• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同谷子品種(系)抗旱性鑒定及抗旱機制

    2024-12-31 00:00:00祁東梅王玉芳史慎奎張仁梁周雪峰王春芳
    江蘇農業(yè)科學 2024年19期
    關鍵詞:轉錄組抗旱性谷子

    摘要:對36份適宜在承德地區(qū)種植的谷子品種(系)進行苗期和芽期抗旱性研究。首先,采用PEG-6000模擬干旱處理,根據(jù)種子的萌發(fā)抗旱指數(shù)將36份谷子品種(系)劃分為3級,其中1級抗旱11個,2級抗旱20個,3級抗旱5個。干旱條件下,相對發(fā)芽勢、相對發(fā)芽率、相對胚根長、相對胚芽長與萌發(fā)抗旱指數(shù)呈極顯著正相關,因此這4個指標能作為萌芽期抗旱鑒定的生理指標。其次,在苗期采用反復干旱法,對芽期抗旱組中的5個品種(系)進行鑒定,抗旱性由強到弱依次為朝鮮小黃谷、濟優(yōu)5號、矮協(xié)1號、跑死馬、200732-1。最后,選取抗旱性較強的朝鮮小黃谷和跑死馬苗期材料進行干旱脅迫處理,然后再進行RNA-Seq轉錄組分析。結果顯示,朝鮮小黃谷、跑死馬中分別有 2 467、2 090個差異表達基因(differentially expression gene,DEG),2個品種中同時上調的基因621個,同時下調的基因289個。KEGG聚類分析結果顯示,干旱脅迫處理后,差異性表達基因參與信號轉導、氨基酸的生物合成、脂肪酸代謝、糖代謝、DNA復制修復等生物學過程,通過對轉錄組數(shù)據(jù)的分析,有助于闡明不同品種(系)對響應干旱脅迫的差異表達機理。

    關鍵詞:谷子;芽期;苗期;抗旱性;轉錄組

    中圖分類號:S515.01" 文獻標志碼:A

    文章編號:1002-1302(2024)19-0089-07

    收稿日期:2024-04-10

    基金項目:河北民族師范學院青年基金(編號:QN2019003);河北省高等學??茖W技術研究項目(編號:ZD2022151);承德市基礎研究項目(編號:202305B093)。

    通信作者:祁東梅(1990—),女,河北灤平人,博士,講師,主要從事谷子功能基因方面的研究,E-mail:dmqikaka@163.com;共同第一作者:王玉芳(1985—),女,河北平泉人,博士,講師,主要從事谷子遺傳育種方面的研究,E-mail:496240836@qq.com。

    通信作者:王春芳,博士,副教授,主要從事谷子遺傳育種和功能基因研究。E-mail:wangchunfang18@126.com。

    干旱嚴重是影響農業(yè)發(fā)展的自然災害之一,解決作物的干旱問題,除了可以采用提高水分利用率、減少蒸發(fā)和地表流失等措施外,培育和選擇抗旱作物品種也是重要的措施[1-2。谷子(Setaria italica)是最古老的農作物之一,由狗尾草經人工馴化而來,廣泛種植于中國、印度、日本等國家[3。與其他禾谷類作物相比,谷子具有更加突出的耐干旱、耐貧瘠特點,谷子的抗逆特性使其成為重要的穩(wěn)產作物和救荒作物4。鑒定和篩選出抗旱性強的谷子品種是谷子抗旱研究的前提,也是進行遺傳學研究和生產實踐改良的重要環(huán)節(jié)5。

    抗旱性是指植物通過形態(tài)、生理生化方面的改變,以適應干旱環(huán)境的特性。非生物逆境對不同作物以及同一作物的不同品種之間的影響不同,這主要取決于植物的適應和抵抗能力[3。目前,谷子抗旱鑒定有3個時期,分別為芽期鑒定、苗期鑒定和全生育期鑒定,當這3個時期水分供應不足時,就會嚴重影響谷子產量[5。其中,芽期供水狀況直接與谷子的齊苗、壯苗及最終的產量相關聯(lián),更需要重視,并且芽期抗旱性鑒定具有試驗易操作、耗時短、可重復、條件可控性強特點6-7

    在芽期抗旱性鑒定方面,裴帥帥等在芽期使用18% PEG溶液效果最好,隨著PEG濃度的增加,發(fā)芽勢、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)和抗旱指數(shù)都呈下降趨勢[8。代小冬等通過對20份谷子品種進行干旱脅迫研究,發(fā)現(xiàn)各指標與萌發(fā)抗旱指數(shù)均呈正相關,在進行抗旱性評價時,1級指標是相對發(fā)芽勢和相對發(fā)芽率,2級指標是活力抗旱指數(shù),3級指標是相對胚芽長和相對胚根長[9。劉桂紅等對谷子品種進行芽期抗旱性研究中,除了測量以上指標外,還進行側根數(shù)和胚芽鞘長度進行測量,其研究表明,評價谷子芽期抗旱性,以抗旱指數(shù)為主,可結合其他指標進行綜合評價2

