羅運(yùn)好 黃漢輝 王燕莉
[摘要]目的:通過觀察丙戊酸鈉(VPA)作用后的Wistar 幼鼠的肝功能、瘦素、胰島素的變化分析對其影響因素。方法:選用SPF級3周齡雄性Wistar大鼠36只,平均體重48 g。并隨機(jī)分為兩組(每組23只) ,空白對照組:經(jīng)口灌胃等量蒸餾水;VPA組:經(jīng)口灌胃VPA 300 mg/(kg·d),每周2次;3個(gè)月后檢測體重變化、瘦素、胰島素、血清ALT、血清AST、血清GST、肝MDA、肝GSH以及肝GST。結(jié)果:與空白對照組比較,VPA組AST、肝GST、瘦素、胰島素顯著升高(P<0.01),體重顯著增加(P<0.05),肝GSH含量顯著降低(P<0.01),而血清ASL、血清GST、肝MDA則均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論:長期應(yīng)用VPA 會(huì)造成肝毒性及心血管系統(tǒng)潛在危險(xiǎn)。
[關(guān)鍵詞]丙戊酸鈉;動(dòng)物實(shí)驗(yàn);毒理試驗(yàn)
[中圖分類號] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1674-4721(2009)05(a)-059-02
Effects of valproate on metabolism in rats and liver toxicity tests
LUO Yunhao,HUANG Hanhui,WANG Yanli
(The third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College Pharmacy,Guangzhou 510150,China)
[Abstract]Objective: To investigate the effects of valproate sodium(VPA) on hepatic injury and leptin,insulin via the observations of biochemical indicators in immature rat. Methods: Sixty 3-week-old male Wistar rats were randomly divided into two groups: experimental groups(VPA group) and negative control group (23 for each group).After 3 months,test the weight , Serumleptin, Seruminsulin, SerumALT, SerumAST, SerumGST,liver MDA, SerumGSH and the SerumGST. Results: Serum leptin , insulin, AST and liver GST levels in both experimental groups(VPA group) were remarkably higher than the of the negative control group(P<0.01),but liver GSH levels in both experimental groups(VPA group) were remarkably lower. Conclusion: VPA can cause the potential dangerous in liver and cardiovascular system.
[Key words] Valproate;Animal experiment;Toxicology test
在目前的抗癲癇治療中,因VPA對多種類型的發(fā)作都有效,尤其對失神發(fā)作,原發(fā)性全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作效果較好,因此在臨床上仍然作為一線抗癲癇藥。但其對各種代謝尤其是脂質(zhì)代謝的影響及肝臟毒性等不良反應(yīng)也最令人關(guān)注[1]。本研究為VPA的長期使用對機(jī)體代謝功能及肝毒性影響提高試驗(yàn)依據(jù)。
1材料與方法
1.1動(dòng)物分組及給藥
選用SPF級3周齡雄性Wistar大鼠36只,平均體重48 g(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號:0080311號)。將大鼠隨機(jī)分為兩組(每組23只) ,空白對照組:經(jīng)口灌胃等量蒸餾水;VPA組:經(jīng)口灌胃VPA 300 mg/(kg·d),每周2次。
1.2樣本制備及檢測
