核酸酶
- 粘質沙雷氏菌全能核酸酶的研究進展
6000）全能核酸酶又稱非特異性核酸酶 （Nonspecific nuclease，NU），可降解幾乎所有形式的DNA 和RNA （包括單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然以及變性的核酸），生成3～5 個堿基長度的5’-單磷酸寡核苷酸。全能核酸酶來源廣泛，在動物、植物、細菌、真菌和病毒均有發(fā)現(xiàn)，到目前為止，已鑒定出30 多種不同來源的全能核酸酶，其中來源于粘質沙雷氏菌（Serratia marcescens）的全能核酸酶活力最強（下文無特殊說明，全能核酸酶均指來源
北方牧業(yè) 2023年13期2023-07-28
- 易錯PCR定向進化技術提高蒙古黃芪病程相關蛋白AmPR-10核酸酶活性的研究
10類蛋白具有核酸酶活性[1]，被認為與降解RNA類病毒有關[2]。蒙古黃芪病程相關蛋白-10(Astragalusmembranaceuspathogenesis-related protein-10，AmPR-10)由158個氨基酸殘基組成，分子大小約為16.8 kDa。目前已有研究證明天然提取的和重組的AmPR-10都具有核酸酶活性，但是活力均偏低[3-4]，不利于更深入的研究及大范圍的應用。酶分子的定向進化是由美國科學家Arnold F H于199
化學與生物工程 2022年2期2022-02-28
- 重組Pol D DNA聚合酶的純化及其功能初步研究*
3′→5′外切核酸酶活性；同時發(fā)現(xiàn)，相比于雙鏈DNA，DP1更容易降解單鏈DNA。研究發(fā)現(xiàn)大部分古菌中存在B家族(Pol B)與Pol D兩種DNA聚合酶，若將細胞內(nèi)的Pol B DNA聚合酶基因敲除，古菌依舊可以存活；若將細胞內(nèi)的Pol D DNA聚合酶基因敲除，則古菌無法存活[9]。由此可見Pol D DNA聚合酶在古菌DNA復制過程中的重要性。相比于Pol A、Pol B等家族的DNA聚合酶，國內(nèi)外對Pol D DNA聚合酶的研究仍然較少，多種古菌中
廣西科學 2022年6期2022-02-09
- 腸炎沙門菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性測定
明質酸酶和胞外核酸酶等，這些酶能使細菌逃避宿主的免疫系統(tǒng)[5]。這些酶類可以固定在細胞外膜上，也可以釋放到細胞外空間[6]。其中，胞外核酸酶是一種由人類、動物、細菌、真菌、寄生蟲等多種生物分泌的酶類，能夠降解環(huán)境中DNA或RNA的酶類，對于細菌的毒力、生物被膜的形成、黏附、侵襲以及利用胞外DNA獲取營養(yǎng)起著重要作用[7-9]。另外有研究發(fā)現(xiàn)，胞外核酸酶還能防御中性粒細胞胞外誘捕網(wǎng)(NETs)，降解胞外誘捕網(wǎng)中的DNA[10]。雖然近年來在研究腸炎沙門菌致病
中國獸醫(yī)雜志 2021年8期2022-01-17
- 一種快速靈敏非特異性核酸酶酶活測定方法
610052)核酸酶是以核酸為底物，催化磷酸二酯鍵水解的一類酶。核酸酶按作用底物的不同分為脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶和非特異性核酸酶；按作用的位點不同，又可將核酸酶分為核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶。其中非特異性核酸內(nèi)切酶是一類高活性水解酶，其最大的特點是能非特異地降解幾乎所有類型的核酸，包括單鏈、雙鏈、線狀及環(huán)狀的 DNA 和 RNA，且對核酸的序列沒有嚴格的要求[1]。目前關于非特異性核酸酶的報道已經(jīng)很多，例如：海洋嗜熱細菌噬菌體(GBSV1-NSN)非特異性
生物學雜志 2021年6期2021-12-20
- 同源蛋白序列比對探討AmPR-10核酸酶活性機理
PR-10具有核酸酶活性[1]，且該活性很大程度是與植物防御病原體感染降解RNA類病毒有關[2]。而無論是天然黃芪中提取的AmPR-10還是研究中得到的外源重組蛋白，核酸酶活性都比較低[3]。因此進一步提高AmPR-10核酸酶活性，探究相關機理，對深入了解黃芪生長發(fā)育抗病機制具有重要意義。目前，已知PR-10類蛋白的核酸酶活性可能與一段保守的P-loop環(huán)(GxGGxGxxK)相關[4]，然而也有很多具有該結構的PR-10類蛋白被證明并沒有核酸酶活性，這一
生物學雜志 2021年5期2021-10-25
- 無血清懸浮MDCK細胞培養(yǎng)流感病毒純化工藝的初步建立
DNA通常選擇核酸酶消化、離子交換層析等方法來進行有效去除［8］。新型復合填料Capto Core700具有未官能化的惰性外殼和位于核心的辛胺配基，使其具有分子排阻和離子吸附的雙重功能［9］，非常適合宿主細胞蛋白與核酸酶的去除［10］。本研究通過優(yōu)化核酸酶處理條件、復合介質Capto Core700與強陰離子介質Capto Q的純化條件，建立適于無血清懸浮MDCK細胞培養(yǎng)流感病毒的下游純化工藝，為后續(xù)MDCK細胞流感疫苗的生產(chǎn)奠定基礎。1 材料與方法1.1
