• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    甘肅臨洮縣馬鈴薯瘡痂病致病鏈霉菌的分離鑒定及致病性

    2024-12-31 00:00:00郭瑞何偉羅文芳周軍輝汪雪晶許建軍宋素琴
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2024年19期
    關(guān)鍵詞:分離鑒定生物學(xué)特性致病性

    摘要:為給甘肅馬鈴薯瘡痂病病的診斷和防治提供研究依據(jù),從甘肅臨洮縣采集馬鈴薯種植區(qū)病薯根際土壤,利用稀釋涂布分離法分離馬鈴薯瘡痂病病原菌菌株,并檢測(cè)致病基因txtAB、nec1、tomA,結(jié)合小蘿卜幼苗法和小薯片法測(cè)定菌株的致病性;通過(guò)形態(tài)學(xué)、生理生化特性及16S rDNA序列進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明,菌株DW1、DW2、DY4、DY6菌株含有致病基因;其中菌株DW1、DW2、DY4能使小薯片表面變褐,壞死;DW2、DY4、DY6能明顯抑制蘿卜幼苗生長(zhǎng)。其中,菌株DY4同時(shí)具有nec1、tomA等2種致病基因,其余菌株只具有nec1致病基因。經(jīng)16S rDNA 序列分析,菌株DW1為Streptomyces nigra,菌株DW2為S.albogriseolus,菌株DY4為S.scabiei,菌株DY6為S.europaeiscabiei。其中,菌株S.nigra、S.albogriseolus,均為首次報(bào)道具有馬鈴薯瘡痂病致病性的鏈霉菌。

    關(guān)鍵詞:馬鈴薯瘡痂病病原菌;分離鑒定;致病基因;致病性;生物學(xué)特性

    中圖分類(lèi)號(hào):S435.32" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    文章編號(hào):1002-1302(2024)19-0158-07

    收稿日期:2023-10-26

    基金項(xiàng)目:新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新重點(diǎn)培育專(zhuān)項(xiàng)(編號(hào):Xjkcpy-202203);新疆維吾爾自治區(qū)重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目任務(wù)專(zhuān)項(xiàng)(編號(hào):2022B02044-2)。

    作者簡(jiǎn)介:郭 瑞(1999—),女,甘肅酒泉人,碩士研究生,從事馬鈴薯瘡痂病致病鏈霉菌分離鑒定及代謝產(chǎn)物活性研究。E-mail:1522017534@qq.com。

    通信作者:宋素琴,研究員,從事微生物活性產(chǎn)物及作物病害研究,E-mail:suqin_song@163.com;許建軍,博士,教授,從事為農(nóng)作物及林果病害蟲(chóng)綜合防控研究,E-mail:xjj72@163.com。

    馬鈴薯瘡痂?。╬otato common scab)是由放線菌目鏈霉菌屬的致病鏈霉菌(Streptomyces spp.)通過(guò)皮孔或馬鈴薯表面開(kāi)放性傷口侵染馬鈴薯塊莖引起的土傳病害。馬鈴薯被侵染后,塊莖表面形成木質(zhì)化痂狀病斑;發(fā)生嚴(yán)重時(shí),影響馬鈴薯外觀,降低薯塊質(zhì)量和商品價(jià)值[1-2。隨著馬鈴薯種植面積的逐年增加,馬鈴薯瘡痂病的發(fā)生也日益增多,已成為馬鈴薯瘡痂病的主要病害之一。甘肅省作為我國(guó)馬鈴薯主要種植區(qū)之一,馬鈴薯產(chǎn)業(yè)也在全省農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)占據(jù)主要地位;馬鈴薯瘡痂病的發(fā)生率達(dá)到30%,嚴(yán)重危害馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[3-4。

    目前,全球已報(bào)道30多種馬鈴薯瘡痂病致病菌種類(lèi),主要致病菌有酸性鏈霉菌(S .acidiscabies)、歐式鏈霉菌(S.europaeiscabiei)、瘡痂鏈霉菌(S.scabies)、加利利鏈霉菌(S.galilaeus)[5-7。其中,我國(guó)已報(bào)道的致病瘡痂鏈霉菌病原共有18種,常見(jiàn)的3種病原為瘡痂鏈霉菌、酸性鏈霉菌、腫痂鏈霉菌(S.turgidiscabies)[8。在致病鏈霉菌中,相關(guān)致病基因聚集在染色體同一區(qū)域,該區(qū)域被稱(chēng)為致病島(pathogenicity island,PAI),PAI由2個(gè)部分組成,第一部分是毒素合成基因,包括txtA、txtB、txtC等;第二部分包括nec1誘導(dǎo)壞死蛋白基因、tomA致病性因子基因和多種與毒力相關(guān)基因[9。由于致病島可以水平轉(zhuǎn)移到鏈霉菌屬的其他種中,從而不斷產(chǎn)生新的致病種10,為馬鈴薯瘡痂病的防治增添了難度。甘肅省臨洮縣地處隴西盆地西緣,臨洮縣地形南北狹長(zhǎng),地勢(shì)由東南向西北傾斜,境內(nèi)以黃土地貌為主,屬溫帶大陸性氣候。目前,在甘肅省馬鈴薯種植區(qū)中已分離鑒定馬鈴薯瘡痂病的病原菌為瘡痂鏈霉菌、加利利鏈霉菌等(表1)[11-14。本試驗(yàn)臨洮縣馬鈴薯瘡痂病致病鏈霉菌進(jìn)行分離鑒定及生物學(xué)特性研究,為豐富我國(guó)馬鈴薯瘡痂病原菌種類(lèi)及該病害防治研究提供基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試馬鈴薯瘡痂病病薯塊莖和根際土壤于2022年8月采自甘肅臨洮縣。對(duì)照菌株S.scabies YN由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)提供。本試驗(yàn)于2023年3月在新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所進(jìn)行。