    在苗期抗旱性鑒定中,反復干旱法和PEG模擬干旱脅迫法這2種方法常被用于鑒定谷子苗期的抗旱性[10。秦嶺等采用反復干旱法,把201份谷子根據(jù)幼苗存活率劃分為5個級別[11。山西省農業(yè)科學院也利用該方法把3 761份谷子劃分為5級,并篩選出6份水分利用率高、產量高、適應性廣、耐旱性強的品種,并在實際生產中得到應用[12。此外,也有研究表明,芽期和苗期抗旱鑒定中不一定存在顯著相關性,因此綜合芽期和苗期的抗旱鑒定可使抗旱評價體系更加完善13。

    本研究以36份適宜在承德地區(qū)種植的谷子品種(系)為材料,在芽期采用PEG模擬干旱脅迫,測定萌發(fā)抗旱指數(shù)、相對發(fā)芽率、相對發(fā)芽勢、相對胚根長和相對胚芽長5個指標,篩選出抗旱性強的谷子品種(系)進行苗期抗旱鑒定,對芽期和苗期的研究結果進行綜合比較分析,選出抗旱性較強的谷子品種,并對其中2個品種進行干旱脅迫下的轉錄組分析,篩選抗旱基因,為選育優(yōu)異抗旱品種以及抗旱機制解析提供理論基礎。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    36份供試的谷子品種(系)來源于河北民族師范學院冀北山區(qū)雜糧產業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心,具體谷子品種(系)資源見表1。

    1.2 試驗方法

    試驗地點位于河北民族師范學院雜糧分子生物學與種質資源利用實驗室(40.53°N,117.57°E),芽期和苗期抗旱指標測定時間為2021年12月到2022年5月,種子萌發(fā)和小苗生長于人工氣候柜(28 ℃,16 h光照/8 h黑暗)中進行。

    1.2.1 芽期抗旱性評價

    準備72個經洗滌滅菌后大小一致的培養(yǎng)皿,剪出合適大小和數(shù)量的圓形濾紙,平鋪在培養(yǎng)皿內,每個培養(yǎng)皿內鋪3層濾紙作為發(fā)芽床,其中36個培養(yǎng)皿中注入10 mL 18% PEG-6000 溶液作為試驗組,剩余的培養(yǎng)皿中注入 10 mL 蒸餾水作為對照組,選取每個品種均勻飽滿的種子50粒,一半放入試驗組,一半放入對照組。培養(yǎng)皿加蓋后置于人工氣候箱內,用黑布覆蓋,試驗設3組重復。

    每2 d調查1次發(fā)芽數(shù),持續(xù)至第8天,第4天調查發(fā)芽勢,第7天調查發(fā)芽率,第8天測胚根長和胚芽長。種子的發(fā)芽勢、發(fā)芽率等計算公式如下:

    萌發(fā)指數(shù)(PI)=1.00×nd2+0.75×nd4+0.50×nd6+0.25×nd8;

    萌發(fā)抗旱指數(shù)=試驗組萌發(fā)指數(shù)/對照組萌發(fā)指數(shù);

    相對發(fā)芽勢=試驗組發(fā)芽勢/對照組發(fā)芽勢×100%;

    相對發(fā)芽率=試驗組發(fā)芽率/對照組發(fā)芽率×100%;

    相對胚根長=試驗組胚根長/對照組胚根長×100%;

    相對胚芽長=試驗組胚芽長/對照組胚芽長×100%。

    式中:nd2、nd4、nd6、nd8分別是第2、4、6、8天的種子萌發(fā)率。

    1.2.2 苗期抗旱性評價

    把不同谷子品種(系)播種于盛有營養(yǎng)土的塑料盒中,正常澆水至4葉期。第1次干旱脅迫前澆充足的水,一半谷子品種(系)長到4葉1心時停止?jié)菜斔泄茸悠贩N(系)葉片卷成針狀且上午仍處于萎蔫狀態(tài)、大部分葉片出現(xiàn)不同程度枯死、少數(shù)幼苗出現(xiàn)整株枯死時,進行第1次供水,直到營養(yǎng)土不再吸水為止,以幼苗心葉或分蘗葉轉為鮮綠色為存活標準,48 h后統(tǒng)計存活苗數(shù)。繼續(xù)進行干旱處理,直至出現(xiàn)第1次干旱脅迫后的狀態(tài)進行第2次供水,48 h后調查存活苗數(shù),幼苗存活率為3組生物學重復的平均值。