中國生物制品學雜志 2021年9期2021-09-18
- 醫(yī)療器械清洗中的新酶應用
加以介紹。1 核酸酶核酸酶是一種旨在提升內(nèi)窺鏡清潔效能的新型酶，它賦予內(nèi)窺鏡清洗劑高度實用化和差異化的清潔力。使用過的內(nèi)窺鏡會沾染生物殘渣，其中藏納的污垢物質包含蛋白質、脂肪、碳水化合物和DNA。核酸酶屬于磷酸二酯酶，它直接作用于游離的黏性DNA并可使其降解，而此前還從未有過專門針對這一污物的酶。這是一種開創(chuàng)性的生物酶解決方案，它可直接針對含DNA分子的黏性污物進行有效去除。比起市面上現(xiàn)有的清洗劑，含有核酸酶的清洗劑配方可以更快和更有效地清潔被污染的內(nèi)窺鏡
中國洗滌用品工業(yè) 2021年7期2021-08-07
- 桔青霉產(chǎn)核酸酶P1酶分離純化及其酶學性質
443003）核酸酶P1，又名5’-磷酸二酯酶，它是一種含鋅金屬酶。桔青霉（Penicillium citrinum）來源的核酸酶P1，分子量約為44 kDa，由331個氨基酸多肽單鏈構成，含有2個二硫鍵，其活性中心存在一個三鋅結構。核酸酶P1的作用為水解RNA和催化水解熱變性DNA中的磷酸二酯鍵得到5’-核苷酸。5’-核苷酸具有很好的營養(yǎng)保健作用，其中5’-GMP和5’-AMP是天然的風味增強劑，能夠顯著提高產(chǎn)品的風味特征，還可以作營養(yǎng)補充劑、藥物前體物
食品工業(yè)科技 2021年7期2021-06-17
- 貂源肺炎克雷伯菌的分離鑒定及胞外分泌蛋白的核酸酶活性分析
種酶類物質，如核酸酶、膠原酶、蛋白酶、幾丁質酶和透明質酸酶等[7]。微生物胞外蛋白核酸酶在細菌和宿主之間的相互作用過程中發(fā)揮重要作用[8-9]。病原體感染宿主細胞的過程中，DNA和RNA可被核酸酶水解消化成寡核苷酸，以此作為微生物生存的營養(yǎng)物質。同時，胞外核酸酶可降解宿主細胞表面的黏性分泌物，使得細菌更容易黏附到細胞表面，有助于細菌感染宿主[10]。因此，致病性病原體的胞外核酸酶是一種重要的毒力因子[11-12]。探究細菌胞外核酸酶有助于揭示微生物病原體的
河南農(nóng)業(yè)科學 2021年3期2021-04-08
- 豬霍亂沙門菌胞外產(chǎn)物的核酸酶活性及其對巨噬細胞胞外誘捕網(wǎng)形成的影響
等癥狀[6]。核酸酶廣泛存在于各種微生物胞外產(chǎn)物中，在微生物感染和宿主免疫中發(fā)揮著重要作用[7]。胞外核酸酶可以分解外源DNA作為微生物生存的營養(yǎng)物質并且保護自身結構不被破壞[8]。胞外核酸酶可以作為毒力因子在細菌侵入宿主機體時發(fā)揮作用[9]。大量的外源DNA能使宿主細胞表面的黏性分泌物增多，而胞外核酸酶可局部降解這些分泌物，從而導致細菌更容易附著在隱藏的細胞表面，有助于細菌成功感染宿主[10]。探究細菌胞外產(chǎn)物有助于揭示病原體的致病機制，但目前未見關于豬
畜牧獸醫(yī)學報 2021年3期2021-03-30
- 采用核酸酶酶解聯(lián)合離子交換樹脂吸附開發(fā)低嘌呤腐竹
文將樹脂吸附和核酸酶酶解核酸2種方法相結合，通過正交實驗確定去除嘌呤類物質的最佳技術條件，開發(fā)出適宜高尿酸血癥等特殊人群的低嘌呤腐竹產(chǎn)品，擴大腐竹消費人群，同時可為其他豆制品的嘌呤去除提供理論參考。1 材料與方法1.1 材料與儀器材料：大豆，北京二商(江西大觀樓)食品有限公司提供；離子交換樹脂NUF01、NUF110、NUF10和NUF20，為向樹脂生產(chǎn)企業(yè)訂制實驗室改良產(chǎn)品；腺嘌呤、鳥嘌呤、黃嘌呤、次黃嘌呤，色譜純，美國Sigma公司；四丁基氫氧化銨(含
食品與發(fā)酵工業(yè) 2021年1期2021-01-20
- 歐洲食品安全局對基因組編輯植物給出安全結論
上，分別是定點核酸酶-1（SDN-1），定點核酸酶-2（SDN-2）和寡核苷酸定向誘變（ODM）。這三項技術不同于EFSA在2012年評估的定點核酸酶3（SDN-3）技術，因為它們修飾基因組的特定區(qū)域而不引入新的DNA。專家們得出的結論是：現(xiàn)有的《轉基因植物風險評估準則》適用于對這三種新技術的安全評估。此外，EFSA的評估意見還將為正在進行的關于新基因組技術的研究提供輔助信息。來源：歐洲食品安全局
國際種業(yè)前沿動態(tài) 2020年18期2020-12-23
- 含季銨鹽的芳酰腙配體的銅 (Ⅱ)配合物的合成和表征：體外DNA鍵合和核酸酶活性
Eda ?engül Elif Cansu G?k?e Topkaya Tolga G?ktürk Ramazan Gup(Department of Chemistry,Faculty of Science,Mugla S?tk? Ko?man University,48000,Kotekli-Mugla,Turkey)0 IntroductionDNA is the storage and transport of genetic informatio
無機化學學報 2020年7期2020-07-20
- 金黃色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性研究