連續(xù)用藥3個(gè)月后斷頭取血,分離血清,使用OlymPus AU 100生化儀測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST);利用放射免疫分析法檢測血清瘦素及胰島素水平,試劑盒由北京解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供。取肝左葉同一部位小塊肝臟,備肝勻漿,離心取上清液,用分別用硫代巴比妥法、三硫代二硝基苯甲酸法測定肝勻漿中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和用谷胱甘肽二硝基苯法測定血清、肝勻漿中谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性的測定 (所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所,按說明書操作)。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
使用SPSS 13.0軟件分析處理,用單因素方差分析數(shù)據(jù)以x±s表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
與空白對照組比較,VPA組AST、肝GST、瘦素、胰島素顯著升高(P<0.01),體重顯著增加(P<0.05),肝GSH含量顯著降低(P<0.01),而血清ASL、血清GST、肝MDA則均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。
3 討論
迄今為止,對于研究幼年期長期服用VPA對血清LEP、INS、ALT、AST、GST、MDA、GSH、GST等多因素綜合水平影響的研究不多。
3.1 VPA引起體重增加、瘦素水平的具體機(jī)制
本實(shí)驗(yàn)觀察到服用VPA的幼年大鼠,均顯著出現(xiàn)了體重增加,同時(shí)血清空腹瘦素、胰島素水平明顯高于對照組,這與以往的試驗(yàn)結(jié)論相一致。國外對丙戊酸鈉對瘦素的影響尚存在分歧,VPA引起體重增加、瘦素水平的具體機(jī)制尚不明確,目前初步認(rèn)為[2]:①VPA可與肉毒堿結(jié)合,形成VPA-肉毒堿復(fù)合體,從而降低血漿中游離的肉毒堿濃度,導(dǎo)致脂肪酸代謝和糖異生受損,葡萄糖消耗增加低血糖刺激下丘腦中部神經(jīng)元引起攝食增加。②VPA是脂肪酸的一個(gè)分支,可與長鏈脂肪酸相互競爭,使血糖水平降低,從而使下丘腦糖受體的刺激降低,影響中樞性飲食調(diào)節(jié),使進(jìn)食量增大。③VPA通過作用于下丘腦神經(jīng)元而降低交感神經(jīng)系統(tǒng)的活性,引起熱能產(chǎn)生減少。上述三種機(jī)制最終都會(huì)引起脂肪沉積量增加,瘦素水平上升。因此筆者認(rèn)為,血清瘦素水平的升高是肥胖的結(jié)果而不是引起肥胖的原因,此觀點(diǎn)與國外學(xué)者一致。與瘦素一樣,國外對VPA引起胰島素水平變化的具體機(jī)制并未完全明了,非肥胖病人服用VPA后,其胰島素水平亦高于對照組中的非肥胖病人,說明服用VPA后,肥胖病人的胰島素水平的增高不僅僅是體重增加引起的結(jié)果。因此,本研究推測VPA引起體重增加的發(fā)病機(jī)制可能與胰島素有關(guān),胰島素是引起體重增加的原因,而不是體重增加后的結(jié)果。
3.2 GST分布
GST是一項(xiàng)對肝損害特異性及敏感性均較強(qiáng)的酶,且肝組織含量豐富,GST和ALT的共同測定對慢性肝損害的診斷價(jià)值優(yōu)于ALT。本研究結(jié)果與霍曉筠等[3]的臨床報(bào)道相似,由于AST主要分布在心肌,其次在肝臟、骨骼肌、腎臟等組織中,推測藥物反應(yīng)可能涉及到心肌、骨骼肌、腎臟等組織。本研究用藥組血清ALT和GST均未見升高,提示VPA尚未對肝細(xì)胞膜造成嚴(yán)重的損害。
3.3 GSH與VPA的關(guān)系
同時(shí),本實(shí)驗(yàn)也觀察到,VPA的作用尚未出現(xiàn)MDA含量的改變,但這不能否認(rèn)過氧化反應(yīng)在藥物致肝損傷中的作用。Isojarvi等[4]研究VPA肝毒性機(jī)制時(shí)提出VPA先致肝細(xì)胞GSH耗竭到一定程度后才出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化,最后引起細(xì)胞毒作用。而GST是一類與肝臟解毒有關(guān)的酶[5],催化GSH與化學(xué)物質(zhì)的親電子基團(tuán)結(jié)合,最終形成硫醚氨酸排出體外。本實(shí)驗(yàn)中VPA對GST活性的誘導(dǎo)作用,推測可能通過催化GSH與VPA代謝產(chǎn)物4-烯-VPA結(jié)合起作用。
4 結(jié)論
長期服用抗癲癇藥VPA對幼年期瘦素水平影響大,對幼年期容易引起脂代謝紊亂,影響幼年期的生長發(fā)育;VPA對幼年期胰島素水平影響大,容易出現(xiàn)肥胖。胰島素水平的升高亦增加了糖尿病、心血管疾病的發(fā)病概率,同時(shí)可引起機(jī)體抗氧化能力降低,提示臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)對該兩個(gè)系統(tǒng)加強(qiáng)觀察,合理調(diào)整藥量及時(shí)間。
[參考文獻(xiàn)]
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(收稿日期:2009-03-09)