    幼苗存活率(LA)=(N2/N1+N3/N2)/2×100%。

    式中:N1表示每個品種(系)的幼苗總數(shù);N2表示第1次供水后存活的幼苗數(shù);N3表示第2次供水后存活的幼苗數(shù)。

    1.2.3 轉錄組測序

    待朝鮮小黃谷和跑死馬這2個谷子品種萌發(fā)長至5葉期時,經過干旱脅迫處理后取材并進行RNA提取,采用超微量分光光度計測RNA濃度。測序利用HiSeq 4 000完成,測序試驗和數(shù)據(jù)初步分析由貝瑞和康生物技術股份有限公司完成。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)處理在Excel 2010下進行,相關性分析在SPSS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)下進行。

    2 結果與分析

    2.1 干旱脅迫對谷子萌發(fā)期指標的影響

    2.1.1 干旱脅迫對不同谷子抗旱鑒定指標的影響

    由表2可知,干旱脅迫處理后,不同品種(系)谷子的萌發(fā)抗旱指數(shù)、相對發(fā)芽勢、相對發(fā)芽率、相對胚根長和相對胚芽長都呈現(xiàn)出一定的變化趨勢。36份谷子品種(系)的萌發(fā)抗旱指數(shù)處于0.405~0.954之間,相對發(fā)芽勢處于0.444~1.018之間,相對發(fā)芽率處于0.405~0.992之間,相對胚根長處于0.189~0.927之間,相對胚芽長處于0.093~0.456之間。為更好地了解各品種(系)之間的鑒定關系,對36份谷子品種(系)的5個鑒定指標進行聚類分析,這些品種(系)在每個指標下均可分成3個等級,處于每個等級的具體品種(系)名稱見表2。

    2.1.2 干旱脅迫下抗旱性狀的相關性分析

    為了解芽期各指標(相對發(fā)芽勢、相對發(fā)芽率、相對胚根長、相對胚芽長)對抗旱性的參考價值,將芽期4個指標與萌發(fā)抗旱指數(shù)進行相關性分析,相對發(fā)芽勢與萌發(fā)抗旱指數(shù)相關系數(shù)為0.976**,呈極顯著正相關;相對發(fā)芽率與萌發(fā)抗旱指數(shù)相關系數(shù)為0.960**,呈極顯著正相關;相對胚根長與萌發(fā)抗旱指數(shù)相關系數(shù)為0.621**,呈極顯著正相關;相對胚芽長與萌發(fā)抗旱指數(shù)相關系數(shù)為0.458**,呈極顯著正相關。由圖1可知,對芽期4個抗旱指標進行聚類,可將其劃分為3類,評價谷子芽期抗旱性以萌發(fā)抗旱指數(shù)為前提,首先參考相對發(fā)芽率和相對發(fā)芽勢(r=0.960**,r=0.976**),其次參考相對胚根長(r=0.621**),最后參考相對胚芽長(r=0.458**)。

    2.2 干旱脅迫對苗期存活率的影響

    種子萌發(fā)抗旱指數(shù)是評價種子芽期抗旱性的主要指標[14。選取芽期第1級抗旱品種(系)中抗旱指數(shù)排名前五的谷子品種(系)分別為跑死馬、朝鮮小黃谷、濟優(yōu)5號、200732-1、矮協(xié)1號,對其進行苗期抗旱性鑒定,谷子品種(系)在苗期采用反復干旱處理后進行存活率統(tǒng)計。統(tǒng)計結果(表3)顯示,朝鮮小黃谷的存活率最高,抗旱性較強,200732-1存活率最低,抗旱性較弱。將芽期萌發(fā)抗旱指數(shù)與苗期存活率之間進行相關性分析,相關系數(shù)為 -0.026,說明兩者之間沒有相關性。

    2.3 干旱脅迫前后差異表達譜分析

    為探究谷子抗旱的分子機制,本研究選取芽期和苗期抗旱性較強的2個品種朝鮮小黃谷和跑死馬在苗期進行干旱脅迫,干旱脅迫處理后進行轉錄組測序分析,結果見圖2、圖3。由圖2-A可知,干旱脅迫后,朝鮮小黃谷中有2 467個差異性變化的基因,其中上調基因1 340個,下調基因1 127個。為進一步明確朝鮮小黃谷經過干旱處理后的差異表達代謝通路,根據(jù)注釋結果進行KEGG富集分析。由圖2-B可知,處理后上調基因的富集通路主要有半胱氨酸和蛋氨酸代謝,纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解,植物激素信號轉導,糖酵解、糖異生途徑,丙酸代謝及脂肪酸代謝。下調基因主要富集在DNA復制、苯丙素生物合成、同源重組、錯配修復、核苷酸切除修復。采用層次聚類方法調查DEGs的整體表達模式,結果(圖2-C)顯示,與對照組相比,試驗組中更多的基因表現(xiàn)出上調,這表明干旱脅迫誘導了基因表達。