酶、幾丁質酶和核酸酶等多種酶類[5]。其中核酸酶在各種微生物中廣泛存在，主要參與機體的營養(yǎng)代謝、遺傳物質的復制、重組和修復機制以及微生物感染、免疫等相關過程[6]。在病原菌感染宿主細胞的過程中，病原菌通過分泌各種核酸酶水解磷酸二酯鍵將DNA和RNA 消化成寡核苷酸，擴大自身可用的核苷酸庫來提供生長優(yōu)勢。已有研究表明致病性病原體可分泌核酸酶，是細菌的重要毒力因子[7]。探究細菌胞外分泌蛋白的特性有助于揭示病原體與宿主互作的分子機制，但目前關于金黃色葡萄球菌胞
中國預防獸醫(yī)學報 2020年2期2020-06-01
- 多種Cas12a蛋白變體能識別不同的PAM序列（2020.4.27 Plant Biotechnology Journal）
同特性的Cas核酸酶的不斷發(fā)現(xiàn)，具體體現(xiàn)在不同的靶向性（DNA或RNA）、不同的PAM識別譜、不同的最佳溫度和能夠降低脫靶傾向等特點的Cas核酸酶的發(fā)現(xiàn)。因此，大量的工作集中在擴大已知的CRISPR-Cas亞型的數(shù)量，以識別具有新特性的核酸酶。然而，新出現(xiàn)的證據(jù)表明，在每個亞型中，也存在著令人難以置信的多樣性。我們卻對它們知之甚少。Cas12a（也稱為Cpf1）核酸酶是V-A亞型CRISPR/Cas系統(tǒng)的典型代表，與其他已知的Cas核酸酶相比，Cas12a
三農(nóng)資訊半月報 2020年8期2020-05-13
- 擬南芥核酸酶基因AtCaN2克隆及功能分析
150040)核酸酶存在于大多數(shù)生命體內(nèi)，是一種特異性作用于磷酸二酯鍵的酶，它能夠水解核酸鏈，生成低聚核苷酸或者是單核苷酸[1]，它在遺傳物質的重組、堿基錯配識別和切割異源DNA等多個途徑中起著重要的作用[2-6]，同時有的核酸酶活性還依賴于鈣離子、鎂離子、錳離子等各種各樣的金屬離子[7]。核酸酶在細菌和微生物里面研究的比較早，一些研究發(fā)現(xiàn)，核酸酶可以用于DNA探針進行簡單快速的細菌檢測，探針熒光信號與革蘭氏陰性大腸桿菌和革蘭氏陽性金黃色葡萄球菌的數(shù)量相關
華北農(nóng)學報 2020年1期2020-04-16
- 基因組編輯技術及其在癌癥相關基因的功能性篩選中的應用
大的限制。人工核酸酶的出現(xiàn)極大地提高了基因組編輯的效率，人工核酸酶經(jīng)歷了兩代技術分別是鋅指核酸酶和轉錄激活效應物樣核酸酶，其靶向DNA的特異性是由蛋白質與DNA堿基的特異性結合實現(xiàn)的。但是在應用人工核酸酶時，需要根據(jù)DNA靶位點的序列構建可以編碼產(chǎn)生能與靶位點特異性結合的鋅指蛋白或者轉錄激活效應物的DNA結構，由于這兩個蛋白氨基酸數(shù)量多且重復性高，給其編碼序列的構建帶來了很大的難度。CRISPR/Cas9技術的出現(xiàn)，徹底改變了研究者實現(xiàn)基因組編輯的方式，憑
科學咨詢 2020年10期2020-01-07
- 新RNA編輯技術CRISPR-Cas13
指引下將Cas核酸酶與靶序列相結合并將其進行剪切。當病毒入侵時，細菌細胞能夠將外來遺傳物質的片段捕捉并整合到細胞自身基因組中的CRISPR序列中。當病毒再次入侵時，CRISPR序列轉錄生成的CRISPR RNA(crRNA)能夠與Cas核酸酶相結合并將其引導到靶序列上發(fā)揮酶切活性，從而起到監(jiān)控病毒入侵的作用。當這種外源核酸片段再度出現(xiàn)時，Cas核酸酶能夠切斷這些遺傳片段，從而為細菌細胞提供免疫保護作用。CRISPR-Cas13系統(tǒng)是以Cas13酶作為Cas
生物技術進展 2019年6期2019-12-11
- 苦參雙功能核酸酶1的體外表達及結構性質分析
230038)核酸酶分為核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶兩大類，限制性核酸內(nèi)切酶能特異性識別切割雙鏈DNA上的特異核苷酸序列，又分為I、II和III 3種類型；I型和III型核酸內(nèi)切酶不僅能特異性切割核酸，而且能對特殊堿基進行甲基化修飾，其中I型核酸內(nèi)切酶切割位點距離識別位點可達數(shù)千個堿基之遠；而III型核酸內(nèi)切酶切割位點距離識別位點只有25個堿基對左右。II型核酸內(nèi)切酶只具有識別切割的功能，不能對堿基進行修飾，所識別的多為短的回文序列，所切割的堿基序列即為所識別的
生物學雜志 2019年2期2019-04-17
- 基因編輯技術及其在基因治療中的應用
。近年來，鋅指核酸酶(zinc finger nuclease, ZFN)、類轉錄激活因子效應核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)、規(guī)律成簇的間隔短回文重復(regular clustering of short palindrome repeats, CRISPR)和單堿基編輯(base editing, BE)技術的相繼出現(xiàn)，不僅為基因功能研究提供了有力的工具，還為生命醫(yī)學
遺傳 2019年1期2019-01-30
- S1核酸酶介導的功能核酸生物傳感器研究進展
