探討溶血對(duì)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)乙肝表面抗原的影響

牛平英

[摘要] 目的：探討溶血對(duì)乙型肝炎（乙肝）表面抗原測(cè)定的影響。方法：采用ELISA酶聯(lián)免疫法測(cè)定乙肝表面抗原。結(jié)果：100例溶血標(biāo)本中，76例標(biāo)本乙肝表面抗原陰性，10例乙肝表面抗原假陽性，14例乙肝表面抗原陽性。結(jié)論：溶血影響乙型肝炎表面抗原陰性的測(cè)定結(jié)果，而對(duì)乙型肝炎表面抗原陽性無影響。

[關(guān)鍵詞] 溶血；乙型肝炎；表面抗原；酶聯(lián)免疫法

[中圖分類號(hào)] R373.2+1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]C [文章編號(hào)]1674-4721（2009）05（a）-160-01

溶血是臨床檢驗(yàn)中最常見的一種干擾和影響因素。除常見的紅細(xì)胞破壞外，血小板、白細(xì)胞等血細(xì)胞破壞釋放的某些胞內(nèi)成分也可干擾或影響臨床檢驗(yàn)結(jié)果的判定。乙型肝炎表面抗原的檢測(cè)是診斷乙肝的主要指標(biāo)，隨著檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，酶聯(lián)免疫法因其簡(jiǎn)便，靈敏度高，特異性強(qiáng)，不需要特殊設(shè)備的特點(diǎn)，而被廣泛應(yīng)用。但是，由于各種原因造成的溶血，非特異性物質(zhì)對(duì)試驗(yàn)造成影響，致使檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)假陽性，現(xiàn)分析如下：

1資料與方法

1.1一般資料

健康人體檢，乙肝患者檢查。

1.2試劑

乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法），上?？迫A生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3方法

溶血血清制備，將待測(cè)血清放置于低溫冰箱（-40℃）內(nèi)凍結(jié)20 min后，取出融化，以3000 r/min離心10 min，分離溶血血清。溶血和不溶血各1份。

從冰箱取出試劑盒室溫放置30 min，微孔反應(yīng)條中每孔加入待測(cè)標(biāo)本50 μl，設(shè)陰陽性對(duì)照各2孔，每孔加入陰性對(duì)照（或陽性對(duì)照）各1滴，并設(shè)空白對(duì)照1孔。然后每孔加入酶結(jié)合物1滴（空白對(duì)照除外），充分混勻，封板，置37℃避光孵育30 min。棄孔內(nèi)液體，洗板5次后拍干。每孔加顯色劑A和B各1滴，充分混勻，封板，置37℃避光孵育15 min，目測(cè)比色，肉眼判斷結(jié)果：顯藍(lán)色為陽性（+），無色為陰性（-）。

2結(jié)果

①14例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原陽性結(jié)果完全一致。②10例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原陽性結(jié)果不一致，出現(xiàn)假陽性。經(jīng)二步法：從冰箱取出試劑盒室溫放置30 min，微孔反應(yīng)條中每孔加入待測(cè)標(biāo)本50 μl，設(shè)陰陽性對(duì)照各2孔，每孔加入陰性對(duì)照（或陽性對(duì)照）各1滴，并設(shè)空白對(duì)照1孔。37℃避光孵育30 min，棄孔內(nèi)液體、洗板5次拍干，每孔加酶結(jié)合物1滴（空白對(duì)照除外），充分混勻，封板，然后在37℃避光孵育30 min，棄孔內(nèi)液體，洗板5次拍干，加顯色劑A和B各1滴，充分混勻，封板，37℃避光孵育15min，目測(cè)比色，肉眼判斷結(jié)果:HBsAg顯藍(lán)色為陽性（+），無色為陰性（-），其結(jié)果均為陰性。③76例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原陰性結(jié)果完全一致。

溶血對(duì)陰性標(biāo)本檢測(cè)易出現(xiàn)假陽性，陽性標(biāo)本無影響。

3討論

3.1避免使用溶血標(biāo)本及溶血的原因

①主要有體外溶血和體內(nèi)溶血兩種。體外溶血可由物理因素（如機(jī)械性破壞、冰凍）、化學(xué)因素（如血樣接觸表面活性劑）和代謝性因素（如遺傳病引起的血細(xì)胞脆性增加）引起。體內(nèi)溶血?jiǎng)t可由物理因素（人工心臟瓣膜或大血管手術(shù)后）、生物因素（如惡性瘧疾）和藥物毒性反應(yīng)等因素引起。②采血過程中混入酒精、碘伏致使紅細(xì)胞破壞引起的溶血。③由于病人嚴(yán)重脫水、低血容量休克等原因?qū)е麓┐汤щy造成的溶血。④由于抽血器具質(zhì)量不合格，如真空管負(fù)壓不夠或塑料試管質(zhì)量較差導(dǎo)致的溶血。⑤用干燥管采血，為了盡快分離血清，用竹簽攪拌不當(dāng)引起的溶血等。為了排除溶血對(duì)臨床檢驗(yàn)的干擾和影響，要熟練操作，避免人為因素導(dǎo)致溶血的發(fā)生。

3.2 溶血標(biāo)本采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)

乙型肝炎表面抗原易出現(xiàn)假陽性，分析原因，可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素）同辣根過氧化物酶作用相似，能與聚乙烯孔內(nèi)預(yù)包被的抗原或抗體結(jié)合，在洗滌過程難以完全洗脫，其可使過氧化氫釋放出原生態(tài)氧，從而催化底物甲聯(lián)苯胺生成可溶性物質(zhì)顯色，使乙型肝炎表面抗原易出現(xiàn)假陽性。由于一步法洗滌步驟往往難以完全洗脫，殘留的過氧化物酶催化底物四甲基聯(lián)苯胺顯藍(lán)色，使乙肝標(biāo)志物HBsAg產(chǎn)生假陽性。二步法首先將血清洗掉，殘留的過氧化物酶含量極微，溫育過程中不會(huì)與酶結(jié)合物所含抗原與抗體結(jié)合，再經(jīng)第二次洗滌，大大降低了殘留的可能性，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確無誤。

3.3對(duì)待結(jié)果要嚴(yán)謹(jǐn)

對(duì)于乙肝表面抗原陽性的溶血標(biāo)本，其結(jié)果一定要慎重，做到準(zhǔn)確無誤，否則，會(huì)給患者帶來極大的痛苦，造成極大的經(jīng)濟(jì)和精神壓力。

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(收稿日期：2009-03-04)