乙醇浸提法提取黑穗醋栗果實(shí)中黃酮類物質(zhì)的研究

邊嘯林 李 政 王廣正 徐雅琴

摘要以黑穗醋栗果實(shí)為試材,以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品,利用分光光度法研究乙醇提取法提取黃酮類物質(zhì)的最佳工藝條件。在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了L9(34)(4因素3水平)正交試驗(yàn)。結(jié)果表明,乙醇提取法提取黃酮的最佳工藝條件為:以95%乙醇為提取劑,提取溫度90℃,提取料液比1∶12,提取時(shí)間180min。黃酮的最大提取量可達(dá)0.723mg/g。

關(guān)鍵詞黑穗醋栗;黃酮;乙醇浸提;提取

中圖分類號(hào)S664.2;TS255.36文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739(2009)11-0024-02

黑穗醋栗俗稱黑加侖、黑豆果,屬虎耳草科茶藨子屬多年生小灌木。在我國(guó)主要分布在北方,黑龍江省資源尤其豐富。果實(shí)為紫黑色,圓形,多汁,味酸甜。其果實(shí)富含糖、有機(jī)酸、維生素、黃酮、礦物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)成分[1]。

黃酮類化合物在植物中分布范圍廣、種類多,多數(shù)具有顯著生理藥理活性[2]。近年來(lái),其在抗腫瘤、抗過(guò)敏、降血糖等方面的顯著作用受到廣泛關(guān)注。本試驗(yàn)以黑穗醋栗果實(shí)為試材,研究了乙醇提取法提取的最佳工藝條件,為黑穗醋栗果實(shí)的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料與儀器

黑穗醋栗采于東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝站,采樣后快速冷凍,裝保鮮盒中備用;蘆丁,中國(guó)藥品生物制品檢定所;其他試劑均為分析純。

T6新悅-可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);R-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物技術(shù)有限公司);電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。

1.2提取工藝流程

試材→打碎→乙醇提取→減壓過(guò)濾→旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)→乙酸乙酯萃取→旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)萃取液→黃酮粗提物→95%乙醇溶解定容→測(cè)定含量。

1.3最佳提取條件的確定

1.3.1單因素試驗(yàn)。將黑穗醋栗果實(shí)打碎為勻漿,用電子天平精確秤取5g左右,以95%乙醇為提取溶劑,分別考察不同乙醇濃度(35%、50%、65%、80%、95%)、不同提取溫度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃)、不同料液比(1∶4、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12)、不同提取時(shí)間(60min、100min、140min、180min、220min)對(duì)黃酮類物質(zhì)含量的影響。每項(xiàng)試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.2正交試驗(yàn)。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,以總黃酮含量為考察指標(biāo),采用4因素(乙醇濃度、提取溫度、料液比、提取時(shí)間)3個(gè)水平的正交試驗(yàn)表L9(34)安排試驗(yàn),并對(duì)結(jié)果進(jìn)行極差分析,確定黑穗醋栗果實(shí)中黃酮類物質(zhì)的最佳提取條件。

1.4黃酮含量的測(cè)定

采用NaNO2-Al(NO3)3比色法[3]測(cè)定黃酮含量。

蘆丁柱準(zhǔn)曲的線形回歸方程為:C=75.944 A-0.349 4,相關(guān)系數(shù)R2=0.999 7。

黃酮提取量(mg/g)=5CV/W

其中,W-精確稱取黑穗醋栗的質(zhì)量(g);V-提取出黃酮定容的體積(V)。

2結(jié)果與分析

2.1乙醇濃度對(duì)黃酮提取效果的影響

在提取料液比1∶10、提取溫度80℃、提取時(shí)間180min條件下,以不同乙醇濃度進(jìn)行提取,結(jié)果如圖1。

由圖1可知,黃酮提取量隨乙醇濃度的增加而增加,增至95%時(shí)達(dá)到最高,所以選用65%、80%、95%等3個(gè)濃度進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.2提取溫度對(duì)黃酮提取效果的影響

在提取料液比1∶10、提取時(shí)間180min、乙醇濃度95%條件下,以不同提取溫度進(jìn)行提取,結(jié)果如圖2。由圖2可知,黃酮提取量隨溫度升高而增大,增至80℃時(shí)趨于平緩,所以選用70℃、80℃、90℃等3個(gè)溫度進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.3提取時(shí)間對(duì)黃酮提取效果的影響

在提取料液比1∶10、提取溫度80℃、乙醇濃度95%條件下,以不同提取時(shí)間進(jìn)行提取,結(jié)果如圖3。

由圖3可知,黃酮提取量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增大,增至180min時(shí)趨于平緩,所以選用140min、180min、220min等3個(gè)時(shí)間進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.4提取料液比對(duì)黃酮提取效果的影響

在提取溫度80℃、提取時(shí)間180min、乙醇濃度95%條件下,以不同提取料液比進(jìn)行提取,結(jié)果如圖4。

由圖4可知,黃酮提取量隨料液比的增大而增大,增至1∶10時(shí)達(dá)到最大,然后略有下降,所以選用1∶8、1∶10、1∶12等3個(gè)條件進(jìn)行正交試驗(yàn)。

2.5正交試驗(yàn)結(jié)果

由表1極差分析可知,本試驗(yàn)討論的4個(gè)因素對(duì)提取量影響的顯著順序?yàn)?A>C>B>D,即提取液料比>提取溫度>乙醇濃度>提取時(shí)間。最佳條件組合為:A3B2C3D2,即提取料液比1∶12、乙醇濃度95%、提取溫度90℃、提取時(shí)間180min,提取量為0.723mg/g。

3結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明,采用乙醇提取法提取黑穗醋栗黃酮的最佳條件為:以95%乙醇為提取溶劑,提取溫度90℃,提取時(shí)間180min,提取料液比1∶12,此時(shí)的提取量可達(dá)到0.723mg/g。

4參考文獻(xiàn)

[1] 賈妉萍.黑龍江省特色小漿果開發(fā)及利用[J].中國(guó)林副特產(chǎn),2008,31(4):600-602.

[2] 徐雅琴,付紅,于澤源.黑穗醋栗(亮葉)葉片黃酮提取物抗氧化性研究[J].食品科技,2002(7):38-39.

[3] 徐雅琴,孫艷梅,付紅,等.穗醋栗葉片中黃酮類物質(zhì)的研究[J].天然產(chǎn)物的研究與開發(fā),2001(2):221-231.