，如雙鏈特異性核酸酶（Duplex-specific nuclease，DSN酶），根據(jù)其對單雙鏈核酸不同的切割特點，搭載不同的信號輸出及擴增方式，已經(jīng)介導了一系列核酸傳感器包括光學傳感器、電化學傳感器和光磁傳感器等，實現(xiàn)了microRNA、mRNA、重金屬離子等一系列生物標志物及食品安全風險因子的檢測。脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1（Apurinic/apyrimidinic endonuclease 1，APE1），具有能夠在堿基缺失位點（AP site）
生物技術通報 2019年1期2019-01-23
- 基因編輯技術在水產(chǎn)生物中的研究進展
[24]和人工核酸酶技術（鋅指核酸復合酶（ZFNs）、轉錄激活子樣效應因子核酸酶（TALEN）、成簇規(guī)律性間隔的短回文序列重復 (CRISPR)技術）?；蚓庉嫾夹g的出現(xiàn)為快速、高效驗證基因功能提供的最有效的技術手段?；蚓庉嬍且环N對基因組及其轉錄產(chǎn)物進行定點修飾、定向敲除或敲入外源的DNA序列，使之產(chǎn)生可遺傳的改變的技術。與射線誘導和化學誘變相比，具有高效、可控和定向操作的特點?；蚓庉嫾夹g被麻省理工科技評論評為2014年十大突破性科學技術,其中CRIS
興義民族師范學院學報 2018年3期2018-07-19
- 綠豆核酸酶的提取及活力測定
目的]優(yōu)化綠豆核酸酶的提取條件并測定其活力。[方法]利用單因素和正交試驗，考察提取時間、料液比、pH、芽長幾個因素對從綠豆芽中提取核酸酶的影響，優(yōu)選出各影響因素的最佳水平，并進行活力測定。[結果]提取時間20 h，料液比1∶12（g∶mL），pH 3.0，芽長是綠豆長的4倍時，綠豆核酸酶酶活最高為478.86 U/ mL 。影響綠豆核酸酶提取的因素主次順序依次為提取時間、pH、料液比、芽長。采用飽和度為80%的硫酸銨鹽析沉淀后，酶活達 1 569.6 U/
安徽農(nóng)業(yè)科學 2018年2期2018-05-14
- 金黃色葡萄球菌核酸酶A在溫控雙表達載體中的表達及其活性分析
金黃色葡萄球菌核酸酶A被引入菌蛻的制備之中[6]。SNA為金黃色葡萄球菌核酸酶的結構基因，其產(chǎn)物具有核酸酶活性，可在鈣、鎂離子存在時降解單鏈或雙鏈DNA或RNA[7-8]。在實際應用中，出于經(jīng)濟性和操作便利性考慮，多將裂解基因E和SNA克隆至同一溫控表達載體，各自置于一個pR啟動子或分別置于pR和pL啟動子控制之下，通過升溫誘導兩者的聯(lián)合表達[9-11]。兩者的聯(lián)合表達可使殘存活菌數(shù)在單純基因E介導滅活的基礎上進一步下降2個數(shù)量級，而值得注意的是，在單表達
生物學雜志 2018年2期2018-04-17
- 人、豬和雞源SAMHD1蛋白的酶活性研究
P水解酶活性或核酸酶活性抑制病毒的復制，具有廣譜抗病毒功能．利用生物信息學分析該蛋白家族序列保守性，并借助HPLC層析色譜分析與酶活性測定和酶標儀方法，對人源、豬源和雞源三物種SAMHD1蛋白的酶活性進行了比較．比對發(fā)現(xiàn)SAMHD1蛋白在活性空腔、變構位點及磷酸化位點等處序列上具有高度的保守性；而且發(fā)現(xiàn)豬源和雞源SAMHD1蛋白同樣具有dNTP水解酶和核酸酶活性；3種蛋白中，人源SAMHD1蛋白dNTP水解酶活性最高，豬源蛋白核酸酶活性最低．這一結果為研究
天津大學學報(自然科學與工程技術版) 2018年1期2018-01-20
- 重組旋毛蟲plancitoxin-1-like活性位點突變體蛋白的核酸酶活性
點突變體蛋白的核酸酶活性廖成水1，王曉利2，田文靜1，張夢珂1，張春杰1，李銀聚1，吳庭才1，程相朝1,31 河南科技大學 動物科技學院 洛陽市活載體生物材料與動物疫病防控重點實驗室，河南 洛陽 471023 2 河南科技大學 醫(yī)學院，河南 洛陽 471023 3 洛陽職業(yè)技術學院，河南 洛陽 471099廖成水, 王曉利, 田文靜, 等. 重組旋毛蟲plancitoxin-1-like活性位點突變體蛋白的核酸酶活性. 生物工程學報, 2017, 33(8
生物工程學報 2017年8期2017-09-03
- 新型基因編輯技術在生物制藥領域的應用與發(fā)展
現(xiàn)，其中，鋅指核酸酶、轉錄激活子樣效應因子核酸酶以及CRISPR/Cas RNA引導核酸酶等基因組編輯技術在生物制藥領域得到廣泛應用。此類技術編輯效率高，在建立細胞模型新藥開發(fā)，新型動物模型開發(fā)建立，細胞工程改造以及蛋白產(chǎn)物糖基化水平優(yōu)化等方面應用廣泛。本文主要介紹了三種新的基因編輯技術以及其在生物制藥方面的應用發(fā)展?；蚓庉嫞簧镏扑?；鋅指核酸酶；轉錄激活子樣效應因子核酸酶；CRISPR/Cas RNA引導核酸酶隨著科學技術的不斷發(fā)展進步，新型的基因編輯
生物化工 2017年5期2017-04-09
- 基因編輯技術簡介
