沈陽(yáng)市2013年副溶血弧菌臨床分離株的血清分型研究

劉娜等

[摘要] 目的 了解2013年沈陽(yáng)市副溶血弧菌臨床分離株血清型分布。 方法 2013年5—9月采集沈陽(yáng)市食源性監(jiān)測(cè)臨床病例250份進(jìn)行分離培養(yǎng)、生化鑒定，采用血清玻片凝集試驗(yàn)對(duì)67株分離株進(jìn)行血清分型。結(jié)果 67株副溶血弧菌臨床分離株可分為16個(gè)血清型，其中以O(shè)3：K6型為主，約占32.84%。結(jié)論 2013年沈陽(yáng)市食源性監(jiān)測(cè)副溶血弧菌臨床分離株的血清型呈現(xiàn)多樣性，O3：K6型是引起食物中毒的優(yōu)勢(shì)血清型。

[關(guān)鍵詞] 副溶血弧茵；血清分型；食源性致病菌

[中圖分類號(hào)] R378 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2015）02（c）-0015-03

[Abstract] Objective To study the serotype distribution of Vibrio parahaemolyticus isolated clinically in Shenyang in 2013. Methods 250 clinical cases with food-borne monitoring in Shengyang were collected from May to September 2013 for isolating， culturing and identifying biochemically. And slide serum agglutination test was used to detect the serotype of the isolated 67 strains of Vibrio parahaemolyticus. Results The 67 strains of Vibrio parahaemolyticus isolated clinically could be classified into 16 serotypes， of which， the predominant serotype was O3：K6（32.84%）. Conclusion The serotypes of Vibrio parahaemolyticus isolated clinically for food-borne monitoring in Shenyang in 2013 showed high diversity， and the predominant serotype O3：K6 could cause food poisoning.

[Key words] Vibrio parahaemolyticus； Serotype； Food-borne pathogen

副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）屬于弧菌科弧菌屬的細(xì)菌，其作為嗜鹽細(xì)菌屬于革蘭陰性菌的一種，并且與哈氏弧菌、霍亂弧菌和創(chuàng)傷弧菌屬于同一種屬。VP在海產(chǎn)品（如海底泥沙、海水、浮游生物和魚貝類等）和腌制食品中廣泛存在。腹瀉、頭痛、嘔吐、惡心、腹部痙攣和低熱等急性胃腸炎的癥狀[1]皆可由于直接或間接食用被VP污染的食品而引起。即使人體自身免疫系統(tǒng)可以對(duì)大部分因VP引起的胃腸炎起到抑制作用，但仍然可以對(duì)肝病患者和免疫紊亂的群體造成生命威脅。副溶血弧菌不但能夠引起胃腸炎，還能導(dǎo)致傷口感染以及敗血癥[2]。

在世界上的所有沿海國(guó)家中發(fā)生的食源性中毒事件中由副溶血弧菌引起的占到一半以上，包括美國(guó)、日本、東南亞等沿海國(guó)家均有報(bào)道。副溶血弧菌是導(dǎo)致中國(guó)沿海地區(qū)居民夏、秋季食物中毒和急性腹瀉的主要原因。副溶血弧菌是以血清型為主要分類基礎(chǔ)的，并由菌體的抗原（O）和莢膜（K）的抗原特性所決定。副溶血弧菌的血清分型是利用O抗原和K抗原的組合（包括11種不同的O抗原和65種不同的K抗原）來進(jìn)行分類的，針對(duì)沈陽(yáng)地區(qū)副溶血弧菌血清分型資料不全面的現(xiàn)狀，該研究對(duì)沈陽(yáng)市2013年5—9月食源性疾病病例監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院副溶血弧菌臨床菌株進(jìn)行血清學(xué)分型，為該地區(qū)預(yù)防副溶血弧菌感染和流行病學(xué)調(diào)查提供全面的科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

副溶血弧菌臨床菌株分離自食源性疾病病例監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)醫(yī)院臨床病例，2013年5月—9月共采集250份樣本，分離得到67株副溶血弧菌，采集分離時(shí)間為7—10月份。

1.2 菌株的分離培養(yǎng)

