氧化苦參堿提取工藝的研究

減　晉　李　杰　李慧星

摘要：采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)從苦參藥材中提取氧化苦參堿的工藝進(jìn)行了研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，最適提取溶劑為乙醇溶液，最佳提取條件為：溶劑乙醇濃度為60％、料液比為1:30、溫度為80℃、時(shí)間為85min，在此條件下提取氧化苦參堿得率達(dá)到6.58 mg·g^－1，較優(yōu)化前提高了2.8倍。

關(guān)鍵詞：苦參；氧化苦參堿；提取工藝

中圖分類號(hào)：R284.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-2349(2009)06-0055-02

苦參又名地槐、野槐、牛參等，為豆科槐屬植物(Sophoraflavescens Ait)的干燥根，主產(chǎn)于我國(guó)山西、河南、河北及西北各?、蟆？鄥⒑卸喾N生物堿，氧化苦參堿是其中的主要有效藥用成分?，F(xiàn)代藥理研究表明，氧化苦參堿具有抗炎、保肝、抗腫瘤、抗心律失常和免疫調(diào)節(jié)等功能。近年來有關(guān)苦參生物堿提取的研究報(bào)道多數(shù)集中在其分析檢測(cè)上，所采用的提取方法多為分析檢測(cè)其含量時(shí)的前處理方法，存在著工藝路線長(zhǎng)、步驟多、效率低、能耗物耗高等問題，缺少生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值。本研究采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)探討了溶劑種類、溶劑濃度、料液比、提取溫度和時(shí)間對(duì)氧化苦參堿提取得率的影響，以期確定其最佳提取條件，為實(shí)際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器UV-2000紫外可見分光光度計(jì)(尤尼柯上海儀器有限公司)，BS110S電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)，PHS-3C酸度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，R201D-Ⅱ旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申順生物科技有限公司)，SHB-3循環(huán)水多用真空泵(鄭州杜甫儀器廠)，JY96－Ⅱ超聲波儀(寧波海曙祥鑫科教儀器有限公司)，DZKW-4恒溫水浴鍋(北京中興儀器廠)，回流提取裝置(自制)。

1.2材料氧化苦參堿對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品，中國(guó)藥品生物制品檢定所；苦參購(gòu)自南陽市張仲景中藥材市場(chǎng)；硅膠G預(yù)制板，山東省青島海洋化工廠；乙醇、甲醇、三氯甲烷、氨水、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、碘、溴麝香草酚藍(lán)等均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.1.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制精密稱取干燥至恒重的氧化苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品，以無水乙醇溶解，配制成每1mL含2.5mg的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液10、20、30、40、50μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇－氨水(5:0.6:0.2)為展開劑展開，展距約10cm取出，晾干，碘蒸氣顯色。刮下氧化苦參堿斑點(diǎn)處硅膠，移入離心管中，加無水乙醇6mL，超聲提取2次，每次15min，離心15min(2000r.min^-1)，傾出上清液合并至50mL具塞三角燒瓶中，水浴蒸干。冷至室溫后分別加入pH為7.6的0.0125％溴麝草酚蘭緩沖溶液和氯仿各6mL，密塞，振搖2min，移入50mL分液漏斗中，靜置30min，分出氧仿層于具塞試管中，以氯仿為空白，置入分光

光度計(jì)中在波長(zhǎng)為410nm處測(cè)各濃度吸光度。以濃度(μg.mL^-1)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：A=0.0096×－0.0853，r=0.999

2.2提取液樣品的測(cè)定

2.2.1提取液樣品的制備苦參藥材經(jīng)干燥、粉碎，過20目篩。準(zhǔn)確稱取苦參藥材粉末10.0g，按試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的條件回流提取3次，過濾，合并濾液。濾液經(jīng)減壓濃縮蒸干，殘?jiān)脽o水乙醇溶解、定容至100mL，作為提取液樣品備用。

2.2.2測(cè)定方法精密吸取提取液樣品20μL，按2.1.2項(xiàng)的方法進(jìn)行點(diǎn)樣、展開、刮板、洗脫、顯色、測(cè)定。由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出樣品的濃度，計(jì)算出樣品相應(yīng)的產(chǎn)品得率。

2.3單因素試驗(yàn)及結(jié)果

2.3.1提取溶劑的選擇準(zhǔn)確稱取苦參藥材粉末5份，每份10.0g，在其它提取條件相同的情況下，分別用甲醇、氯仿、95％乙醇、水、0.2％鹽酸為溶劑回流提取，按2，2項(xiàng)的方法測(cè)定，計(jì)算出氧化苦參堿得率(每1g

