihe Af filiated Hospital ofHenan University,K aifeng,Henan 475000,China;2.Department of General Surgery,Xiangya Hospital of Central South University,Changsha,Hunan 410008,China)

Objective:To explore the significance of Ezrin expression in pancreatic adenocarcinoma tissues.Methods:Expression of Ezrin in 46 pancreatic adenocarcinoma tissues and 13 normal tissues of pancreas was examined by immunohistochemical staining.The relationship of Ezrin expression to clinicopathological characteristics and prognosis of patients after operation were analyzed.Results:The positive rate of Ezrin immunostaining in pancreatic adenocarcinoma tissues(89.1%)was significantly higher than in normal tissues of pancreas(53.8%)(P＜0.01).In pancreatic adenocarcinomas,the strong positive rate of Ezrin immunostaining was 45.7%(21/46).The strong positive rate of Ezrin immunostaining increased significantly with the worsening of histological grade(P＜0.05).The strong positive rate of Ezrin expression in lymph-node metastatic group(63.2%)was significantly higher than in without(33.3%)(P＜0.05).The median post-operative survival time was 16 months(range from 9 to 36 months)in the group with strong positive Ezrin expression,and 24 months(range from 8 to 50 months)in the group with weak positive and negative Ezrin expression(P＜0.05).Conclusion:Ezrin protein is overexpressed in pancreatic adenocarcinoma tissues,and their overexpression is significantly associated with the poor biological behavior of pancreatic adenocarcinoma,which indicates that Ezrin may be a valuablemolecular marker for predicting the prognosis of pancreatic adenocarcinoma.

Ezrin;Pancreatic Adenocarcinoma;Immunohistochemistry

R735.9

A

1672-7606(2010)02-0094-04

2010-03-10

任學群(1964-),男,河南正陽人,博士,教授,主任醫(yī)師,從事肝膽胰外科的教學及研究工作。

*通訊作者:李宜雄(1959-),男,湖南嘉禾人,教授、主任醫(yī)師,博士生導師,從事胰腺、膽道外科的臨床工作及相關基礎研究。