目前主要有鋅指核酸酶、轉錄激活因子樣效應物核酸酶和RNA引導的CRISPR/Cas核酸酶技術三種新型的基因編輯技術。綜述了三種技術的結構原理和作用機理，并對基因編輯技術進行了展望。關鍵詞 基因編輯 鋅指核酸酶 轉錄激活因子樣效應物核酸酶 CRISPR/Cas9核酸酶中圖分類號 Q-49 文獻標志碼 E基因編輯是指對基因組進行定點修飾的一項新技術。利用該技術，可以精確地定位到基因組的某一位點上，在這位點上剪斷靶標DNA片段并插入新的基因片段。此過程既模擬了基
中學生物學 2017年2期2017-03-20
- 用megaTAL 核酸酶對原代人T 細胞CCR5 基因座進行有效修飾可建立HIV-1 抵抗力
egaTAL 核酸酶對原代人T 細胞CCR5 基因座進行有效修飾可建立HIV-1 抵抗力已有研究表明，HIV-1 協(xié)同受體( co-receptor) CCR5 基因中自然發(fā)生的32 個堿基對缺失( 32-base pair deletion)可保護人CD4+T細胞，對抗HIV感染。最近，用工程化核酸酶干擾該基因和模擬此突變的基因工程方法展示了HIV 治療獲得成功的跡象。Romano Ibarra 等研制了一個靶向CCR5 基因第3 細胞外莖環(huán)( extr
中國病理生理雜志 2017年2期2017-01-17
- 金黃色葡萄球菌核酸酶A與不同外源DNA片段融合表達的作用比較
金黃色葡萄球菌核酸酶A與不同外源DNA片段融合表達的作用比較付立霞1，冀德君1，盧徐斌1，韓先干2，魏文志11 揚州大學動物科學與技術學院 江蘇省人畜共患病學重點實驗室，江蘇 揚州 2250092 中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241付立霞, 冀德君, 盧徐斌, 等. 金黃色葡萄球菌核酸酶A與不同外源DNA片段融合表達的作用比較. 生物工程學報, 2016, 32(12): 1654-1663.Fu LX, Ji DJ, Lu XB, et a
生物工程學報 2016年12期2016-12-28
- 氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶的合成、結構及活性研究
酮Cu(II)核酸酶的合成、結構及活性研究邵佳1，徐靖源2（1.天津市第一中心醫(yī)院藥學部，天津300192；2.天津醫(yī)科大學藥學院，天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津300070）目的：探究氨基噻唑酮Cu（II）核酸酶的合成、晶體結構及其活性，預期得到一種高效的體外化學核酸酶試劑。方法：利用單晶衍射、瓊脂糖凝膠電泳分別確定氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶試劑的空間結構及其活性。結果：氨基噻唑酮Cu(II)核酸酶試劑為單斜晶系，空間群為P2(1)/n，由單個
天津醫(yī)科大學學報 2016年6期2016-12-15
- 發(fā)芽及提取條件對大麥麥芽根中核酸酶活性的影響
對大麥麥芽根中核酸酶活性的影響劉馨予，楊洋，朱思齊，秦陽，李新，張洪微，高玉榮，崔素萍（黑龍江八一農(nóng)墾大學食品學院，大慶163319）為了從大麥芽根中制備高活性的核酸酶，以麥芽根及成品麥芽根中核酸酶活性為指標，確定了內(nèi)蒙墾大麥和澳洲大麥的最佳發(fā)芽條件。在此基礎上，研究了麥芽根中核酸酶的提取條件對核酸酶活性的影響。結果表明：最佳發(fā)芽條件是25℃，發(fā)芽64 h時，內(nèi)蒙墾和澳洲麥芽根中核酸梅的活性最高分別為316.7 U·mL-1，364.5 U·mL-1。麥芽
黑龍江八一農(nóng)墾大學學報 2016年2期2016-11-12
- 2，6-二甲基-3，5-吡啶二甲酰腙衍生物的合成及與DNA的作用
啶;酰腙;人工核酸酶;DNA近十幾年來，人工核酸酶的研究取得了很大進展，這些成果將有助于細胞學、分子生物學的發(fā)展，并有可能應用于基因治療中。因為天然核酸酶的活性中心有一個或多個金屬離子參與反應，所以以金屬配合物作為人工核酸酶的研究受到了廣泛的關注，其中就包括許多酰腙金屬配合物[1-2]。但是金屬及金屬配合物類核酸酶涉及到的多數(shù)為有氧化或還原活性的金屬離子，很可能發(fā)生一些比較復雜的化學反應，比如金屬離子從配合物中解離出來，或發(fā)生一些難以控制的氧化還原反應，這
山西大同大學學報(自然科學版) 2016年1期2016-11-02
- 三種檢測內(nèi)源性基因修飾方法比較
確定了3種人工核酸酶生物學活性檢測方法。利用Surveyor nuclease、T7E1（T7 Endonuclease 1）和HRM（High resolution melt），均以變性退火突變型和野生型DNA序列形成扭曲的雙螺旋DNA（distorted duplex DNA）為基礎的3種人工核酸酶生物學活性檢測方法，確定目標位點是否發(fā)生突變。實驗成功檢測出作用于綿羊MNST基因第一外顯子的CRISPR/Cas9和第三外顯子的TALEN目標位點發(fā)生突變
生物技術通報 2016年2期2016-10-13
- 作物改良領域人工核酸酶技術全球專利布局分析