苦參藥材經(jīng)提取所得氧化苦參堿的mg數(shù)，mg·g^-1)分別為1.91、1.44、2.35、1.82、2.06。結(jié)果表明，在所選用的5種提取溶劑中，乙醇溶劑提取的氧化苦參堿得率最高，為2.35mg·g^－1。因此，乙醇為最適提取溶劑。

2.3.2提取溶劑濃度的選擇準(zhǔn)確稱取苦參藥材粉末7份，每份10.0g，在其它提取條件相同的情況下，分別用體積分?jǐn)?shù)為35％、45％、55％、65％、75％、85％、95％的乙醇溶液為溶劑回流提取，按2.2項(xiàng)的方法測(cè)定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^－1)分別為2.19、2.34、2.57、2.76、2.65、2.51、2.36。由此可知，乙醇溶液為提取溶劑時(shí)，適宜的乙醇濃度為65％左右。

2.3.3提取料液比的選擇準(zhǔn)確稱取苦參藥材粉末6份，每份10.0g，采用65％乙醇溶液為溶劑，分別按料液比為1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30進(jìn)行回流提取，按2.2項(xiàng)的方法測(cè)定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^－1)分別為2.17、2.53、2.75、2.78、2.83、2.85。由試驗(yàn)結(jié)果可以看出，適宜的提取料液比為1:25左右。

2.3.4提取時(shí)間的選擇準(zhǔn)確稱取苦參藥材粉末8份，每份10.0g，采用65％乙醇溶液為溶劑，料液比為1:25，提取時(shí)間(min)分別按30、40、50、60、70、80、90、100進(jìn)行回流提取，按2.2項(xiàng)的方法測(cè)定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^-1)分別為2.87、3.59、3.72、3.97、4.35、4.49、4.46、4.48。由此可以看出，適宜的提取時(shí)間為80min左右。

2.3.5提取溫度的選擇準(zhǔn)確稱取苦參藥材粉末8份，每份10.0g，采用上述試驗(yàn)所確定的提取溶劑、料液比和提取時(shí)間，提取溫度(℃)分別按25、35、45、55、65、75、85、95進(jìn)行回流提取，按2.2項(xiàng)的方法測(cè)定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^－1)分別為1.26、1.97、2.53、3.76、4.51、4.85、4.82、4.83。結(jié)果表明，適宜的提取溫度為75℃左右。

2.4正交試驗(yàn)及結(jié)果

2.4.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)為確定最佳提取條件組合，進(jìn)一步提高提取液的氧化苦參堿得率，根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。選擇設(shè)計(jì)的正交試驗(yàn)因素和水平見表1。

2.4.2正交試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確稱取苦參藥材粉末9份，每份10.0g，按表1設(shè)計(jì)的因素和水平，采用L₉(3⁴)正交表安排試

驗(yàn)。按2.2項(xiàng)的方法測(cè)定，得出各試驗(yàn)處理的氧化苦參堿得率(mg·g^-1)，結(jié)果見表2。

由表2正交試驗(yàn)結(jié)果的極差分析可以看出，各因素對(duì)氧化苦參堿得率影響的主次順序?yàn)閏>A>B>D；最佳提取條件為A₁B₃C₃D₃，在此條件下提取氧化苦參堿得率達(dá)到6.58mg·g^-1。

2.4.3正交試驗(yàn)結(jié)果的驗(yàn)證準(zhǔn)確稱取苦參藥材粉末3份，每份10.0g，按正交試驗(yàn)所確定的最佳提取條件A₁B₃C₃D₃進(jìn)行3次平行提取試驗(yàn)，按2.2項(xiàng)的方法測(cè)定，得出氧化苦參堿得率(mg·g^－1)分別為6.61、6.57、6.59。結(jié)果表明，所確定的最佳提取條件穩(wěn)定可靠。

3討論

提取溶劑選擇試驗(yàn)的結(jié)果表明，乙醇為溶劑時(shí)氧化苦參堿得率最高，而且乙醇具有毒性小、容易回收、提取液雜質(zhì)含量少等特點(diǎn)，故選擇乙醇作為氧化苦參索的最佳提取溶劑。

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上經(jīng)正交試驗(yàn)，確定了氧化苦參堿的最佳提取條件為A₁B₃C₃D₃，即提取溶劑乙醇濃度為60％、提取料液比為1:30、提取溫度為80℃、提取時(shí)間為85min，在此條件下提取氧化苦參堿得率達(dá)到6.58mg·g^－1，較優(yōu)化前乙醇為提取溶劑時(shí)的氧化苦參堿得率2.35mg·g^－1提高了2.8倍。

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