    從跑死馬的轉錄組測序結果(圖3)可知,跑死馬中差異性變化的基因2 090個,上調基因890個,下調基因1 200個。其KEGG富集分析顯示,干旱脅迫后跑死馬中的上調基因主要富集在植物激素信號轉導、精氨酸和脯氨酸的代謝、亮氨酸和異亮氨酸的降解,下調基因主要富集在光合作用、光合固碳作用、卟啉和葉綠素代謝、苯丙素生物合成。熱圖聚類分析結果顯示,干旱處理后,與對照組相比,試驗組中更多的基因表現(xiàn)出下調。

    對2個品種中同時發(fā)生變化的基因進行分析,結果見圖4,2個品種中同時上調的基因621個,同時下調的基因289個。對2個品種中下調和上調表達的差異基因以Plt;0.05為閾值進行KEGG富集分析,得到這些基因的通路顯著富集結果,2個品種中上調基因富集的通路主要是植物激素信號轉導,苯丙素生物合成 纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解,而下調基因富集的通路主要是苯丙素生物合成、卟啉和葉綠素代謝、光合作用-天線蛋白等。同時,從2個品種共同變化的基因中選出與抗旱通路相關的一些基因并進行熱圖分析,結果(圖4-C)顯示,這些基因在2個突變體中變化比較一致。

    3 討論

    植物表現(xiàn)出的性狀是基因和環(huán)境綜合作用的結果,而抗旱性是受多基因、多因素控制的數(shù)量性狀,是一個復雜的綜合特性,它作用于植物的各個生長發(fā)育階段,并且最終決定生物的性狀[15-16。種子萌發(fā)指標中的相對發(fā)芽勢、抗旱指數(shù)和發(fā)芽指數(shù)在鑒定不同物種抗旱性上被廣泛應用,能夠反映植物種子的抗旱性水平17-18。本研究選用18% PEG-6000對谷子品種(系)進行干旱脅迫,該濃度能夠區(qū)分各品種(系)之間的差異,也有利于根長和芽長的測量,這與裴帥帥等的研究結果[8相近。本研究中鑒定所用的抗旱指標相對發(fā)芽勢、相對發(fā)芽率、相對胚根長、相對胚芽長與萌發(fā)抗旱指數(shù)存在極顯著的正相關,因此這些指標在一定程度上均能反映谷子的抗旱性,這和劉桂紅等的研究結果[2,9存在一定的一致性。綜合表現(xiàn)可以得出,在選擇抗旱谷子品種(系)時,當萌發(fā)抗旱指數(shù)相近時,可以依次參考1、2、3級指標,最終選出抗旱性較好的谷子品種(系)。

    在苗期抗旱鑒定中,選取芽期第1級抗旱排名前五的谷子品種(系)分別為跑死馬、朝鮮小黃谷、濟優(yōu)5號、200732-1和矮協(xié)1號,這5個品種(系)的萌發(fā)抗旱指數(shù)分別為0.954、0.902、0.879、0.876和0.850。利用反復干旱法測定幼苗存活率是進行苗期抗旱性鑒定,結果表明,芽期的萌發(fā)抗旱指數(shù)與苗期的存活率之間相關性不顯著,這可能是由于植物在不同的生長發(fā)育階段有不同的抗旱性表現(xiàn),干旱脅迫下的抗旱性機理也可能不同[4,13

    干旱脅迫處理后朝鮮小黃谷和跑死馬中發(fā)生差異性變化的基因很多,而KEGG分析顯示,朝鮮小黃谷中上調基因富集的通路要多于跑死馬,說明干旱脅迫下朝鮮小黃谷中相應物質的積累更為明顯,基因上調對朝鮮小黃合和跑死馬的抗旱性的增強可能具有一定的作用。而下調基因富集的通路在2個品種之間的差異較大,可能是因為品種特性的不同,品種自身的基因在影響并決定品種特性中具有重要作用[19。此外,2個品種中存在同時上調和下調的基因,后續(xù)筆者將重點關注這些基因在谷子響應干旱中的機制研究。

    4 結論

    芽期抗旱鑒定中,通過對適宜在承德地區(qū)種植的36個谷子品種(系)的萌發(fā)抗旱指數(shù)進行聚類分析,將谷子品種(系)劃分為3級,分別是1級抗旱、2級中抗旱、3級不抗旱??购抵笜讼鄬Πl(fā)芽勢、相對發(fā)芽率、相對胚根長、相對胚芽長與萌發(fā)抗旱指數(shù)呈極顯著正相關,因此評價谷子芽期抗旱性,1級指標是相對發(fā)芽率和相對發(fā)芽勢,2級指標是相對胚根長,3級指標是相對胚芽長,其前提以萌發(fā)抗旱指數(shù)為主。苗期抗旱鑒定的5個品種(系)抗旱性由強到弱依次為朝鮮小黃谷、濟優(yōu)5號、矮協(xié)1號、跑死馬、200732-1。轉錄組分析結果顯示,這2個品種在干旱脅迫處理后均有差異性表達的基因,且這些差異基因參與了激素的信號轉導等途徑中。

    參考文獻:

    [1]任小燕,段運平,劉守渠,等. 不同玉米品種萌發(fā)期和苗期抗旱性鑒定與評價[J]. 種子,2020,39(11):75-80.