    分離培養(yǎng)基為燕麥麩皮固體培養(yǎng)基(OMA):燕麥麩皮20 g、瓊脂15 g和去離子水1 L;高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基(G1):可溶性淀粉20.0 g,K2HPO3 0.5 g,KNO3 1.0 g,NaCl 0.5 g,F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,瓊脂粉20.0 g,去離子水 1 000 mL;ISP2固體培養(yǎng)基:酵母浸粉4.0 g,麥芽浸粉10.0 g,葡萄糖4.0 g,瓊脂粉20 g,去離子水 1 000 mL;ISP4固體培養(yǎng)基:可溶性淀粉10.0 g,K2HPO3 1.0 g,MgSO4·7H2O 1.0 g,NaCl 1.0 g,(NH42SO4 2.0 g,CaSO4 2.0 g,F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001 g,MnCl2 0.001 g,ZnSO4·7H2O 0.001 g瓊脂粉 15.0 g,去離子水1 000 mL。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 病原菌的分離純化

    將采集的馬鈴薯瘡痂病發(fā)病地塊土壤于自然條件下風(fēng)干,用無(wú)菌研缽研細(xì),利用稀釋涂布法稱(chēng)取1 g根際土壤,加9 mL無(wú)菌水,渦旋混勻,靜置30 min后進(jìn)行10-2、10-3、10-4、10-5倍梯度稀釋。取80 μL混懸液,分別涂布于OMA、G1、ISP2及ISP4培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng)7 d。挑取單菌落在高氏Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上純化并編號(hào),純化菌株轉(zhuǎn)接斜面置于4 ℃冰箱保存。

    1.2.2 病原菌的致病基因測(cè)定

    據(jù)報(bào)道,馬鈴薯瘡痂病致病菌都含有致病基因,包括Thaxtomins毒素合成基因txtAB、壞死基因nec1以及番茄紅素酶tomA,病原菌是否含有致病基因是檢測(cè)該菌是否具有致病性的指標(biāo)14。用PCR擴(kuò)增方法檢測(cè)鏈霉菌中是否含有3種致病基因。以對(duì)照菌株S. scabies YN為陽(yáng)性對(duì)照,對(duì)txtAB、nec1、tomA基因進(jìn)行檢測(cè)。致病基因檢測(cè)PCR反應(yīng)體系見(jiàn)表2,引物序列如表3所示,擴(kuò)增條件如表4所示,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)[15。

    1.2.3 病原菌的致病性測(cè)定

    利用小薯片法、蘿卜幼苗法[19-20測(cè)定含有致病基因的鏈霉菌株的致病性。

    1.2.3.1 小薯片法 將分離得到的含有致病基因的菌株接種至G1平板中,30 ℃培養(yǎng)7 d;選擇健康的馬鈴薯和青蘿卜,使用75%乙醇進(jìn)行表面消毒,無(wú)菌水沖洗干凈;之后用無(wú)菌打孔器在塊莖上打孔,無(wú)菌手術(shù)刀切成厚度一致的薯片,放置于含有滅菌濾紙片的培養(yǎng)皿中放入4片/皿;用打孔器在致病基因菌株平板中打孔,將菌餅倒置放置在小薯片中央,以未接菌的培養(yǎng)基為對(duì)照;30 ℃恒溫培養(yǎng) 7 d,觀察小薯片是否褐變壞死。

    1.2.3.2 蘿卜幼苗法 將含有致病基因的菌株接種至放線菌液體培養(yǎng)基中,30 ℃、150 r/min培養(yǎng) 7 d;用75%無(wú)水乙醇對(duì)蘿卜種子表面消毒,再用無(wú)菌水連續(xù)沖洗3次,晾干;將晾干的種子放置于含有濕潤(rùn)無(wú)菌濾紙的培養(yǎng)皿中進(jìn)行催芽;選取長(zhǎng)勢(shì)一致的種子分裝到含有1%水瓊脂的試管中,放入 3 粒/支;將培養(yǎng)好的菌液200 μL 接種至試管中,以接種無(wú)菌液體培養(yǎng)基為空白對(duì)照,每個(gè)處理重復(fù)3次;將試管放置于光照培養(yǎng)箱間歇培養(yǎng),7 d后觀察并測(cè)量蘿卜幼苗根長(zhǎng)。