物改良領域人工核酸酶技術全球專利布局分析何湘瓊1，趙永江1，譚永華2，田 野1，田文文1，朱 寧1，潘衛(wèi)東2*(1.國家知識產(chǎn)權局專利局專利審查協(xié)作湖北中心，湖北武漢 430070；2.貴州省中國科學院天然產(chǎn)物化學重點實驗室，貴州貴陽 550002)利用德溫特世界專利索引數(shù)據(jù)庫(DWPI)，分析作物改良領域人工核酸酶技術專利布局，揭示關鍵技術發(fā)展方向和趨勢、技術分布區(qū)域、專利申請人情況、競爭對手情況以及各技術方向對應的技術功效分布，以期為我國研究者的技術研
安徽農(nóng)業(yè)科學 2016年23期2016-10-10
- 氨基樹脂表面活化提高固定化核酸酶P1連續(xù)催化性能
活化提高固定化核酸酶P1連續(xù)催化性能何林姣1,2，劉曉靜1,2，黃金莎1,2，莊偉1,2,3，應漢杰1,2,3（1南京工業(yè)大學材料化學工程國家重點實驗室，江蘇 南京 210009；2南京工業(yè)大學制藥與生物工程學院國家生化工程技術研究中心，江蘇 南京 211816；3南京工業(yè)大學江蘇先進生物與化學制造協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 211816）考察了固定化酶常用載體-氨基樹脂幾何結構及表面活化過程對固定化核酸酶P1性能的影響，并進行了動力學和連續(xù)催化穩(wěn)定性研究。
化工學報 2016年9期2016-09-26
- 熱敏型核酸酶在畢赤酵母中的分泌表達及催化特性
，陳鵬?熱敏型核酸酶在畢赤酵母中的分泌表達及催化特性陳芳霞，陳鵬西北農(nóng)林科技大學 生命科學學院，陜西 楊凌 712100核酸酶在生物工程領域有著重要的應用價值。本研究在優(yōu)化北極蝦核酸酶 (Shrimp nuclease，SNU) 基因序列的基礎上，構建SNU的畢赤酵母分泌表達載體SNU-pPICZα A并轉化酵母，以高拷貝整合轉化子為基礎，優(yōu)化酶表達的條件，并對該酶的催化特性進行分析，結果顯示SNU可在畢赤酵母SMD1168H中高效分泌表達，最佳誘導表達條
生物工程學報 2016年7期2016-09-19
- Serratiamarcescens非特異性核酸酶研究進展
ens非特異性核酸酶研究進展張瑜，鄭偉，顧劍飛，石陸娥(杭州師范大學生命與環(huán)境科學學院，浙江杭州310016)Serratiamarcescens核酸酶是一種非特異性核酸內(nèi)切酶，可降解不同形式的DNA和RNA。本文綜合國內(nèi)外的研究概況,主要介紹了Serratiamarcescens非特異性核酸酶的水解位點、催化機制及其降解底物的特點，另外也闡述了Serratiamarcescens非特異性核酸酶的原核表達的研究以及其應用現(xiàn)狀，為Serratiamarces
廣州化工 2016年5期2016-09-01
- 新醫(yī)學時代：治療性基因組編輯
鍵的原則。基于核酸酶的基因組編輯基本過程是在基因組內(nèi)構建一個位點特異性DSB，然后催動細胞自己的內(nèi)源性修復機制來修復折斷（圖1）。細胞可以使用兩種基本機理來修復折斷：非同源性末端連接（NHEJ）或同源重組（HR）。當單個折斷的編輯因NHEJ而發(fā)生，就可以在折斷位點上構建出插入/缺失之類的突變（圖1a）。缺失的尺寸趨向于大于插入的尺寸，當染色體外DNA在折斷位點處被捕捉時例外（其發(fā)生率罕見但是可測量），這種時候可以發(fā)生數(shù)百堿基對的插入。當使用捐贈者的供體序列
世界科學 2016年8期2016-08-27
- 探索基因組編輯的新工具
列，它能與多種核酸酶（其中之一為Cas9）協(xié)同，起到識別并摧毀入侵病毒DNA的作用。已有研究發(fā)現(xiàn)，CRISPR-Cas9系統(tǒng)可轉用于基因組編輯，成功實現(xiàn)生物醫(yī)學上的基因靶向修飾，效率大大超過以往的基因組編輯工具。2015年9月，又有研究發(fā)現(xiàn)了核酸酶Cpf1與CRISPR組成的CRISPR-Cpf1系統(tǒng)，它比起CRISPR-Cas9有諸多特點和優(yōu)勢，可望發(fā)展成更加高效的基因組編輯工具。黃志偉課題組首先解析了結合CRISPR RNA（crRNA）的Cpfl復合
科學 2016年3期2016-05-30
- 動物轉基因研究中鋅指核酸酶的應用及進展
基因研究中鋅指核酸酶的應用及進展王嘉彬華中農(nóng)業(yè)大學作為一種比較先進的基因修飾技術，鋅指核酸酶技術已經(jīng)在多種生物轉基因研究領域得到了應用，包括植物、昆蟲、各類動物乃至人類細胞中，強化了人們對于動物復雜生理系統(tǒng)的理解和認知，不僅使得鋅指核酸酶技術成為構造轉基因生物的強力工具，更使得其在許多疾病的治療中發(fā)揮出了重要作用。本文主要對鋅指核酸酶在動物轉基因研究中的應用及進展進行了討論。動物轉基因；鋅指核酸酶；應用；進展前言轉基因在當前的科學研究領域雖然并非新的課題，
科學中國人 2016年26期2016-03-15
- 氨基樹脂表面活化提高固定化核酸酶P1連續(xù)催化性能