    [2]劉桂紅,王 玨,杜金哲,等. 谷子萌芽期抗旱性鑒定研究[J]. 中國農學通報,2013,29(3):86-91.

    [3]張文英,黃建明,尉文彬. 我國谷子抗旱性研究進展[J]. 安徽農業(yè)科學,2013,41(4):1469-1470.

    [4]李紅英,程鴻燕,郭 昱,等. 谷子抗旱機制研究進展[J]. 山西農業(yè)大學學報(自然科學版),2018,38(1):6-10.

    [5]崔紀菡,范佳興,李順國,等. 谷子抗旱性鑒定研究進展[J]. 東北農業(yè)大學學報,2017,48(1):89-96.

    [6]李培英,孫宗玖,阿不來提. PEG模擬干旱脅迫下29份偃麥草種質種子萌發(fā)期抗旱性評價[J]. 中國草地學報,2010,32(1):32-39.

    [7]鞠 樂,齊軍倉,成祿艷,等. 大麥種子萌發(fā)期對干旱脅迫的生理響應及其抗旱性評價[J]. 西南農業(yè)學報,2013,26(1):93-98.

    [8]裴帥帥,尹美強,溫銀元,等. 不同品種谷子種子萌發(fā)期對干旱脅迫的生理響應及其抗旱性評價[J]. 核農學報,2014,28(10):1897-1904.

    [9]代小冬,楊育峰,朱燦燦,等. 谷子萌芽期對干旱脅迫的響應及抗旱性評價[J]. 華北農學報,2015,30(4):139-144.

    [10]孫彩霞,沈秀瑛. 作物抗旱性鑒定指標及數(shù)量分析方法的研究進展[J]. 中國農學通報,2002,18(1):49-51.

    [11]秦 嶺,楊延兵,陳二影,等. 不同生態(tài)區(qū)主要育成谷子品種苗期抗旱性鑒定[J]. 山東農業(yè)科學,2016,48(6):28-31.

    [12]溫琪汾,劉潤堂,王 綸,等. 山西省谷子品種資源的抗旱性和豐產性研究[J]. 山西農業(yè)大學學報(自然科學版),2004,24(3):224-226.

    [13]邵歡歡,陸 平,史夢莎,等. 黍稷芽、苗期抗旱性評價及抗旱資源鑒定[J]. 分子植物育種,2021,19(4):1284-1296.

    [14]王振華,劉 鑫,余愛麗,等. 不同谷子品種萌發(fā)期對干旱脅迫生理響應的變化及抗旱指標篩選[J]. 中國農業(yè)科技導報,2020,22(12):39-49.

    [15]王志泰,馬 瑞,馬彥軍,等. 利用隸屬函數(shù)法分析胡枝子抗旱性[J]. 干旱區(qū)資源與環(huán)境,2013,27(9):119-123.

    [16]Zhang H,Liu S J,Ren T M,et al. Crucial abiotic stress regulatory network of NF-Y transcription factor in plants[J]. International Journal of Molecular Sciences,2023,24(5):4426.

    [17]王俊娟,葉武威,王德龍,等. PEG脅迫條件下41份陸地棉種質資源萌發(fā)特性研究及其抗旱性綜合評價[J]. 植物遺傳資源學報,2011,12(6):840-846.

    [18]伏兵哲,蘭 劍,李小偉,等. PEG-6000干旱脅迫對16個苜蓿品種種子萌發(fā)的影響[J]. 種子,2012,31(4):10-14.

    [19]潘教文,李 臻,王慶國,等. NaCl處理谷子萌發(fā)期種子的轉錄組學分析[J]. 中國農業(yè)科學,2019,52(22):3964-3975.

