酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原弱陽性結(jié)果分析與報告

蘇立瑩

【摘 要】目的：對酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測定乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）弱陽性結(jié)果進(jìn)行分析與探討。方法：對ELISA法檢測的1025例HBsAg陽性標(biāo)本中出現(xiàn)的110例弱陽性標(biāo)本分別用膠體金法與化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行鑒別與定量分析。結(jié)果：110例弱陽性標(biāo)本中有50例為后帶效應(yīng)導(dǎo)致，膠體金法檢測強(qiáng)陽性，HBsAg化學(xué)發(fā)光法定量檢測均>250IU/mL；15例為真弱陽性，膠體金法檢測陰性，化學(xué)發(fā)光法定量檢測結(jié)果在0.05-5.00IU/mL之間；45 例為假陽性，膠體金法與化學(xué)發(fā)光法均為陰性，假陽性率為4.39%。結(jié)論：加強(qiáng)檢驗前、中、后質(zhì)量管理，避免假陽性結(jié)果的報告；對HBsAg弱陽性結(jié)果用膠體金法與化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行復(fù)查，并加強(qiáng)與臨床醫(yī)患的溝通。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附法；乙型肝炎病毒表面抗原；弱陽性

【中圖分類號】R 512162 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）04-2464-01

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法是臨床進(jìn)行乙型肝炎病毒（HBV）診斷的主要方法之一，其試驗靈敏度高，特異性好，操作簡便，在國內(nèi)廣泛應(yīng)用。但在工作中常常會遇到弱陽性標(biāo)本，為了防止假陽性結(jié)果的報告，本院采用膠體金法與化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行鑒別，可避免不必要的醫(yī)患糾紛。同時，通過對我院1025例HBsAg陽性標(biāo)本中出現(xiàn)的110 例弱陽性標(biāo)本進(jìn)行分析與探討，查找產(chǎn)生假陽性結(jié)果的影響因素，找到行之有效的解決辦法；對于真正處于窗口期感染的弱陽性結(jié)果及由后帶現(xiàn)象影響的弱陽性結(jié)果，及時與臨床醫(yī)患溝通，便于對乙型肝炎的診斷與治療。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇2013年6月至11月在白城中心醫(yī)院申請檢查HBsAg的住院及門診患者，用真空負(fù)壓管取被檢者清晨空腹靜脈血3mL，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，要求無脂血、溶血標(biāo)本。在1025例ELISA法檢測HBsAg陽性標(biāo)本中選擇110例弱陽性標(biāo)本，同時進(jìn)行膠體金法與化學(xué)發(fā)光法的檢測。

1.2 試劑 初檢用上?？迫A公司生產(chǎn)的HBsAg診斷試劑盒（ELISA法）；復(fù)檢用杭州艾博公司生產(chǎn)的HBsAg檢測試劑盒（膠體金法）；最后確診用美國雅培公司生產(chǎn)的HBsAg診斷試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）。

1.3 儀器 上海科華KHB ST-360酶標(biāo)儀，美國雅培i2000全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。

1.4 方法 在ELISA法測定的1025例HBsAg陽性標(biāo)本中，以吉林省臨床檢驗中心頒發(fā)的HBsAg弱陽性質(zhì)控品（0.2IU/mL）在我室測定的 +2s為標(biāo)準(zhǔn)，選定結(jié)果S/CO <5.0的110例弱陽性標(biāo)本，分別用膠體金法與化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行鑒別并定量檢測HBsAg。所有檢測步驟均按儀器及試劑說明書要求操作，標(biāo)本在用化學(xué)發(fā)光法檢測前均再次用離心機(jī)10000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后上機(jī)，避免體內(nèi)嗜異性抗體的干擾。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件。計量數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ）表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

由表1可見，在1025例ELISA法檢測的HBsAg陽性標(biāo)本中，有50例弱陽性標(biāo)本三種方法均為陽性，其中膠體金法顯示為強(qiáng)陽性，用美國雅培i2000全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測結(jié)果均>250IU/mL，將50例弱陽性標(biāo)本5倍稀釋后再次進(jìn)行ELISA法檢測，S/CO比值在23.25±3.56，顯示強(qiáng)陽性；有45例弱陽性標(biāo)本經(jīng)膠體金法與化學(xué)發(fā)光法最后鑒別為假陽性；有15例弱陽性標(biāo)本經(jīng)化學(xué)發(fā)光法最后鑒定為真弱陽性，結(jié)果為1.63±1.27IU/mL。ELISA法檢測假陽性組與真弱陽性組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），假陽性組與后帶效應(yīng)組、真弱陽性與后帶效應(yīng)組之間存在顯著性差異（P<0.05）。此外，假陽性結(jié)果在所有陽性標(biāo)本中占4.39%（45/1025），在弱陽性標(biāo)本中占40.91%（45/110）；真弱陽性標(biāo)本在所有陽性標(biāo)本中占1.46%（15/1025），在弱陽性標(biāo)本中占13.64%（15/110）；后帶效應(yīng)標(biāo)本在所有陽性標(biāo)本中占4.88%（50/1025），在弱陽性標(biāo)本中占45.45%（50/110）。

