外燥實(shí)驗(yàn)動物模型的研究進(jìn)展

王靜平++魏寧頤++唐朝++陳楚珺++周梓鑫++楊梅

【摘要】對當(dāng)前外燥動物模型的復(fù)制及相關(guān)機(jī)制的研究進(jìn)行綜述。目前外燥動物模型主要包括溫燥動物模型和涼燥動物模型。其動物模型相關(guān)機(jī)制研究已從整體水平、器官水平、組織水平、細(xì)胞水平深入到分子水平，并引入現(xiàn)代免疫學(xué)方法。研究內(nèi)容緊扣中醫(yī)理論，選擇與燥證病因病機(jī)相關(guān)的檢測指標(biāo)進(jìn)行研究。對今后開展中醫(yī)藥防治與燥證相關(guān)的疾病提供參考。

【關(guān)鍵詞】燥證；涼燥；溫燥；動物實(shí)驗(yàn)；造模方法

【中圖分類號】R-332【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2017）01-0035-03

Abstract：

Keywords：

燥證（Dryness Syndrome），是一類以津液的減少，甚至枯涸為主要病理機(jī)制，以干燥性癥狀為主要表現(xiàn)的一組中醫(yī)證候。既可單獨(dú)成病，亦可出現(xiàn)在溫?zé)岵?、消渴、血證等多種疾病的不同階段，并與現(xiàn)代多種疾病密切相關(guān)[1-3]。燥證有內(nèi)燥及外燥之別，外燥證多由外感燥邪所引起，分為溫燥和涼燥兩種。由于環(huán)境的惡化和生活方式的變化，導(dǎo)致全球氣候變暖、水資源短缺逐年加劇。近年來外燥的發(fā)病率逐年增高，但目前外燥的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，為了更好地預(yù)防和診治外燥，研究并明確外燥的發(fā)生發(fā)展機(jī)制至關(guān)重要，而合理穩(wěn)定的外燥動物模型則是實(shí)驗(yàn)研究的重要保證。本文將從外燥動物模型的復(fù)制和相關(guān)機(jī)制研究兩個方面進(jìn)行綜訴，以期為今后燥證的實(shí)驗(yàn)究提供參考。

1外燥動物模型造模方法

1.1外燥動物模型造模思路中醫(yī)動物模型是根據(jù)中醫(yī)理論，利用特定的致病因素，在動物身上復(fù)制出與人類疾病癥狀和病理改變相同或相似的證候[4-5]。由于外燥證是以人體感受外界燥邪，津液損傷為主要病機(jī)，其發(fā)病與地域環(huán)境、季節(jié)氣候的關(guān)系十分密切。因此，外燥動物模型必須在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，根據(jù)中醫(yī)病因病機(jī)理論，從造成外燥證的病因入手，遵循證候演變規(guī)律復(fù)制，才能保持與臨床一致性。目前，外燥模型均以病因病機(jī)特點(diǎn)為基礎(chǔ)，并結(jié)合地域氣候因素進(jìn)行綜合考慮進(jìn)行造模。

1.2涼燥、溫燥動物模型造模主要以氣候因素為切入點(diǎn)進(jìn)行造模，即依據(jù)醫(yī)學(xué)氣象學(xué)相關(guān)知識，建立“溫度-相對濕度”空間量化指標(biāo)，模擬中醫(yī)外燥證中涼燥、溫燥致病氣候環(huán)境特點(diǎn)進(jìn)行模型復(fù)制。丁建中等[6-8]依據(jù)外燥的自然屬性，選取昆明種小鼠，利用人工智能氣候箱設(shè)常溫常濕組、常溫組、溫燥組和涼燥組，并采取常規(guī)飼養(yǎng)進(jìn)行造模。結(jié)果顯示，溫燥組小鼠氣管上皮鱗狀化生，皮膚表皮褶皺，足墊表皮增厚，汗腺減少。涼燥組小鼠氣管上皮鱗狀化生，肺部瘀血、水腫明顯，皮下結(jié)締組織增生。兩組均出現(xiàn)了與燥證相關(guān)的病理改變。

2外燥證宏觀表征的觀察

模型的生物體表特征即是癥，癥是識別具體病證的主要依據(jù)。實(shí)驗(yàn)動物的生物表征主要是觀察實(shí)驗(yàn)動物的一般狀態(tài)，如王明明等[9]利用人工智能氣候箱模擬早秋、中秋、晚秋氣候特點(diǎn)，建立外燥小鼠動物模型，通過觀察統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)動物的皮膚毛發(fā)、行為狀態(tài)、情緒反應(yīng)、飲水以及大便情況等生物表征對模型進(jìn)行評價(jià)。此法符合中醫(yī)“有諸內(nèi)者，必形諸外”的中醫(yī)理論，具有中醫(yī)的特色。