活化提高固定化核酸酶P1連續(xù)催化性能何林姣1,2，劉曉靜1,2，黃金莎1,2，莊偉1,2,3，應漢杰1,2,3（1南京工業(yè)大學材料化學工程國家重點實驗室，江蘇 南京 210009；2南京工業(yè)大學制藥與生物工程學院國家生化工程技術研究中心，江蘇 南京 211816；3南京工業(yè)大學江蘇先進生物與化學制造協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 211816）考察了固定化酶常用載體-氨基樹脂幾何結構及表面活化過程對固定化核酸酶P1性能的影響，并進行了動力學和連續(xù)催化穩(wěn)定性研究。
化工學報 2016年9期2016-03-13
- 基因組編輯技術及其在昆蟲遺傳轉化中的應用
93摘要:鋅指核酸酶、類轉錄激活因子式核酸酶和CRISPR/Cas技術是近幾年發(fā)展起來的3種主要基因組編輯技術，其原理都是通過在生物基因組特定位點制造DNA雙鏈斷裂損傷，從而激活機體自身的DNA 損傷修復機制，在此過程中引發(fā)各種變異?；蚪M編輯技術已在研究基因功能和基因修復中成功應用，基于基因組編輯技術的諸多優(yōu)點，如CRISPR/Cas技術能對基因組中多個特定位點進行編輯，其有望成為昆蟲遺傳轉化的主要策略。本文就鋅指核酸酶、類轉錄激活因子式核酸酶和CRIS
生物安全學報 2015年2期2015-12-17
- 后基因組時代的基因編輯技術
相比，基于人工核酸酶的基因組編輯技術，憑借其效率高、特異性強等特點，迅速成為生物醫(yī)學研究的新熱點。人工核酸酶介導的基因組編輯核酸酶可以水解DNA的特異堿基序列，通過人為改造，可實現(xiàn)對基因的修飾。目前主要的人工核酸酶有三種：鋅指核酸酶（zinc finger nucleases，ZFN）、類轉錄激活因子核酸酶（transcription activator-like effectornucleases。TALEN）和規(guī)律成簇的間隔短回文重復序列系統(tǒng)（clus
科學 2015年6期2015-05-30
- 利用常壓室溫等離子體(ARTP)誘變選育高產(chǎn)核酸酶P1菌株
)誘變選育高產(chǎn)核酸酶P1菌株梁劍光1,2,顧秋憶1,秦修東1,陳中兵2,余華順3,姚 娟3(1.常熟理工學院 生物與食品工程學院，江蘇常熟 215500；2.浙江升華拜克生物股份有限公司，浙江湖州 223232；3.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌 215500)為提高核酸酶P1的發(fā)酵酶活,以桔青霉菌株CK-3為出發(fā)菌株,利用常壓室溫等離子體(ARTP)誘變方法,獲得了3株(CK-3-1,CK-3-7,CK-3-9)高產(chǎn)核酸酶P1菌株,其中CK-3-9突變株
食品工業(yè)科技 2015年21期2015-05-05
- 基于SSA修復機制和特異性核酸酶活性檢測的雙熒光報告載體系統(tǒng)的開發(fā)及應用
復機制和特異性核酸酶活性檢測的雙熒光報告載體系統(tǒng)的開發(fā)及應用韓芙蓉1，王令1,2，徐坤1，張智英1，王昕1 1. 西北農(nóng)林科技大學動物科技學院，楊凌 712100；2. 陜西理工學院生物科學與工程學院，漢中 723000報告載體系統(tǒng)因構建快捷、改造簡單、操作容易、經(jīng)濟有效，并且能通過介導篩選核酸酶陽性細胞富集基因組修飾的陽性細胞克隆，而成為特異性核酸酶活性檢測的重要手段?；诜峭茨┒诉B接(Non-homologous end joining，NHEJ)修
遺傳 2015年10期2015-01-03
- CRISPR/Cas9系統(tǒng)的分子機制及其在人類疾病基因治療中的應用
相繼開發(fā)出鋅指核酸酶(Zinc finger nuclease, ZFN)技術[3,4]和轉錄激活因子樣效應物核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases, TALEN)技術[5～7]，基因組編輯技術得到迅速發(fā)展。細胞內(nèi)有兩種DNA損傷修復途徑：一種是同源介導修復(Homology directed repair, HDR)，可實現(xiàn)準確的DNA修復，不會產(chǎn)生基因突變；另一種是非同源末端連接(Non-
遺傳 2015年10期2015-01-03
- 美國：基因剪輯“刪除”艾滋病毒
后，一種被稱為核酸酶的DNA剪切酶與一種被稱為向導核糖核酸（gRNA）的RNA結合在一起瞄準病毒的基因組，并將HIV-1病毒的DNA切除。哈利利的實驗室研制了含有20個核苷酸鏈的gRNA來瞄準HIV-1病毒的DNA，并將其與Cas9基因剪輯技術配對。隨后，細胞的基因修復機制開始發(fā)揮作用，將基因組的松散末梢重新整合在一起——這樣細胞中就不再帶有病毒。這些分子工具還有望成為一種治療性疫苗；攜帶核酸酶與RNA組合的細胞不會受到HIV病毒的感染。endprint
東西南北 2014年21期2014-11-25
- 氧化石墨烯保護的核酸分子探針及其在生物分析中的應用
核酸、蛋白質、核酸酶、小分子及金屬離子的檢測[8-10]．除此之外,核酸與GO相互作用帶來的新的效應,如吸附于GO表面的核酸能夠抵抗核酸酶的降解,也被證明并得到了新的應用[11]．在本文里,我們綜述了科學家們對GO保護核酸抵抗核酸酶降解的研究及在此研究基礎上展開的一系列應用[12]．1 GO對核酸的吸附、保護性能及機理探討圖1 熒光標記的ssDNA用于核酸(A)[7]、蛋白質(B)[13]及小分子(C)[14]的檢測原理Fig.1 Fluorophore-