    1.2.4 病原菌的形態(tài)學(xué)及生物學(xué)特性

    病原菌形態(tài)特征觀察:挑取G1平板上生長(zhǎng)7 d的鏈霉菌單菌落并置于載玻片上,40倍目光學(xué)顯微鏡下觀察鏈霉菌孢子形態(tài)特征。根據(jù)國(guó)際鏈霉菌計(jì)劃(ISP)方法,進(jìn)行生理生化鑒定。

    1.2.5 16S rDNA序列分析

    菌株基因組DNA的提取參照文獻(xiàn)[21]中的方法進(jìn)行。采用16S rDNA通用引物(通用引物27F、1492R)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,其反應(yīng)體系為 30 μL:15 μL Mix,2 μL模板,ddH2O 11 μL,上下游引物各1 μL,PCR產(chǎn)物用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。由上海生工生物工程有限公司進(jìn)行測(cè)定。測(cè)序結(jié)果在NCBI網(wǎng)站上比對(duì),利用MTGA 11.0構(gòu)建發(fā)育樹(shù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 馬鈴薯瘡痂病病原菌的分離

    馬鈴薯根際土壤中共分離純化得到23株放線菌,對(duì)分離得到的菌株進(jìn)行初步歸類(lèi)并編號(hào)。

    2.2 馬鈴薯瘡痂病病原的致病性測(cè)定

    2.2.1 病原菌的致病基因PCR檢測(cè)

    根據(jù)致病基因測(cè)定方法,對(duì)篩選得到的鏈霉菌進(jìn)行致病基因檢測(cè),結(jié)果(圖1)表明,4株鏈霉菌具有致病基因,其中1株具有tomA基因,3株具有nec1基因,DY4同時(shí)具有tomA和nec1等2種致病基因。

    2.2.2 病原菌的致病性檢測(cè)

    蘿卜幼苗法表明,DW2、DY4、DY6均可以抑制蘿卜幼苗的生長(zhǎng),抑制率達(dá)到69.76%、57.58%、63.46%(表5、圖2)。與空白對(duì)照相比,含有致病基因菌懸液處理的蘿卜幼苗根系長(zhǎng)度明顯縮短,并且出現(xiàn)小部分的皺縮壞死。

    同時(shí),采用小薯片法和蘿卜片法對(duì)含有致病基因的6株菌株進(jìn)行致病性測(cè)定(圖3),處理7 d后觀察到小薯片、蘿卜片。結(jié)果表明,DW1、DW2、DY4菌株處理的小薯片變軟,表面出現(xiàn)褐色病斑并且有明顯凹陷,與陽(yáng)性對(duì)照表現(xiàn)相似;DW2、DY4、DY6菌株處理的小蘿卜片表明出現(xiàn)黑色病斑,小蘿卜片出現(xiàn)變干壞死,與陽(yáng)性對(duì)照表現(xiàn)相似;而對(duì)照的小薯片和蘿卜片無(wú)變化(圖3)。

    2.3 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定

    2.3.1 形態(tài)學(xué)描述

    菌株DW1、DW2、DY4、DY6在G1平板上形態(tài)特征如圖4所示。DW1菌落呈灰白色,邊緣稍有褶皺突起,呈同心圓狀,革蘭氏染色呈陽(yáng)性,孢子呈灰白色,孢子鏈呈直柔曲狀(圖4-A);DW2菌落呈灰白色,中心凸起,革蘭氏染色呈陽(yáng)性,孢子呈灰色,孢子鏈呈波曲狀(圖4-B);DY4菌落呈黃色,革蘭氏染色呈陽(yáng)性,孢子呈白色,孢子鏈較直(圖4-C);DY6菌落呈淡黃色,革蘭氏染色呈陽(yáng)性,孢子呈白色,孢子鏈簇生分支(圖4-D)。

    2.3.2 病原菌生物學(xué)特性的測(cè)定

    對(duì)分離得到的含有致病基因的菌株進(jìn)行生物學(xué)測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表6。所有菌株均能以D-葡萄糖、D-甘露醇、蔗糖、α-乳糖、棉子糖、肌醇為單一碳源,但DY4、DY6不能利用木糖;菌株DW1、DW2以賴(lài)氨酸、脯氨酸、組氨酸、絲氨酸、甲硫氨酸、天門(mén)冬酰胺、L-賴(lài)氨酸為單一氮源,菌株DY6不能利用甲硫氨酸和組氨酸;所有菌株在10% NaCl培養(yǎng)基中均無(wú)法生長(zhǎng);DY6可以產(chǎn)生H2S;DY4、DY6可以產(chǎn)生黑色素;DW1、DW2、DY6可以產(chǎn)生纖維素酶;DW1、DW2、DY4可以產(chǎn)生脂肪酶;4株菌株對(duì)結(jié)晶紫、0.1%苯酚敏感,均可耐受10 IU/mL青霉素,DY4菌株對(duì)鏈霉素敏感。

