ＨＰＬＣ法測定消渴丸中葛根素的含量

魏玉德　唐海燕

[摘要] 目的 建立消渴丸中葛根素的含量測定方法。方法 采用HPLC法，色譜柱為Hypersil BDS C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇－水（25∶75），流速為1.0 ml/min，檢測波長為250 nm。結(jié)果 進(jìn)樣量在0.094 1～0.470 5 ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9997. n=5）,平均回收率為101.0%，RSD為0.59%（n=5）。結(jié)論 該方法操作簡單，精密度高，重現(xiàn)性好，可作為控制消渴丸質(zhì)量的方法。

[關(guān)鍵詞] 葛根素；含量測定；HPLC；消渴丸

Determination of pueranin in Xiaokewan by HPLC

WEI Yu-de, TANG Hai-yan.Institute for Drug Control of YongZhou city, Hunan Province,Yongzhou425006, China

【Abstract】Objective To determinate Pueranin in Xiaokewan by HPLC. Methods Hypersil BDS C18Column was used with methanol-water（25∶75）as mobile phase，The flow rate was 1.0 ml/min,Detection wavelength was set at 250nm. RESULTSGood Linearity of Pueranin was obtatined （ r = 0.999 7. n = 5 ） with in the rang of0.094 1-0.470 5 μg. The average recovery was 101.0%, repeatability was good, and RSD was 0.59% （ n = 5）. Conclusion The methodis simple, accurate and repeatabily, and can be used for the drug control.

【Key words】 Pueranin ; Determinate ; HPLC; Xiaokewan

消渴丸是由葛根、地黃、黃芪、天花粉、玉米須、五味子、山藥、格列本脲等七味中藥和一味西藥加工而成的中西藥結(jié)合制劑，具有滋腎養(yǎng)陰，益氣生津之功效。臨床上主要用于治療2型糖尿病。原標(biāo)準(zhǔn)中只有葛根素的薄層鑒別，沒有含量測定。葛根是方中君藥，葛根素為葛根的主要成分。為了有效控制制劑的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)[1-2]，采用高效液相色譜法測定消渴丸中葛根素的含量，方法簡便，精密度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1．儀器與試藥

高效液相色譜議：Waters高效液相色譜系統(tǒng)，1525泵，2996紫外檢測器（美國），Empower工作站；葛根素對照品（批號：110752-200410，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純），水為重蒸水，消渴丸（自購）。

2．方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備：精密稱取葛根素對照品適量，加25%甲醇制成50g/ml溶液，即得。

2.2供試品溶液的制備：取本品10丸，研細(xì)，精密稱取約0.2 g，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，濾液用微孔濾膜（0.45m）濾過，取濾液，即得。

2.3色譜條件：依利特Hypersil BDS C18色譜柱（4.5 mm×200 mm，5m）；流動(dòng)相：甲醇－水（25∶75）；檢測波長：250 mm，柱溫：室溫；體積流量：1.0 ml/min；理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算，不低于2000。

2.4空白試驗(yàn)：取除葛根以外的各原藥材，按處方量制備供試品，照2.2項(xiàng)下方法制備空白對照溶液，微孔濾膜（0.45 m）濾過，進(jìn)樣，結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)條件下，其他成分對葛根素的測定無干擾。見圖1。

2.5線性關(guān)系的考察：精密稱取葛根素對照品9.41 mg，置100 ml量瓶中，加25%甲醇溶液使溶解，并加至刻度，搖勻，即得（94.1 g/ml）。用25%甲醇依次稀釋得到9.41、18.85、28.23、37.64、47.05g/ml的溶液，按上述色譜條件各取10 l進(jìn)樣，測定峰面積。以峰面積y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量x為橫坐標(biāo)，得回歸方程：y=3283x+31 522， =0.999 7。結(jié)果葛根素在0.094 1~0.470 5 g與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6精密度試驗(yàn)：精密吸取葛根素對照品溶液10l，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，分別測定峰面積積分值，其RSD=1.11%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液10l，按上述色譜條件，每隔60 min進(jìn)樣一次，連續(xù)進(jìn)樣5次，在4 h內(nèi)對照品溶液中葛根素峰面積積分值，其RSD=2.37%（n=5），表明溶液在4 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號樣品（批號：HF0011）樣品，稱取5份，依法制備供試品溶液，分析，測得含量值，其RSD=1.04%。

2.9回收率試驗(yàn)：采用加樣回收法。精密稱取批號為HF011的樣品5份，每份約0.11 g（含葛根素1.54 mg），分別加入0.256 mg/ml葛根素對照品溶液6 ml，混勻，制備供試品溶液，按2.2項(xiàng)下方法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為101.0%，RSD=0.59%（n=5）。結(jié)果見表1。

2.10樣品含量測定：取不同批號的消渴丸，制備供試品溶液，微孔濾膜（0.45 m）濾過，進(jìn)樣測定，結(jié)果見表2。

3．討論

3.1選用25%甲醇作溶劑，加熱回流30 min，可將葛根素提取完全。用甲醇—水（25∶75）作流動(dòng)相，分離效果較好，且無干擾吸收峰。

3.2本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定消渴丸中葛根素的含量，提取方法簡單，分析快速，精密度高，重現(xiàn)性好，可較好的控制質(zhì)量。

3.3樣品測定結(jié)果表明，各批號間葛根素含量存在一定差異，為有效的控制產(chǎn)品質(zhì)量，必須嚴(yán)格工藝條件。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國藥典.2005年版.一部.233-234

[2] 戎欣玉，邵文亮．馬燕等．HPLC法測定參葛顆粒中葛根素的含量[J].中草藥,2004, 35(9)：1013-1015.