3外燥證相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

目前關(guān)于外燥相關(guān)機(jī)制的研究，主要是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，借鑒了現(xiàn)代生命科學(xué)研究方法，采用組織病理學(xué)、現(xiàn)代免疫學(xué)、分子生物學(xué)、血液流變學(xué)等理論與技術(shù)，分別從器官、組織、細(xì)胞、分子等層面，對外燥證的內(nèi)在機(jī)制進(jìn)行了深入研究。

3.1燥傷皮毛機(jī)制研究正常組織結(jié)構(gòu)是機(jī)體發(fā)揮生理功能的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，觀察與模型相關(guān)的病理改變是從器官組織層次判斷模型的一個重要的依據(jù)。丁建中等 [10-11] 根據(jù)“肺主皮毛”的中醫(yī)理論，利用人工智能氣候箱模擬溫燥和涼燥的氣候特征進(jìn)行造模。在此基礎(chǔ)上，觀察模型小鼠的氣管、肺組織及足墊皮膚組織，研究燥邪對模型小鼠組織結(jié)構(gòu)方面的影響。結(jié)果顯示，兩組均出現(xiàn)氣管上皮鱗狀化生，皮膚毛乳頭數(shù)減少，足墊真皮乳頭與汗腺結(jié)構(gòu)紊亂、結(jié)締組織增生等病理改變，為燥證多有皮膚“枯、涸、皴、揭”等病機(jī)的研究提供組織病理學(xué)基礎(chǔ)。

3.2燥傷正氣機(jī)制研究中醫(yī)認(rèn)為“邪之所湊，其氣必虛”，燥邪犯肺人體正氣必然會受到影響。近年來，部分學(xué)者根據(jù)人體“正氣”與“免疫”的相關(guān)性，通過觀察動物模型免疫器官組織、檢測免疫細(xì)胞及免疫分子來探討動物模型與免疫功能的相關(guān)性，從而揭示燥邪犯肺，肺氣失宣，衛(wèi)外功能失職的病機(jī)實(shí)質(zhì)。如丁建中等[12-13]利用人工智能氣候箱子，設(shè)涼燥組、溫燥組、常溫常濕組、常溫組，第7天和第14天檢測各組小鼠的血清中IgG-S、呼吸道中IgG-R，并對胸腺和脾臟重量。結(jié)果顯示，溫燥組和涼燥組中血清中IgG-S高于常溫常濕組，溫燥組第14天脾臟平均重量均高于其他三組；張六通等[14]、胡利群等[15]建立溫燥和涼燥模型，分別在第6天、12天、18天檢測各組小鼠氣道液中分泌型IgA （SIgA） 、IgG和腫瘤壞死因子（TNF-α）。結(jié)果顯示，溫燥組、涼燥組、常溫燥組小鼠第6天至18天IgA （SIgA）、IgG、TNF-α均為下降。常溫燥組第18天減少明顯（P<0.05），溫燥組第12、18天持續(xù)下降（P<0.01）。倪圣等[16]依據(jù)“溫度-相對濕度-風(fēng)”綜合條件刺激建立模型，設(shè)常溫常濕組，溫燥組，涼燥組，第6天和12天，用ELISA檢測各組小鼠氣道中NE、IL-10 、αI-AT含量的變化，結(jié)果顯示，溫燥組、涼燥組NE均升高（P<0.05），аI-AT、IL-10下降（P<0.05），在一定范圍內(nèi)揭示了小鼠氣道免疫功能低下。上述實(shí)驗(yàn)，均從微觀層面闡釋了燥邪損傷“正氣”的病機(jī)實(shí)質(zhì)。

