聯(lián)合應(yīng)用腹水DNA含量測定鑒別腹水性質(zhì)的診斷價(jià)值

武金寶 慧 妍 孟憲梅 黨 彤*

包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院內(nèi)蒙古消化病研究所（014030）

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院2008年11月至2009年11月入院進(jìn)行治療的腹水患者25例，其中男性患者16例，女性患者9例，患者年齡在18～81歲，中位年齡為56歲。其中惡性腹水患者12例，并且有6例患者胃癌腹膜轉(zhuǎn)移，有3例患者為原發(fā)性肝癌，有2例結(jié)腸癌腹膜轉(zhuǎn)移，有1例卵巢癌腹膜轉(zhuǎn)移。剩下的為13例良性腹水患者，其中有6例為肝硬化腹水，有6例為結(jié)核性腹膜炎，有1例為細(xì)菌性腹膜炎。惡性腹水的診斷依據(jù)：腹水中發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤原發(fā)灶，在腹水中找到惡性腫瘤細(xì)胞揮著唄腹腔鏡證實(shí)有腹膜發(fā)生轉(zhuǎn)移。良性腹水的診斷依據(jù)：在各項(xiàng)檢查中均未發(fā)現(xiàn)有惡性腫瘤現(xiàn)象，并且患者自身有明確的病因。

1.2 方法

運(yùn)用行腹腔穿刺技術(shù)在患者體內(nèi)抽取腹水100～500mL，對其進(jìn)行腹水DNA含量的測定，并且運(yùn)用腹水細(xì)胞學(xué)、癌胚抗原以及糖抗原19-9等技術(shù)對其進(jìn)行檢查。運(yùn)用流式細(xì)胞檢測法對腹水DNA含量進(jìn)行測定與鑒別。在儀器方面選擇美國COULTER公司生產(chǎn)的EPTCS XLMCL流式細(xì)胞儀，以及DNA-PREP REAGENTS KIT試劑盒。每次檢測前要將變異系數(shù)調(diào)制3%以內(nèi)，操作時(shí)必須要使用健康人新鮮外周血淋巴細(xì)胞校準(zhǔn)儀器進(jìn)行調(diào)制。然后按照以下步驟進(jìn)行操作，首先進(jìn)行DNA熒光染色取經(jīng)抗凝以及細(xì)胞懸液制備的腹水操作，然后進(jìn)行離心，并且在離心操作完成后對脫落細(xì)胞進(jìn)行收集，再進(jìn)行PBS洗滌操作。操作時(shí)，將細(xì)胞數(shù)調(diào)節(jié)至每升的規(guī)定數(shù)據(jù)之間，然后取100μL的細(xì)胞懸液，并在里面加入打孔液以及固定液100μL，加入含有Rnase的PI 100μL，最后對其染色30min。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用COULTER公司的MCYCLE軟件進(jìn)行分析，以JANET為參照標(biāo)準(zhǔn)，正常人淋巴細(xì)胞DNA含量為對照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行二倍體與異倍體的判斷。

2 結(jié) 果

FCM檢測出非整體為陽性，將其與CEA、CA19-9陽性率進(jìn)行比較得出，腹水FCM的敏感性為91.7%，明顯的高于其他方法。FCM的假陽性率為7.7%，CEA與CA19-9的假陽性率分別為23.1%和15.4%，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后發(fā)現(xiàn)，各種檢測方法之間無顯著性差異，而運(yùn)用腹水細(xì)胞學(xué)技術(shù)進(jìn)行檢查時(shí)，雖然特異性為100%，但是敏感性卻比較低，僅為41.7%。

3 討 論

臨床上對良、惡性腹水的鑒別診斷仍然是一個(gè)比較棘手的問題，檢測者如果由于檢測方法或自身因素而誤把良性腹水診斷為惡性腹水，對患者來說，無疑會對他們的精神和肉體帶來嚴(yán)重傷害。而檢測者如果由于檢測方法或自身因素誤把惡性腹水診斷為良性腹水，則會延誤患者的治療時(shí)機(jī)，因此當(dāng)前醫(yī)學(xué)上急需解決的重要課題就是如何能提高腹水的診斷準(zhǔn)確率。

DNA含量的增多是腫瘤無限制迅速增長的物質(zhì)基礎(chǔ)，而DNA的含量異常，且異倍體的存在則是惡性腫瘤的一個(gè)重要標(biāo)志。本研究發(fā)現(xiàn)，腹水的細(xì)胞學(xué)檢查、腹水CEA以及CA19-9測定等檢測技術(shù)的陽性檢出率明顯低于FCM檢測技術(shù)的陽性檢出率。腹水DNA的敏感性指數(shù)低，僅為41.7%，雖然腹水DNA檢測技術(shù)的特異性指數(shù)高達(dá)100%，但是在腹水細(xì)胞學(xué)不典型時(shí)，診斷仍然會比較困難。而運(yùn)用流式細(xì)胞檢測技術(shù)，敏感性指數(shù)為91.7%，明顯增高。如果將CEA或者CA19-9檢測技術(shù)并行聯(lián)合，敏感性指數(shù)則分別為95.2%和95.8%。因此，除常規(guī)檢測腹水脫落細(xì)胞、CEA、CA19-9等，在臨床工作中，還應(yīng)積極開展對腹水DNA含量的測定工作，對于惡性腹水可能性較大的患者更應(yīng)該如此，以此來對診斷的準(zhǔn)確率進(jìn)行提高[1-3]。

雖然在對腹水DNA含量進(jìn)行測定時(shí)，會有一些不可控的因素產(chǎn)生，如一過性標(biāo)本制備不當(dāng)及數(shù)據(jù)分析誤差。但是對腹水DNA含量進(jìn)行檢測相比其他方法有很多優(yōu)點(diǎn)，標(biāo)本容易收集，無創(chuàng)性，其次標(biāo)本也易處理，值得在臨床推廣使用。

[1] 湯釗猷.現(xiàn)代腫瘤學(xué)[M].上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,2003:124-125.

[2] 王強(qiáng),吳清明.端粒酶對良、惡性腹水的鑒別診斷價(jià)值[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2009,13(6):45-46.

[3] 孔超美,陳平南.癌標(biāo)志物聯(lián)合檢測鑒別良、惡性腹水的價(jià)值[J].江蘇醫(yī)藥,1995,21(4):242-243.