廈門大學學報（自然科學版） 2014年5期2014-08-07
- 科學家成功打造植物基因組“剪刀”
s系統(tǒng)是繼鋅指核酸酶（ZFNs）和TALEN核酸酶之后另一個可精確定點編輯基因組DNA的新技術。該系統(tǒng)利用短RNA序列引導Cas核酸酶在基因組上特定的位置進行切割形成雙鏈斷裂，隨后利用植物自身的修復機制，引入隨機突變或導入特定的DNA序列，從而對基因組進行突變、置換、插入等精確編輯，具有設計簡單、快速等優(yōu)點。該系統(tǒng)首先被科學家在細菌抵抗噬菌體侵染的過程中被發(fā)現(xiàn)，隨后被科學家改造成基因組修飾工具，并在動物細胞中成功實施，但由于植物的復雜性和遺傳轉化的高難度，
種業(yè)導刊 2014年2期2014-01-22
- 與人遺傳病相關的DNA重復序列的體外核小體定位特性
質及摸索微球菌核酸酶酶切條件。然后用本實驗室構建的含有上述人遺傳病相關重復序列的質粒體外組裝染色質與微球菌核酸酶酶切分析方法，在質粒層次初步研究了重復序列核小體定位的特性，為該類疾病機理的理解奠定了一定的基礎。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 試驗菌株:大腸桿菌DH5α、質粒pUC19、pBS-601 由本實驗室保存。重組質粒pUC(GAA)42、pUC(ATTCT)43和pUC(GCCT)18由本實驗室構建，在質粒的多克隆位點分別含有重復序列(GAA
基礎醫(yī)學與臨床 2013年3期2013-03-15
- 人工核酸酶用于基因組定點編輯的研究進展
發(fā)展起來的人工核酸酶(engineered nucleases，EN)技術為此帶來了新的曙光，使研究者能夠對不同物種和細胞中的幾乎所有基因進行編輯［4］。本文對EN 的類型、原理、應用及存在的問題等進行綜述。1 利用EN 進行基因組定點修飾的一般原理EN 進行基因組定點修飾主要包括2 個步驟［5］:首先，設計并構建EN，進而在靶位切斷基因組DNA，形成雙鏈斷裂(double-strand break，DSB);其次，DNA 損傷激活DNA 修復通路，啟動自
基礎醫(yī)學與臨床 2013年12期2013-02-19
- 靈桿菌非特異性核酸酶的原核表達、純化及活性分析
，已有通過加入核酸酶去除蛋白樣品中核酸的研究實例。如商業(yè)化產(chǎn)品 Benzonase endonuclease、DNase和RNase A等，其中Benzonase endonuclease來源于靈桿菌。靈桿菌核酸酶 (Serratia marcescens nuclease，smNU) 是一種分泌至胞外的非特異性磷酸二酯酶，其在金屬陽離子存在下可以高效切割任意形式的核酸 (DNA和RNA，雙鏈和單鏈)[1-5]，其催化效率是葡萄球菌核酸酶的4倍，牛胰DNa
生物工程學報 2011年8期2011-02-09
- DNA聚合酶Ⅰ的功能與結構的發(fā)現(xiàn)
3′→5′外切核酸酶活性和5′→3′外切核酸酶活性。1969年，科恩伯格研究了各種各樣的DNA結構與聚合酶的結合，提出了DNA聚合酶的活性中心模型，顯示了在這個活性中心內(nèi)的幾種活性位點，表示了錯配堿基被外切核酸酶切除和DNA聚合酶的修復過程。同年，科恩伯格和他在斯坦福大學醫(yī)學院生物化學系的同事還用沉降平衡法確定了DNA聚合酶的相對分子量，并通過蛋白水解作用把DNA聚合酶剪切成兩個片段，較大的片段保持了聚合酶活性和3′→5′外切核酸酶活性，小片段包含了5′→
自然雜志 2011年6期2011-01-24
- 桔青霉發(fā)酵制備核酸酶P1研究進展
桔青霉發(fā)酵制備核酸酶P1研究進展喻 晨1，趙 劼2，張亞雄1，朱昌雄2，姚 鵑2，李知洪2（1.三峽大學生物工程重點實驗室，湖北宜昌443002；2.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌443003）核酸酶P1是一種重要的工業(yè)酶制劑，可用于水解核酸生產(chǎn)5’-核苷酸。本文綜述了利用桔青霉發(fā)酵得到核酸酶P1的菌種選育、培養(yǎng)基優(yōu)化、發(fā)酵工藝控制、濃縮、相關應用和國內(nèi)外市場狀況。核酸酶P1，桔青霉，發(fā)酵法核酸酶P1（Nuclease P1），又名5′-磷酸二酯酶，其作用
食品工業(yè)科技 2010年11期2010-11-14
- 基于分子信標和S1核酸酶檢測鋅離子的研究
利于普及。S1核酸酶是能夠特異性切割核酸單鏈的核酸酶，對鋅離子有很強的依賴性，基于此特性發(fā)展了一種基于分子信標和S1核酸酶的鋅離子檢測新方法。該方法操作簡便，不需要昂貴儀器，不涉及復雜的離子載體合成，對鋅離子的檢測下限為120 μmol/L。1 實驗部分1.1 儀器和試劑F-4500熒光分光光度計(Hitachi，日本)；恒溫循環(huán)水浴(Amersham Biosciences公司，美國)；超純水裝置（Elix3，Millipore，U.S.A）。分子信標序
化學傳感器 2010年4期2010-03-23