3.3燥傷津液機(jī)制研究中醫(yī)認(rèn)為“燥性干澀，易傷津液”，燥邪對津夜的影響主要體現(xiàn)在津液的生成、輸布和代謝等方面。張六通等[17]、丁建中等[18-20]認(rèn)為水通道蛋白（AQP）1、4、5 與肺泡內(nèi)外水液轉(zhuǎn)運(yùn)及肺部病變分子機(jī)制有關(guān)，且利用人工氣候箱建立實(shí)驗(yàn)小鼠動物模型，通過觀察常溫常濕組、常溫組、溫燥組和涼燥組各組小鼠肺內(nèi)AQP1、4、5變化，探究燥邪傷肺、耗津的機(jī)制。與常溫常濕組比較，溫燥組、涼燥組第6天、12天、18天AQP1、5表達(dá)陽性率持續(xù)下降（P<0.01）。并提出AQP1、5可以作為研究外燥傷肺、耗津病機(jī)的特異性指標(biāo)之一。胡利群[21]、丁建中[22-23]在建立涼燥、溫燥、常溫燥小鼠模型的基礎(chǔ)上，采用咔唑比色法，分別對小鼠氣道和大腸的粘多糖進(jìn)行測定，探究燥邪傷津液的病機(jī)實(shí)質(zhì)。溫燥組呼吸道液黏多糖（RS）持續(xù)下降，涼燥組第12天最為減少，而常溫燥組第12天、第18天RS持續(xù)升高；溫燥組、涼燥組腸液黏多糖（CS）先升高、后持續(xù)降低；溫燥組RS與CS呈平行減少。為“燥勝則干”中醫(yī)理論，提供了量化檢測指標(biāo)。王明明等[24]依據(jù)muc5ac與氣道粘液的相關(guān)性，采用實(shí)時定量熒光PCR法和免疫組化法，分別檢測正常對照組、溫燥Ⅰ組、溫燥Ⅱ組、桑杏湯治療組小鼠氣道m(xù)uc5ac mRNA和蛋白的表達(dá)，研究溫燥對BALB/c小鼠氣道m(xù)uc5ac表達(dá)的影響，進(jìn)而探究溫燥影響小鼠氣道粘液分泌的規(guī)律。結(jié)果顯示，溫燥Ⅰ組小鼠氣道m(xù)uc5ac mRNA及其蛋白表達(dá)明顯高于正常對照組（P<0.01），溫燥Ⅱ組比溫燥Ⅰ組顯著增多（P<0.01），提示溫燥可導(dǎo)致氣道粘液分泌增多，為溫燥對小鼠氣道粘液分泌功能的影響提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3.4燥邪傷津血機(jī)制研究中醫(yī)認(rèn)為 “精血同源”，燥邪傷津，血液也會受到影響。實(shí)驗(yàn)研究也證明燥證動物模型的血粘度、血液流變學(xué)有明顯的改變。丁建中等[25-27]利用人工智能氣候箱，選取昆明種小鼠，依據(jù)“溫度-相對濕度-風(fēng)”綜合指標(biāo)，建立涼燥、溫燥小鼠模型并設(shè)常溫常濕組、常溫組。分別在第7天和第14天采用血液流變學(xué)檢測方法，探究外燥對小鼠紅細(xì)胞流變學(xué)的影響。[JP3]與常溫常濕組相比，溫燥組和涼燥組全血粘度增高（P<0.01）。為 “燥勝則干”病機(jī)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

4經(jīng)典方藥反證治療的研究

方藥治療是檢驗(yàn)中醫(yī)證候的可靠方法，以方測證則是證候模型驗(yàn)證的一個重要的環(huán)節(jié)。丁建中等[28-30]利用人工智能氣候箱制備小鼠溫燥、涼燥模型，在建立模型的第7天后給予桑杏湯、杏蘇散治療，并設(shè)空白組和對照組，在用藥后第5天檢測各組小鼠氣管纖毛運(yùn)動、呼吸道液以及腸液中的黏多糖、血清以及呼吸道液的抗體、糞便含水率。結(jié)果顯示治療組氣道中的黏多糖明顯高于對照組，纖毛運(yùn)動減慢，氣道和血液中抗體有所增加。用治療燥證經(jīng)典方藥反治驗(yàn)證模型，并進(jìn)一步探求外燥證的機(jī)理，也是目前實(shí)驗(yàn)研究的一個途徑。

5小結(jié)

綜上所述，目前外燥動物模型以中醫(yī)病因?qū)W說為指導(dǎo)，遵循證候演變規(guī)律從溫燥、涼燥兩個方面進(jìn)行復(fù)制。其動物模型相關(guān)機(jī)制研究已從整體水平、器官水平、組織水平、細(xì)胞水平深入到分子水平，并引入現(xiàn)代免疫學(xué)方法。研究內(nèi)容從中醫(yī)辨證思維出發(fā)，緊扣中醫(yī)理論，圍繞著“燥邪傷人，首先犯肺”、“燥勝則干”、“肺主衛(wèi)氣”、“肺輸布津夜”、“肺外合皮毛”等理論，選擇與燥證病因、病位及病機(jī)相關(guān)的檢測指標(biāo)進(jìn)行研究。對今后開展中醫(yī)藥防治與燥證相關(guān)的疾病具有重要意義。

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（編輯：梁志慶）