3 討論

ELISA法檢測HBsAg出現(xiàn)弱陽性結(jié)果實際有三種情況，即后帶效應(yīng)、真弱陽性、假陽性。雖然三種結(jié)果中后帶效應(yīng)組與其他兩組存在顯著性差異（△P<0.05），但假陽性組與真弱陽性組無顯著性差異（*P>0.05），因此要對弱陽性結(jié)果予以慎重對待。由于抗原抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系，只有抗原抗體濃度比例適當(dāng)時才出現(xiàn)可見反應(yīng)，當(dāng)抗原過剩時稱為后帶效應(yīng)，過剩的抗原不能與包被抗體充分結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，而是形成小網(wǎng)格復(fù)合物，影響顯色反應(yīng)，甚至可出現(xiàn)假陰性[1]。將上述50例后帶效應(yīng)導(dǎo)致的弱陽性標(biāo)本進(jìn)行5倍稀釋后再次進(jìn)行ELISA法檢驗，S/CO比值可達(dá)23.25±3.56，用化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果均>250IUmL。后帶效應(yīng)導(dǎo)致的弱陽性結(jié)果在所有弱陽性標(biāo)本中占45.45%，三種方法中，膠體金法能有效避免后帶效應(yīng)，直接報告強(qiáng)陽性，省時、準(zhǔn)確、方便。ELISA法受影響因素眾多，其中不僅包括標(biāo)本采集、處理不當(dāng)；試劑因素；儀器因素；操作因素等，還包括患者本身因某種疾病或其他原因存在嗜異性抗體等影響因素。此次調(diào)查是嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程執(zhí)行，從檢驗前質(zhì)量控制開始，對采集的標(biāo)本要求新鮮采集、及時分離血清，要求無溶血、脂血標(biāo)本。操作中注意加樣量的準(zhǔn)確；試劑的準(zhǔn)備；孵育溫度及時間的控制；洗滌反應(yīng)板的方式等；檢驗后質(zhì)量控制，我們也嚴(yán)格掌握顯色的溫度及時間，利用酶標(biāo)儀判讀結(jié)果，并認(rèn)真核對檢驗標(biāo)本及結(jié)果。盡管如此，仍有45假陽性標(biāo)本，總結(jié)45例假陽性結(jié)果產(chǎn)生的原因，發(fā)現(xiàn)分別是由洗滌不充分、反應(yīng)板底部污染、患者體內(nèi)存在嗜異性抗體等原因?qū)е隆Ｔ谟孟窗鍣C(jī)洗滌反應(yīng)板的過程中，如板孔中酶試劑殘留，會出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象，這與于洋[2]的報道相符合；酶標(biāo)儀是ELISA試驗所必須的儀器，它是對反應(yīng)孔進(jìn)行垂直比色，當(dāng)反應(yīng)板底部有污染時，容易出現(xiàn)吸光度值升高，導(dǎo)致假陽性的結(jié)果[3]；有些患者在患某些疾?。愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝硬化等）過程中，其體內(nèi)含有一些非特異性抗體成分，這些特殊成分在反應(yīng)過程中有一定的吸附作用，產(chǎn)生假的顯色反應(yīng)而出現(xiàn)假陽性。由于假陽性標(biāo)本與真弱陽性標(biāo)本，分別占弱陽性標(biāo)本的40.91%與13.64%，兩者的鑒別尤為重要，在通過膠體金法判定陰性后，需通過化學(xué)發(fā)光法對HBsAg進(jìn)行定量檢測做出最后報告。對于15例真弱陽性結(jié)果，雖然占所有陽性標(biāo)本的1.46%，但能提示臨床醫(yī)生及早診斷并治療。對于所有弱陽性結(jié)果均需要與臨床及時溝通，必要時在檢驗報告?zhèn)渥谥屑右越忉屨f明。

4 結(jié)論

在實際工作中，我們會遇到HBsAg弱陽性標(biāo)本，為避免假陽性報告的發(fā)出而導(dǎo)致不必要的醫(yī)患糾紛，我們應(yīng)謹(jǐn)慎對待。首先我們要加強(qiáng)檢驗前標(biāo)本的質(zhì)量管理，因溶血標(biāo)本影響檢驗結(jié)果，所以溶血標(biāo)本要聯(lián)系相應(yīng)科室重新采集[4]，對于新生兒因血管脆弱導(dǎo)致的溶血標(biāo)本，可聯(lián)系臨床醫(yī)生進(jìn)行必要的溝通與解釋說明，并在檢驗報告?zhèn)渥⒅凶⒚?。其次，加?qiáng)檢驗中的質(zhì)量管理，嚴(yán)格按照操作規(guī)程完成每一步檢測，尤其注重洗滌效果與酶標(biāo)儀判讀的監(jiān)測。最后，對于弱陽性標(biāo)本要及時用膠體金法或化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行復(fù)查，并加強(qiáng)臨床溝通，慎重報告檢驗結(jié)果。后帶效應(yīng)導(dǎo)致的弱陽性結(jié)果，在檢驗報告的備注中，應(yīng)注明：抗原過剩導(dǎo)致弱陽性。真弱陽性結(jié)果，在檢驗報告的備注中，應(yīng)注明：結(jié)果已經(jīng)發(fā)光法復(fù)查，建議定期復(fù)查。

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