關(guān)格片中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定

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(長春中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，吉林 長春 130117)

關(guān)格片是由蒼術(shù)、砂仁、冬蟲夏草、黃連、石韋等9味中藥組成的復(fù)方制劑。具有降濁祛濕，溫補(bǔ)脾腎的功效。用于治療慢性腎功能衰竭，屬于濕濁型者。癥見肢體困重，食少納呆，惡心嘔吐，倦怠無力，腰酸膝軟，脘腹脹滿，口中黏膩，腰部冷痛，大便不實(shí)，舌苔厚膩，脈象沉細(xì)[1]。本品處方中主藥黃連，其有效成分鹽酸小檗堿含量的高效液相測(cè)定方法明確，且選定條件下精密度高、重現(xiàn)性好，所以選擇以黃連中的有效成分鹽酸小檗堿為含量測(cè)定指標(biāo)是合理的。

1 儀器與試藥

日本島津-高效液相色譜儀，SPD-10Avp，浙大N 2000色譜數(shù)據(jù)工作站。鹽酸小檗堿化學(xué)對(duì)照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110805-200306，規(guī)格：供含量測(cè)定)。所用試劑均為色譜純和分析純。

2 蛇床子素含量測(cè)定

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品5 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備[2]取本品10片，除去包衣，研細(xì)，取約0.6 g，精密稱定，置125 mL磨口具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(100∶1)溶液50 mL，稱定重量，超聲(功率150 W，頻率40 kHz)處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇-鹽酸(100∶1)溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 取不含黃連的處方，按制備工藝制成缺黃連的陰性對(duì)照品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.4 色譜條件[3]色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(150 mm×4.6 mm)的色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氫鈉溶液(磷酸試液調(diào)節(jié)pH值至3.0)(27：73)為流動(dòng)相檢測(cè)波長：346 nm；流速：0.8 mL/min；柱溫：25℃；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液2，5，10，15，20 μL，分別注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量(μL)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，Y=1 843 459.405 X=45 289.676 2，r=0.999 6，鹽酸小檗堿線性范圍為0.199 8～1.998 mg。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液鹽酸小檗堿10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，依法測(cè)定，結(jié)果RSD分別為0.70%，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，分別在0，1，4，8，12 h測(cè)定，結(jié)果所得5個(gè)數(shù)據(jù)的RSD為2.37%，表明鹽酸小檗堿在供試品溶液中12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品共5份，按供試品溶液項(xiàng)下制備，依法獨(dú)立測(cè)定，結(jié)果RSD分別為1.17%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn) 取同一批樣品(鹽酸小檗堿6.664 28 mg/g)，共5份，分別精密加入對(duì)照品鹽酸小檗堿適量，按供試品溶液的制備方法制成檢測(cè)溶液，并依法測(cè)定，結(jié)果平均回收率為97.62%，RSD為0.84%，表明方法準(zhǔn)確性較好，方法可行。

2.10 樣品測(cè)定 取3批樣品，每批2份，測(cè)定樣品中鹽酸小檗堿含量，結(jié)果3批樣品中鹽酸小檗堿的含量(mg/g)分別為6.388 9，6.720 2，7.418 75。

3 討論

根據(jù)鹽酸小檗堿的紫外吸收?qǐng)D及空白實(shí)驗(yàn)，選擇測(cè)定波長為346 nm。含量測(cè)定在選擇流動(dòng)相的過程中，曾選擇乙腈-0.05 mol/mL(磷酸二氫鈉溶液(磷酸試液調(diào)節(jié)pH值至3.0)(30∶70)、乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氫鈉溶液(磷酸試液調(diào)節(jié)pH值至3.0)(28∶72)為流動(dòng)相，但分離度均不佳；在上述流動(dòng)相基礎(chǔ)上，以乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氫鈉溶液(磷酸試液調(diào)節(jié)pH值至3.0)(27：73)為流動(dòng)相，結(jié)果供試品分離效果較好，鹽酸小檗堿峰與其它峰達(dá)到了良好的分離度(R>1.5)。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:213-214.

[2]鄭虎占.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M].北京:學(xué)苑出版社,2003:3979-4043.

[3]宋立人.現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:1715-1723.