    猜你喜歡
    轉錄組抗旱性谷子
    打谷子
    當代陜西(2021年21期)2022-01-19 02:00:32
    不同光質對黃瓜幼苗抗旱性的影響
    基于轉錄組測序的山茱萸次生代謝生物合成相關基因的挖掘
    金釵石斛轉錄組SSR位點信息分析
    人參屬藥用植物轉錄組研究進展
    基于稱重法的煙草伸根期抗旱性鑒定
    樹木抗旱性及抗旱造林技術研究綜述
    山西農經(2015年7期)2015-07-10 15:00:57
    大豆轉錄組測序研究進展綜述
    谷子栽培技術
    HOW TO CORRECT GRAMMATICAL MISTAKES OF CHINESE ESL STUDENTS IN THEIR COMPOSITONS
    少妇的逼水好多| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲国产色片| 国产成人精品一,二区| 99久久九九国产精品国产免费| 国产精品偷伦视频观看了| 国产精品三级大全| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲av成人精品一区久久| 三级经典国产精品| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美少妇被猛烈插入视频| av在线天堂中文字幕| 少妇的逼水好多| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲欧美清纯卡通| 久久韩国三级中文字幕| 韩国高清视频一区二区三区| 国产91av在线免费观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产高清三级在线| 波多野结衣巨乳人妻| 成人亚洲精品一区在线观看 | 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 嫩草影院新地址| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产在线一区二区三区精| 一级av片app| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产日韩欧美在线精品| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产免费福利视频在线观看| 国产精品成人在线| 久久久久久久久大av| 免费电影在线观看免费观看| 国精品久久久久久国模美| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲国产色片| 婷婷色av中文字幕| 国产综合懂色| 日韩成人伦理影院| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲成色77777| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 看非洲黑人一级黄片| www.色视频.com| 深夜a级毛片| 视频区图区小说| 久久久精品94久久精品| 久久精品久久精品一区二区三区| 嫩草影院入口| 好男人在线观看高清免费视频| 婷婷色av中文字幕| 精品久久久噜噜| 国产毛片a区久久久久| 久久久久久久久久成人| 欧美日韩综合久久久久久| 久久99精品国语久久久| 国产成年人精品一区二区| 色视频在线一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 简卡轻食公司| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久欧美国产精品| 国产高清不卡午夜福利| 久久久午夜欧美精品| 日韩伦理黄色片| 国产精品人妻久久久影院| 超碰av人人做人人爽久久| 97热精品久久久久久| 99热全是精品| 内地一区二区视频在线| 午夜视频国产福利| 99精国产麻豆久久婷婷| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产一区二区三区av在线| 啦啦啦在线观看免费高清www| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 日韩免费高清中文字幕av| 51国产日韩欧美| 内地一区二区视频在线| 97超碰精品成人国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲综合色惰| 国产高清有码在线观看视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 伊人久久国产一区二区| h日本视频在线播放| 女人久久www免费人成看片| 国产精品一区二区性色av| 久久精品国产自在天天线| 国产精品三级大全| 丰满少妇做爰视频| a级毛色黄片| 日韩视频在线欧美| 欧美最新免费一区二区三区| 国产精品福利在线免费观看| 精品久久久久久久久av| 午夜福利视频精品| 男人和女人高潮做爰伦理| 又爽又黄无遮挡网站| 成人综合一区亚洲| 女人久久www免费人成看片| 亚洲av国产av综合av卡| 我的女老师完整版在线观看| 日本av手机在线免费观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 在线观看人妻少妇| 日本熟妇午夜| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产成人免费观看mmmm| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲不卡免费看| 人妻一区二区av| 1000部很黄的大片| 一区二区av电影网| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 激情 狠狠 欧美| 毛片女人毛片| 久热久热在线精品观看| 成人午夜精彩视频在线观看| av天堂中文字幕网| 美女主播在线视频| 亚洲国产欧美人成| 国产亚洲精品久久久com| 国产亚洲一区二区精品| av专区在线播放| av.在线天堂| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久ye,这里只有精品| 成年人午夜在线观看视频| 老女人水多毛片| 国产探花极品一区二区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| www.色视频.com| 国产成人免费无遮挡视频| 丝袜脚勾引网站| 国产高清三级在线| av福利片在线观看| 日韩伦理黄色片| 免费大片18禁| 秋霞在线观看毛片| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| xxx大片免费视频| 日韩欧美精品免费久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 尾随美女入室| 日韩人妻高清精品专区| 黑人高潮一二区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 香蕉精品网在线| 日韩成人伦理影院| 亚洲av国产av综合av卡| 午夜激情久久久久久久| 亚洲国产最新在线播放| 国产精品伦人一区二区| 免费看不卡的av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产成年人精品一区二区| 午夜爱爱视频在线播放| 国产又色又爽无遮挡免| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日本午夜av视频| 亚洲国产欧美人成| 亚洲国产精品成人久久小说| 免费少妇av软件| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 亚洲四区av| 国产一级毛片在线| 亚洲av成人精品一区久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品av视频在线免费观看| 综合色丁香网| 国产乱来视频区| 久久精品国产a三级三级三级| 色综合色国产| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲国产色片| 免费黄网站久久成人精品| 色综合色国产| 又大又黄又爽视频免费| 国产亚洲最大av| 日韩一区二区三区影片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费观看在线日韩| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲国产精品成人久久小说| 男女那种视频在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 麻豆成人av视频| 制服丝袜香蕉在线| 久久精品国产自在天天线| 成人漫画全彩无遮挡| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日韩成人伦理影院| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 色综合色国产| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲国产色片| 97在线人人人人妻| 国产精品.