    2.3.3 病原菌的16S rDNA序列分析

    對(duì)分離到的、含致病基因的菌株進(jìn)行16S rDNA擴(kuò)增,使用細(xì)菌通用引物27F、1492R得到1 500 bp基因片段(圖5),送生工生物工程(上海)有限公司測(cè)序;將16S rDNA序列在NCBI上進(jìn)行Blast比對(duì)并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖6)。結(jié)果表明,菌株DW1與灰黑鏈霉菌(S.nigra)(MG572975.1:106-1366)的親緣關(guān)系最近,相似率為100%;菌株DW2與S.albogriseolus(MT229141.1:55-1388)的親緣關(guān)系最近,相似率為100%;菌株DY4與瘡痂鏈霉菌(S.scabiei)(OM909117.1:20-1372)的親緣關(guān)系最近,相似率為99.93%,菌株DY6與歐式鏈霉菌(S.europaeiscabiei)(OK448161.1:21-1377)的親緣關(guān)系最近,相似率為100%。

    3 討論

    瘡痂鏈霉菌通過(guò)侵染使馬鈴薯塊莖表面出現(xiàn)褐色痂狀病斑,通過(guò)土壤和種薯傳播及感病馬鈴薯跨區(qū)域售賣(mài)而廣泛傳播。馬鈴薯瘡痂病原菌的致病基因主要集中在其致病島(PAI)上[16,致病基因島可以在不同鏈霉菌中轉(zhuǎn)移21-22,從而不斷產(chǎn)生新的致病鏈霉菌,因此不斷有馬鈴薯瘡痂病新致病菌出現(xiàn),為進(jìn)行馬鈴薯瘡痂病致病菌、致病基因及防治的研究提供依據(jù)。

    本研究對(duì)甘肅省臨洮馬鈴薯種植區(qū)瘡痂病致病鏈霉菌進(jìn)行分離篩選并進(jìn)行生物學(xué)特性和16S rDNA序列分析,結(jié)果分離篩選得到4株致病菌株,并鑒定為S.nigra、S.albogriseolus、S.scabiei、S.europaeiscabiei,其中S.nigra、S.albogriseolus為首次報(bào)道含有馬鈴薯瘡痂病致病基因的鏈霉菌。S.scabiei含有tomA和nec1等2種致病基因,其他3株菌只含有tomA基因,這驗(yàn)證了致病島可以在鏈霉菌之間轉(zhuǎn)移11,23-24;4株菌株均具有致病性,使小薯片或小蘿卜片產(chǎn)生明顯的病斑,或具有小蘿卜幼苗抑制作用,這證明即使不含有全部3個(gè)致病基因,也具有致病性,這與之前報(bào)道的內(nèi)容[18,24相符。PAI可轉(zhuǎn)移這一特性加大了馬鈴薯瘡痂病的防治難度,同時(shí)馬鈴薯瘡痂病新致病鏈霉菌的發(fā)現(xiàn)為不同地區(qū)馬鈴薯瘡痂病的系統(tǒng)研究及其防治提供了依據(jù)。

    4 結(jié)論

    本研究對(duì)甘肅臨洮縣馬鈴薯種植地根際土壤進(jìn)行分離,并通過(guò)致病基因PCR以及致病性試驗(yàn)篩選得到4株具有致病性的鏈霉菌。經(jīng)形態(tài)學(xué)及 16S rDNA 序列同源性分析,初步鑒定4株菌株為S.nigra、S.albogriseolus、S.scabiei和S.europaeiscabiei,其中S.nigra、S.albogriseolus為首次報(bào)道的馬鈴薯瘡痂病致病鏈霉菌;S.scabiei DY4菌株含有tomA和nec1等2種致病基因,可以使小薯片出現(xiàn)黑色病斑,小蘿卜片變干壞死,同時(shí)對(duì)小蘿卜幼苗具有明顯的抑制作用;其他3株菌只含有nec1致病基因,且菌株S.albogriseolus DW2對(duì)小蘿卜幼苗的抑制效果最明顯,抑制率達(dá)到69.76%。生物學(xué)特性顯示,菌株S.nigra DW1、S.albogriseolus DW2能利用D-葡萄糖、D-甘露醇、蔗糖等6種碳源,菌株S.scabiei DY4、S.europaeiscabiei DY6不能利用木糖;除菌株S.europaeiscabiei DY6外,其他菌株均可以利用賴(lài)氨酸、脯氨酸、組氨酸等6種氮源,菌株S.europaeiscabiei DY6不能利用甲硫氨酸和組氨酸,但可以產(chǎn)生H2S;所有菌株在含10%的NaCl培養(yǎng)基中均無(wú)法生長(zhǎng);S.scabiei DY4、S.europaeiscabiei DY6可以產(chǎn)生黑色素;S.nigra DW1、S.albogriseolus DW2、S.europaeiscabiei DY6可以產(chǎn)生纖維素酶;S.nigra DW1、S.albogriseolus DW2、S.scabiei DY4可以產(chǎn)生脂肪酶;4株菌株對(duì)結(jié)晶紫、0.1%苯酚敏感,均可耐受10 IU/mL青霉素。

    參考文獻(xiàn):

    [1]Guo F L,Zhang H Y,Yu X M,et al. First report of Streptomyces galilaeus associated with common scab in China[J]. Plant Disease,2014,98(5):683.

