HPLC法測定丹參調(diào)肝顆粒中丹參酮ⅡA的含量

劉豐賢，劉 江，周 鵬

（湖南師范大學醫(yī)學院，湖南長沙 410013）

丹參調(diào)肝顆粒是長沙市方泰醫(yī)院自主研制的中藥治療乙肝的處方，由丹參、白術(shù)、枳殼等12味中藥組成。功能活血行氣，調(diào)和肝脾。用于血瘀氣滯，肝脾失和所致脅肋疼痛，腹脹便溏，神疲納差，舌質(zhì)紫暗或有瘀斑等，慢性乙型肝炎有上述見證者。本方以丹參活血祛瘀、清血熱，除煩滿為君藥。因此測定丹參中的成分更能有效的控制樣品質(zhì)量，本實驗采用HPLC法處方中丹參酮ⅡA的含量[1]，方法簡單，結(jié)果可靠。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

島津LC-210ATvp型高效液相色譜儀，SPD-210Avp可見紫外檢測器及浙大N3000雙通道色譜工作站。

1.2 樣品

長沙市方泰醫(yī)院醫(yī)療機構(gòu)制劑"丹參調(diào)肝顆粒"，批號(90021,900423,90906,91024,91217)。

1.3 試劑

對照品丹參酮ⅡA(TanshinoneⅡA，批號110766-200417)購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純，水為屈臣氏蒸餾水重蒸餾。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：5μm，C18-MS-Ⅱ，4.6×250mm柱，檢測波長：270nm，流速：1.00mL/min。流動相：甲醇-水(75:25)。

2.2 標準溶液配制

精密稱取0.01005g置10mL量瓶，用甲醇稀釋至刻度，輕輕振搖，使溶解，得標準品母液備用。

2.3 供試品溶液配制

取丹參調(diào)肝顆粒1包，研碎，過80目篩，取1g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，加甲醇25mL超聲30min，冷卻，用甲醇補充損失重量，搖勻，濾過即得。

2.4 陰性樣品溶液的制備

精密稱取陰性樣品1g，按供試品溶液的方法制成陰性樣品溶液。

2.5 標準曲線的繪制

分別取 2.2項下的標準母液溶液 0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL稀釋至1mL。得到濃度分別為0.1005 mg/mL、0.2010 mg/mL、0.3015 mg/mL、0.4020 mg/mL、0.5025 mg/mL、0.6030 mg/mL。分別注入高液色譜儀，進樣量20 μL。以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制表尊曲線，得回歸方程。y=13561616.8x+310425.8，R2=0.9992，線性范圍：2μg～12μg。

2.6 精密度試驗

精密吸取標準品溶液（0.5025 mg/mL）20μL，連續(xù)進樣6次。測定結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗(RSD為0.55)

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品（090906）溶液20μL，分別在0、2、4、8、12、24h進樣1次，測定結(jié)果見表2，供試品溶液24h內(nèi)，丹參酮ⅡA穩(wěn)定。

表2 樣品穩(wěn)定性試驗(RSD為0.90)

2.8 加樣回收率

取同一批樣品090906一包，研磨，過80目篩，精密稱取1g，加標準品溶液（0.0402mg/mL）25mL，制備成供試品液，精密吸取20μL，連續(xù)進樣6次，測定結(jié)果見表3，平均回收率為99.3%。

表3 加樣回收率試驗(RSD為0.90)

2.9 樣品測定

取三批樣品，制成供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液20μL，進樣測定，按回歸方程計算丹參酮ⅡA的含量，結(jié)果見表4，色譜圖見圖1～3。

表4 5批樣品中丹參酮ⅡA品含量

3 討論

本文實驗摸索了采用HPLC法測定丹參調(diào)肝顆粒中丹參酮ⅡA的含量。在提取方法的選擇上，我們摸索了甲醇、乙醇以及不同濃度的含水醇等溶劑，用浸漬、回流和超聲提取，經(jīng)過反復試驗發(fā)現(xiàn)本品用甲醇超聲提取，供試液在24h內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定。在流動相的選擇上，我們試驗了不同比例的乙腈-水、甲醇-水甲醇-水(75:25)，試驗結(jié)果表明丹參酮ⅡA在甲醇-水(75:25)作為流動相，流速1mL/min時分離效果很好，理論塔板數(shù)達到34500。綜上所述，本文所采用的方法簡單、穩(wěn)定、可靠，為制定該制劑的企業(yè)標準，進一步提升醫(yī)療制劑的質(zhì)量標準做了有益的探索。

[1]中國藥典2010年版一部[S].2010.70-71,附錄36-38.