久久久| 国产成人91sexporn| 在现免费观看毛片| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲人成网站高清观看| 九九在线视频观看精品| 国产精品一及| 18禁在线无遮挡免费观看视频| videos熟女内射| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 一区二区av电影网| 91久久精品国产一区二区成人| 久久精品国产a三级三级三级| 在线播放无遮挡| 午夜福利高清视频| 亚洲欧洲日产国产| 最近的中文字幕免费完整| 日韩视频在线欧美| 国产精品一区二区性色av| 亚洲美女视频黄频| 久久精品久久精品一区二区三区| 免费黄网站久久成人精品| 黄色配什么色好看| 久久99蜜桃精品久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 女人被狂操c到高潮| 人妻一区二区av| 婷婷色麻豆天堂久久| 精品久久国产蜜桃| 热99国产精品久久久久久7| 日韩一区二区三区影片| 久久久久久久久久久丰满| 搞女人的毛片| 亚洲精品视频女| 久久久久久国产a免费观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 亚洲久久久久久中文字幕| 岛国毛片在线播放| 国内揄拍国产精品人妻在线| 色播亚洲综合网| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产在视频线精品| 成人综合一区亚洲| 免费看光身美女| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲不卡免费看| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲av国产av综合av卡| 丰满乱子伦码专区| 午夜激情福利司机影院| 国产毛片在线视频| 国产精品偷伦视频观看了| 一级a做视频免费观看| 久久精品夜色国产| 久久久欧美国产精品| 久久精品人妻少妇| 一级a做视频免费观看| 成年人午夜在线观看视频| 久久这里有精品视频免费| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 高清欧美精品videossex| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 观看美女的网站| 嘟嘟电影网在线观看| 女人被狂操c到高潮| av在线天堂中文字幕| 熟妇人妻不卡中文字幕| 九九在线视频观看精品| 少妇的逼好多水| 久久精品国产亚洲网站| 九草在线视频观看| 97超视频在线观看视频| 亚洲成人久久爱视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日本一二三区视频观看| 777米奇影视久久| 最后的刺客免费高清国语| 国产日韩欧美在线精品| 久久久亚洲精品成人影院| 久久ye,这里只有精品| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美日本视频| 最新中文字幕久久久久| 欧美激情在线99| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲成色77777| 亚洲av免费在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产高清三级在线| 亚洲av二区三区四区| 欧美日韩视频精品一区| 国产av国产精品国产| 涩涩av久久男人的天堂| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产精品一区www在线观看| av专区在线播放| 少妇丰满av| 禁无遮挡网站| a级一级毛片免费在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 听说在线观看完整版免费高清| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品精品国产色婷婷| 成人亚洲精品av一区二区| 国产熟女欧美一区二区| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久久午夜欧美精品| 精品一区在线观看国产| 免费看av在线观看网站| 伦理电影大哥的女人| 大码成人一级视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 岛国毛片在线播放| 一级片'在线观看视频| 青春草国产在线视频| 国产精品一区二区在线观看99| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久久色成人| 特级一级黄色大片| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 在现免费观看毛片| 亚洲av成人精品一区久久| 22中文网久久字幕| 亚洲美女视频黄频| 最后的刺客免费高清国语| 新久久久久国产一级毛片| 国产午夜福利久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产69精品久久久久777片| 色网站视频免费| 午夜激情久久久久久久| 成人二区视频| 九九在线视频观看精品| 成人特级av手机在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 在线看a的网站| 偷拍熟女少妇极品色| 新久久久久国产一级毛片| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 在线观看一区二区三区激情| 国产黄色免费在线视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 91狼人影院| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 国产精品蜜桃在线观看| 看免费成人av毛片| 一本色道久久久久久精品综合| 免费观看的影片在线观看| 天堂网av新在线| 亚洲天堂av无毛| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产精品.久久久| 免费观看无遮挡的男女| 免费av不卡在线播放| 好男人视频免费观看在线| 女人久久www免费人成看片| 91久久精品国产一区二区成人| 黄色配什么色好看| 好男人视频免费观看在线| 亚洲成人av在线免费| 美女内射精品一级片tv| 国产高清不卡午夜福利| 99久国产av精品国产电影| 国产午夜福利久久久久久| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲av日韩在线播放| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲av日韩在线播放| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲成色77777| 亚洲高清免费不卡视频| 精品熟女少妇av免费看| 乱系列少妇在线播放| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 99热全是精品| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲精品国产av蜜桃| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 在线观看人妻少妇| 九色成人免费人妻av| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲最大成人av| 熟女av电影| 免费大片18禁| 亚洲色图av天堂| 