    [2]Wanner L A,Kirk W W. Streptomyces-from basic microbiology to role as a plant pathogen[J]. American Journal of Potato Research,2015,92(2):236-242.

    [3]李青青,李繼平. 5種藥劑不同稀釋液澆灌防治脫毒馬鈴薯瘡痂病效果初報(bào)[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)科技,2006(8):31-32.

    [4]范彩霞. 馬鈴薯瘡痂病防治技術(shù)[J]. 農(nóng)村科技,2012(12):41.

    [5]Loria R,Bukhalid R A,F(xiàn)ry B A,et al. Plant pathogenicity in the genus Streptomyces[J]. Plant Disease,1997,81(8):836-846.

    [6]Park D H,Yu Y M,Kim J S,et al. Characterization of Streptomycetes causing potato common scab in Korea[J]. Plant Disease,2003,87(11):1290-1296.

    [7]張麗秋,辛建華,李天來(lái).外源鈣對(duì)馬鈴薯貯藏品質(zhì)的影響[J]. 長(zhǎng)江蔬菜,2009(6):33-36.

    [8]張 萌,劉 伯,于秀梅,等. 中國(guó)馬鈴薯瘡痂病菌生物學(xué)特性分析[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,43(12):2603-2610.

    [9]Güldener U,Seong K Y,Boddu J,et al. Development of a Fusarium graminearum Affymetrix GeneChip for profiling fungal gene expression in vitro and in planta[J]. Fungal Genetics and Biology,2006,43(5):316-325.

    [10]聶峰杰,陳虞超,鞏 檑,等. 馬鈴薯瘡痂病致病鏈霉菌分類(lèi)及其致病機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 分子植物育種,2018,16(4):1313-1319.

    [11]康 蓉,王生榮. 甘肅馬鈴薯瘡痂病病原初步鑒定[J]. 植物保護(hù),2013,39(3):78-82.

    [12]張慶勇. 甘肅省部分地區(qū)馬鈴薯瘡痂病病原菌的分離鑒定及其多樣性研究[D]. 泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2019.

    [13]齊志國(guó). 定西地區(qū)馬鈴薯瘡痂病病原菌的分離鑒定及其多樣性研究[D]. 泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2019:4-7.

    [14]Kers J A,Cameron K D,Joshi M V,et al. A large,mobile pathogenicity island confers plant pathogenicity on Streptomyces species[J]. Molecular Microbiology,2005,55(4):1025-1033.

    [15]申永瑞,向君亮,王佳琦,等. 瘡痂鏈霉菌拮抗菌株BU396的分離鑒定與抗菌性質(zhì)分析[J]. 微生物學(xué)通報(bào),2019,46(10):2601-2611.

    [16]Wanner L A. A survey of genetic variation in Streptomyces isolates causing potato common scab in the United States[J]. Phytopathology,2006,96(12):1363-1371.

    [17]Bukhalid R A,Chung S Y,Loria R. nec1,a gene conferring a necrogenic phenotype,is conserved in plant-pathogenic Streptomyces spp. and linked to a transposase pseudogene[J]. Molecular Plant-Microbe Interactions,1998,11(10):960-967.

    [18]趙偉全,楊文香,李亞寧,等. 中國(guó)馬鈴薯瘡痂病菌的鑒定[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,39(2):313-318.

    [19]陳利達(dá),李 磊,謝學(xué)文,等. 山東高密地區(qū)馬鈴薯瘡痂病菌種類(lèi)及致病性鑒定[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào),2020,35(增刊1):347-354.

    [20]Bukhalid R A,Takeuchi T,Labeda D,et al. Horizontal transfer of the plant virulence gene,nec1,and flanking sequences among genetically distinct Streptomyces strains in the diastatochromogenes cluster[J]. Applied and Environmental Microbiology,2002,68(2):738-744.

    [21]Kieser T,Bibb M J,Buttner M J,et al. Practical Streptomyces genetics[M]. Norwich:John I nnes Foun-dation,2000:25-27.

    [22]楊 鑫,賴(lài)振光,樊吳靜,等. 馬鈴薯瘡痂病不同抗性品種發(fā)病與健康塊莖內(nèi)生細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及多樣性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2023,51(14):134-140.

    [23]Wanner L A. A new strain of Streptomyces causing common scab in potato[J]. Plant Disease,2007,91(4):352-359.

    [24]Wanner L A. Field isolates of Streptomyces differ in pathogenicity and virulence on radish[J]. Plant Disease,2004,88(8):785-796.