菌株的分離培養(yǎng)使用TCBS培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、三糖鐵瓊脂，其中營(yíng)養(yǎng)瓊脂和三糖鐵瓊脂分別加入3% NaCl。將采集的糞便標(biāo)本接種于37℃ TCBS瓊脂中，培養(yǎng)18～24 h，將TCBS瓊脂上（不分解蔗糖）的透明菌落，接種于37℃三糖鐵瓊脂，同樣培養(yǎng)18～24 h，K/A，不產(chǎn)硫化氫者做O-F試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)和耐鹽生長(zhǎng)試驗(yàn)。發(fā)酵型、氧化酶陽(yáng)性，0%NaCl和10%NaCl不生長(zhǎng)、3% NaCl和7% NaCl生長(zhǎng)者為副溶血弧菌疑似菌落，做系統(tǒng)生化鑒定。

1.3 生化反應(yīng)和血清分型

生化反應(yīng)用法國(guó)bioMerieux生產(chǎn)的API20NE生化試劑條進(jìn)行鑒定，按說明書操作。

血清分型用溶血性弧菌的血清分型診斷血清（Denka Seiken， Japan），該血清含O1～O11共11個(gè)O抗原診斷血清，65個(gè)K抗原診斷血清。方法為取一定量細(xì)菌于3﹪NaCl鹽水中，121℃滅菌30 min，離心（4 000 r/min，10 min），棄上清，用生理鹽水洗滌3次。取菌體，進(jìn)行O抗原血清凝集試驗(yàn)。K抗原鑒定：直接取濃菌懸液與多價(jià)抗K血清按適當(dāng)比例混合，出現(xiàn)凝集反應(yīng)時(shí)再用單個(gè)抗血清進(jìn)行檢測(cè)。用生理鹽水作為對(duì)照。

2 結(jié)果

2.1 分離副溶血性孤菌菌株的生物學(xué)性狀

分離的副溶血性弧菌67株，均在TCBS平板上呈綠色、中，心較深、濕潤(rùn)、形態(tài)稍凸起。氧化酶陽(yáng)性。在3% Nacl雙糖鐵上-/+，H2S-，動(dòng)力+，耐鹽性試驗(yàn)：0%、10%Nacl胨水中不生長(zhǎng)，3%、7%Nacl胨水中生長(zhǎng)良好，挑取純培養(yǎng)物用API20NE生化試劑條鑒定，結(jié)果見表1。endprint

2.2 血清分群情況

分離的67株副溶血性弧菌可分為5個(gè)O血清群，其中O3群占58.21%（39/67）、O4群占35.82%（24/67）、O1群占2.99%（2/67）、O2群占1.49%（1/67）、O10群占1.49﹪（1/67），如圖1所示。

3 討論

副溶血弧菌擁有極為復(fù)雜的抗原構(gòu)造，是沿海地區(qū)引起食物中毒和急性腹瀉的主要致病菌，探究副溶血弧菌臨床血清分型的分布情況，對(duì)該病的預(yù)防控制具有重要的意義。研究顯示，2013年食源性疾病監(jiān)測(cè)臨床病例副溶血弧菌分離株67株，共分為16種不同的血清型，其中菌株數(shù)>5的血清型有3種，分別為O3：K6、O4：K68和O4：K8，由此也說明這幾種血清型為沈陽(yáng)地區(qū)副溶血弧菌比較常見的血清型。其中最主流的血清型為O3：K6，所占比例為32.84﹪，這與國(guó)內(nèi)外的相關(guān)報(bào)道是一致的[3-6]。其次為O4：K68，所占比例為13.43﹪，這與報(bào)道中除O3：K6外O4：K8為較為常見的血清型稍有不同[7-8]，國(guó)外有報(bào)道認(rèn)為，O4：K68血清型可能是由O3：K6通過其O抗原和K抗原的突變遺傳進(jìn)化而來[9]。日本曾近連續(xù)12年調(diào)查食源性副溶血弧菌的血清型，發(fā)現(xiàn)每年最主流的血清型別都有很大的不同[10]。2005年沈陽(yáng)地區(qū)引起食物中毒的副溶血弧菌血清型主要以O(shè)3群和O1群為主[11]，通過對(duì)2013年沈陽(yáng)市食源性疾病監(jiān)測(cè)臨床分離株血清型的鑒定，目前沈陽(yáng)市副溶血弧菌血清型主要以O(shè)3和O4為主，同時(shí)在分離株中發(fā)現(xiàn)3株新血清型，4株K混合多價(jià)凝集但單價(jià)不能定型，說明副溶血弧菌血清型具有多樣性。該研究缺少毒力基因方面的檢測(cè)，結(jié)合血清分型共同分析，以了解分離株的毒力基因特征，以及與血清型的內(nèi)在聯(lián)系，有待今后進(jìn)一步考察。

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（收稿日期：2014-10-28）endprint