欧美成人一区二区免费高清观看| 成年女人看的毛片在线观看| 水蜜桃什么品种好| 黄片无遮挡物在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲av.av天堂| 在线观看一区二区三区激情| 一级毛片电影观看| 内射极品少妇av片p| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 伦理电影大哥的女人| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 五月天丁香电影| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 亚洲美女视频黄频| 99热这里只有是精品50| 国国产精品蜜臀av免费| 欧美激情国产日韩精品一区| av卡一久久| 在线天堂最新版资源| 国产老妇伦熟女老妇高清| 男女啪啪激烈高潮av片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 在线观看一区二区三区| 免费黄网站久久成人精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产精品人妻久久久影院| 国产伦精品一区二区三区四那| 舔av片在线| 国产欧美亚洲国产| 日韩免费高清中文字幕av| 永久免费av网站大全| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 街头女战士在线观看网站| 中文字幕免费在线视频6| 高清日韩中文字幕在线| 久久久精品免费免费高清| 嫩草影院精品99| 看免费成人av毛片| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲精品视频女| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 七月丁香在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看 | 在线观看三级黄色| 18+在线观看网站| 免费观看性生交大片5| 国产黄片美女视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲av成人精品一二三区| 99热这里只有是精品50| 在线观看国产h片| 岛国毛片在线播放| 亚洲最大成人手机在线| 婷婷色麻豆天堂久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚州av有码| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产高清有码在线观看视频| 成年女人看的毛片在线观看| 人妻系列 视频| 在线观看一区二区三区| 成人综合一区亚洲| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲av二区三区四区| 五月天丁香电影| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 内地一区二区视频在线| 久久久国产一区二区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产成人免费无遮挡视频| 免费观看在线日韩| 国产精品一二三区在线看| 亚洲av成人精品一二三区| 黄色欧美视频在线观看| 色视频在线一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 国产美女午夜福利| 99热国产这里只有精品6| 国产成人精品一,二区| 久久影院123| 成人亚洲精品一区在线观看 | 成人鲁丝片一二三区免费| www.色视频.com| 美女被艹到高潮喷水动态| 精品少妇久久久久久888优播| 国产老妇女一区| 国产成人aa在线观看| 日韩中字成人| 欧美97在线视频| 综合色丁香网| 国产午夜福利久久久久久| 青春草国产在线视频| 亚洲怡红院男人天堂| 99久久精品一区二区三区| 国产av国产精品国产| 国产成人精品久久久久久| 色视频www国产| 亚洲国产精品专区欧美| 人人妻人人看人人澡| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 男人狂女人下面高潮的视频| 各种免费的搞黄视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 97热精品久久久久久| 亚洲精品亚洲一区二区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 久久久久久国产a免费观看| 岛国毛片在线播放| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 一区二区av电影网| 波多野结衣巨乳人妻| 一个人观看的视频www高清免费观看| 我的老师免费观看完整版| 美女主播在线视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产有黄有色有爽视频| 性色av一级| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产精品久久久久久精品电影| 赤兔流量卡办理| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产精品蜜桃在线观看| 高清av免费在线| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 国产免费又黄又爽又色| 最近中文字幕高清免费大全6| 日本黄大片高清| 久热久热在线精品观看| 国产av不卡久久| 黄色一级大片看看| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 午夜免费观看性视频| 国产免费视频播放在线视频| 日韩av不卡免费在线播放| 99久久人妻综合| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 久久精品国产亚洲网站| 一级毛片 在线播放| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲av福利一区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 黄色视频在线播放观看不卡| 日本wwww免费看| 97超碰精品成人国产| 国产在视频线精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 中文字幕久久专区| 丝袜美腿在线中文| 亚洲av中文av极速乱| 乱码一卡2卡4卡精品| 午夜免费鲁丝| 我的老师免费观看完整版| 久久久久久久国产电影| 精品一区在线观看国产| 熟女电影av网| 嘟嘟电影网在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 少妇 在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久久久久久成人| 麻豆成人午夜福利视频| 日本wwww免费看| 尾随美女入室| 亚洲va在线va天堂va国产| 日韩欧美 国产精品| 麻豆乱淫一区二区| 久久国产乱子免费精品| 婷婷色av中文字幕| 国产一区二区在线观看日韩| av线在线观看网站| 日韩三级伦理在线观看| 国产成人精品一,二区| 国产黄a三级三级三级人| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 一级二级三级毛片免费看| av在线亚洲专区| 最近中文字幕高清免费大全6| 老司机影院毛片| 男人和女人高潮做爰伦理| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日本黄色片子视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲精品色激情综合| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 街头女战士在线观看网站| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美精品国产亚洲| 日韩成人伦理影院| 国产精品久久久久久av不卡| 国产免费福利视频在线观看| 免费在线观看成人毛片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日本一本二区三区精品| 久久久久久久午夜电影| 国产欧美亚洲国产| 久久久色成人|