    猜你喜歡
    分離鑒定生物學(xué)特性致病性
    五株雞傳染性支氣管炎病毒流行株的分離鑒定
    引起奶牛關(guān)節(jié)炎的牛支原體病原的分離鑒定
    山楂在城市園林綠化中的應(yīng)用
    當(dāng)歸防早期抽薹栽培技術(shù)
    平菇的室內(nèi)栽培方法
    當(dāng)歸生物學(xué)特性及無(wú)公害栽培研究
    一例高致病性豬藍(lán)耳病的診治
    高致病性藍(lán)耳病的診斷和治療
    一株纖維素分解菌的分離鑒定及生物學(xué)特性
    重慶煙區(qū)硅酸鹽細(xì)菌的分離鑒定及生理生化特性
    91久久精品电影网| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产大屁股一区二区在线视频| ponron亚洲| a级毛片免费高清观看在线播放| 成人av在线播放网站| 亚洲无线观看免费| 久久这里只有精品中国| 色播亚洲综合网| 69av精品久久久久久| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 一本一本综合久久| 国产精品人妻久久久久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 我要搜黄色片| 亚洲久久久久久中文字幕| 国内精品美女久久久久久| 亚洲内射少妇av| 精华霜和精华液先用哪个| 国产成人精品久久久久久| 日本色播在线视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产av不卡久久| 欧美在线一区亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 99热精品在线国产| 男人的好看免费观看在线视频| 国产 一区 欧美 日韩| 最好的美女福利视频网| 久久精品影院6| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 极品教师在线视频| 日本黄大片高清| 男女啪啪激烈高潮av片| av卡一久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 91av网一区二区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 91在线观看av| 国产精品久久久久久精品电影| 一夜夜www| 国语自产精品视频在线第100页| 小说图片视频综合网站| 亚洲熟妇熟女久久| 干丝袜人妻中文字幕| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 成人特级av手机在线观看| 又爽又黄无遮挡网站| 日本黄大片高清| 亚洲人与动物交配视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 91精品国产九色| 国产乱人视频| 午夜福利在线观看吧| 天堂影院成人在线观看| 内地一区二区视频在线| 高清午夜精品一区二区三区 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 国产在线精品亚洲第一网站| .国产精品久久| 久久精品综合一区二区三区| 色av中文字幕| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 一进一出好大好爽视频| 午夜激情欧美在线| 在线a可以看的网站| 国产精品精品国产色婷婷| 国产色婷婷99| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品野战在线观看| 黄片wwwwww| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲第一区二区三区不卡| av在线播放精品| 亚洲av成人精品一区久久| 精品人妻视频免费看| 国产精华一区二区三区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 91av网一区二区| 一级黄片播放器| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品一区二区三区人妻视频| 色播亚洲综合网| 免费人成在线观看视频色| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 特大巨黑吊av在线直播| 日本黄大片高清| 久久九九热精品免费| 免费av不卡在线播放| 久久6这里有精品| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 美女大奶头视频| 国产综合懂色| 久久热精品热| 国产精品久久久久久久久免| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 日本与韩国留学比较| 日本一二三区视频观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 欧美色欧美亚洲另类二区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲人成网站在线观看播放| 91狼人影院| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产在线精品亚洲第一网站| 寂寞人妻少妇视频99o| 日本爱情动作片www.在线观看 | 国产精品一区二区性色av| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 久久人人精品亚洲av| 久久午夜福利片| a级毛色黄片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久99热6这里只有精品| 无遮挡黄片免费观看| 午夜福利视频1000在线观看| 91精品国产九色| 亚洲成人精品中文字幕电影| 老司机影院成人| 成人av一区二区三区在线看| 美女cb高潮喷水在线观看| 看免费成人av毛片| 色视频www国产| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲五月天丁香| avwww免费| 99视频精品全部免费 在线| 国产探花在线观看一区二区| 老女人水多毛片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 97超视频在线观看视频| 国产午夜福利久久久久久| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美激情久久久久久爽电影| 在线免费观看不下载黄p国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲精品第二区| 边亲边吃奶的免费视频| xxx大片免费视频| 午夜免费观看性视频| 99久久精品热视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久6这里有精品| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲国产av新网站| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 天天操日日干夜夜撸| 蜜臀久久99精品久久宅男| 精品人妻一区二区三区麻豆| 女人精品久久久久毛片| 亚洲精品一区蜜桃| 黑人高潮一二区| 不卡视频在线观看欧美| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 哪个播放器可以免费观看大片| 高清欧美精品videossex| 成年人免费黄色播放视频 | 青春草亚洲视频在线观看| 在线播放无遮挡| 伦理电影免费视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99九九在线精品视频 | 欧美高清成人免费视频www| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲,一卡二卡三卡| 黄色一级大片看看| 午夜免费鲁丝| 91精品一卡2卡3卡4卡| 日韩大片免费观看网站| 男人添女人高潮全过程视频| 搡老乐熟女国产| 国产成人一区二区在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲性久久影院| 亚洲国产欧美在线一区| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲欧美精品自产自拍| 男人爽女人下面视频在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精品99久久99久久久不卡 | 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 日韩欧美精品免费久久| 国产熟女欧美一区二区| videossex国产| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 中国三级夫妇交换| 黄色欧美视频在线观看| 久久久久国产网址| 激情五月婷婷亚洲| 九草在线视频观看| 高清视频免费观看一区二区| videossex国产| a级片在线免费高清观看视频| 成人影院久久| 国产乱人偷精品视频| av网站免费在线观看视频| 18禁在线播放成人免费| 老司机影院毛片| 美女主播在线视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 黄色怎么调成土黄色| 免费观看在线日韩| 在现免费观看毛片| 久久久亚洲精品成人影院| av线在线观看网站| 久久久久久伊人网av| 亚洲第一av免费看| 黄色毛片三级朝国网站 | 偷拍熟女少妇极品色| 久久人人爽人人爽人人片va| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 麻豆成人av视频| 一级毛片我不卡| 婷婷色综合大香蕉| 国产成人午夜福利电影在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 国产精品人妻久久久影院| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久久久久久久久成人| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产探花极品一区二区| 少妇人妻精品综合一区二区| 精品久久久久久电影网| 国产伦理片在线播放av一区| 久久国内精品自在自线图片| 久久久久久久久久久久大奶| 极品少妇高潮喷水抽搐| 卡戴珊不雅视频在线播放| av.在线天堂| 男人狂女人下面高潮的视频| 一本一本综合久久| 在线观看三级黄色| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 成人漫画全彩无遮挡| 国产免费一级a男人的天堂| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 18禁在线无遮挡免费观看视频| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久久久久国产电影| 欧美性感艳星| 国产成人精品无人区| 欧美精品亚洲一区二区| 最近中文字幕2019免费版| 免费看日本二区| 丰满乱子伦码专区| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品一区www在线观看| 极品人妻少妇av视频| 国产成人精品福利久久| 亚洲成人手机| av福利片在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 少妇精品久久久久久久| 久久久久久伊人网av| 免费黄网站久久成人精品| 日韩av不卡免费在线播放| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产欧美亚洲国产| 日本爱情动作片www.在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲欧洲国产日韩| 久久99热6这里只有精品| 伊人亚洲综合成人网| 天天操日日干夜夜撸| 免费观看的影片在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 日韩一区二区三区影片| 国产男女内射视频| 女人久久www免费人成看片| 热re99久久精品国产66热6| 又大又黄又爽视频免费| 国产成人精品福利久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产免费福利视频在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 久久人妻熟女aⅴ| 欧美97在线视频| 乱系列少妇在线播放| 久久精品久久精品一区二区三区| 最近2019中文字幕mv第一页| 精品亚洲成a人片在线观看| 久久久久久久久久成人| 亚洲av欧美aⅴ国产| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产精品久久久久久久久免| 青春草视频在线免费观看| 久热这里只有精品99| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 男女无遮挡免费网站观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产成人freesex在线| 亚洲av不卡在线观看| 99九九在线精品视频 | 欧美区成人在线视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 丰满迷人的少妇在线观看| 69精品国产乱码久久久| 波野结衣二区三区在线| 在线看a的网站| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲精品,欧美精品| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲第一av免费看| 日本欧美视频一区| 国产伦理片在线播放av一区| 最新的欧美精品一区二区| 大陆偷拍与自拍| 国产黄片美女视频| 国产精品伦人一区二区| 老女人水多毛片| 三级经典国产精品| 中文欧美无线码| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产乱人偷精品视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 九九爱精品视频在线观看| 日韩强制内射视频| 九草在线视频观看| 黄色日韩在线| 亚洲av国产av综合av卡| 国产一区二区在线观看av| 视频区图区小说| 我要看日韩黄色一级片| 美女主播在线视频| 欧美人与善性xxx| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲精品视频女| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产美女午夜福利| 国产精品久久久久久精品古装| 日韩电影二区| 丝袜喷水一区| 在线 av 中文字幕| 免费看av在线观看网站| 赤兔流量卡办理| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 看非洲黑人一级黄片| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产真实伦视频高清在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产亚洲最大av| 久久久国产一区二区| 国模一区二区三区四区视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品熟女久久久久浪| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 一级爰片在线观看| 亚洲成人av在线免费| 中文欧美无线码| 人人澡人人妻人| 91在线精品国自产拍蜜月| 午夜福利网站1000一区二区三区| 97超碰精品成人国产| 国产精品.久久久| 在线精品无人区一区二区三| 热re99久久精品国产66热6| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产极品天堂在线| 国产一区二区在线观看日韩| 精品国产乱码久久久久久小说| 最黄视频免费看| 曰老女人黄片| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲伊人久久精品综合| 十分钟在线观看高清视频www | 麻豆成人av视频| 欧美xxⅹ黑人| av又黄又爽大尺度在线免费看| 各种免费的搞黄视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 九九爱精品视频在线观看| 欧美人与善性xxx| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 人人妻人人看人人澡| 久久久久久久久久成人| 男女边摸边吃奶| 久久久久网色| 亚洲国产精品成人久久小说| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 成人影院久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 99热6这里只有精品| 久久久久久人妻| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美xxxx性猛交bbbb| 观看免费一级毛片| 久久青草综合色| 高清黄色对白视频在线免费看 | 国产成人精品婷婷| 久久国内精品自在自线图片| 观看免费一级毛片| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 午夜福利视频精品| 国产在线一区二区三区精| 亚洲第一区二区三区不卡| 日本色播在线视频| 99热网站在线观看| 午夜激情久久久久久久| 亚洲精品第二区| 午夜老司机福利剧场| 国产熟女午夜一区二区三区 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 午夜老司机福利剧场| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 人妻 亚洲 视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久亚洲精品成人影院| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚州av有码| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产淫片久久久久久久久| 九九爱精品视频在线观看| 麻豆成人av视频| 国产成人一区二区在线| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产乱来视频区| 亚洲,欧美,日韩| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久人人爽人人爽人人片va| 午夜免费鲁丝| 精品人妻熟女av久视频| 久久国内精品自在自线图片| 如何舔出高潮| 亚洲不卡免费看| 久久这里有精品视频免费| 国产精品一区二区在线观看99| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美三级亚洲精品| 国产成人精品无人区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲欧美清纯卡通| 草草在线视频免费看| 久久国产乱子免费精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 免费大片黄手机在线观看| 麻豆成人av视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 又大又黄又爽视频免费| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产淫语在线视频| 色94色欧美一区二区| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲熟女精品中文字幕| 视频区图区小说| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 欧美精品国产亚洲| 少妇精品久久久久久久| 久久久久久久久久成人| 黄色日韩在线| 亚洲av不卡在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲性久久影院| 简卡轻食公司| 久久精品久久久久久久性| 国产精品一区二区在线观看99| 边亲边吃奶的免费视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 两个人的视频大全免费| 六月丁香七月| 熟女av电影| 视频区图区小说| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产在线免费精品| 九色成人免费人妻av| 99热这里只有精品一区| 老司机影院毛片| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 能在线免费看毛片的网站| 性高湖久久久久久久久免费观看| 中国三级夫妇交换| 另类精品久久| 亚洲一区二区三区欧美精品| 精品少妇内射三级| 亚洲性久久影院| 国产高清国产精品国产三级| 久热这里只有精品99| 久久久久久久久大av| 亚洲精品第二区| 国产精品.久久久| 欧美另类一区| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 午夜久久久在线观看| 99热这里只有精品一区| 中文欧美无线码| 最近2019中文字幕mv第一页| 大话2 男鬼变身卡| 国产高清有码在线观看视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 美女国产视频在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 精品卡一卡二卡四卡免费| 欧美人与善性xxx| 日韩强制内射视频| 国产高清三级在线| 精品久久久久久久久亚洲| 久久精品久久久久久久性| 亚洲精品日韩在线中文字幕| av女优亚洲男人天堂| 天堂中文最新版在线下载| 美女内射精品一级片tv| 亚洲,欧美,日韩| 伦理电影免费视频| 国产高清三级在线| 色吧在线观看| 丁香六月天网| 人人妻人人澡人人看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 男女边摸边吃奶| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产精品一区二区在线观看99| 日本爱情动作片www.在线观看| 免费看不卡的av| 亚洲av.av天堂| 欧美成人午夜免费资源| 精华霜和精华液先用哪个| 99热这里只有是精品在线观看| 男女边摸边吃奶| 欧美精品亚洲一区二区| 寂寞人妻少妇视频99o| 99久久综合免费| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产永久视频网站| 六月丁香七月| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 观看美女的网站| 国产伦理片在线播放av一区| 一级二级三级毛片免费看| 中文字幕久久专区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 欧美日韩精品成人综合77777| 丝袜在线中文字幕| 久久精品国产自在天天线| 三上悠亚av全集在线观看 | 热99国产精品久久久久久7| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 成年人免费黄色播放视频 | 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 91精品国产九色| 日韩中字成人| 免费看日本二区| 国产真实伦视频高清在线观看| 免费看日本二区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 最新中文字幕久久久久| av线在线观看网站| 99热国产这里只有精品6| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 日韩一区二区三区影片| 男女啪啪激烈高潮av片| 51国产日韩欧美| .国产精品久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日本免费在线观看一区| 成人无遮挡网站| 日本-黄色视频高清免费观看| 在现免费观看毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产精品久久久久久精品电影小说| 欧美精品一区二区大全| 亚洲国产色片| 天天操日日干夜夜撸| 97精品久久久久久久久久精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲精品日本国产第一区| 欧美三级亚洲精品| 国内精品宾馆在线| av.在线天堂| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 免费观看在线日韩| 国产 精品1| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 人体艺术视频欧美日本| 国产亚洲精品久久久com| 免费观看av网站的网址| 精品人妻熟女av久视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 久久6这里有精品| 99国产精品免费福利视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 男女无遮挡免费网站观看| 国产成人免费观看mmmm| 免费少妇av软件| 国产精品人妻久久久影院|