液相色譜—原子熒光光譜聯(lián)用法測定水產(chǎn)品中的甲基汞

摘 要：為改進檢測水產(chǎn)品中甲基汞的方法，用鹽酸溶液（5 mol/L）室溫下超聲水浴樣品，離心后用氫氧化鈉溶液（6 mol/L）中和，再用L-半胱氨酸溶液定容，經(jīng)有機膜過濾，用C18色譜柱分離并檢測。結(jié)果表明：甲基汞在0～50 μg/L的濃度范圍內(nèi)，色譜峰面積和濃度呈良好的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)為0.999 5），添加3個不同濃度的甲基汞標準液，樣品的加標回收率為77.2%～102.4%，相對標準偏差為5.4%～12.3%。該方法檢測步驟簡便、效率高、回收率也符合要求，可用于水產(chǎn)品中甲基汞的分析。

關(guān)鍵詞：原子熒光；液相色譜；甲基汞

中圖分類號：TS254.7 文獻標志碼：B 文章編號：1674-7909（2024）7-154-4

DOI：10.19345/j.cnki.1674-7909.2024.07.035

0 引言

水產(chǎn)品蛋白質(zhì)豐富、脂肪含量低，同時還富含維生素、無機鹽等人體必需營養(yǎng)物質(zhì)，具有獨特的營養(yǎng)價值。盡管水產(chǎn)品可以滿足人們的營養(yǎng)物質(zhì)需求，但其如果含有重金屬，則會對人類健康造成一定的威脅。汞就是一種被重點管控的重金屬。甲基汞含有劇毒［1］，能夠?qū)θ梭w的神經(jīng)系統(tǒng)造成嚴重傷害，甚至會誘發(fā)癌癥［2-4］。金槍魚作為食物鏈頂端的捕食者，會通過捕食其他海洋生物而攝入甲基汞。這些被捕食的海洋生物如果體內(nèi)含有較高的甲基汞，那么金槍魚體內(nèi)的甲基汞含量也會相應增加。

目前，對水產(chǎn)品中甲基汞的檢測主要采用聯(lián)用技術(shù)，如液相色譜—電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法［5］、氣相色譜—原子熒光聯(lián)用法［6］、氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法［7］、液相色譜—原子熒光聯(lián)用法［8］等。液相色譜—電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法［5］的優(yōu)點是靈敏度高、檢出限低，但是儀器成本過高。氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法［7］靈敏度高，但需要四乙基硼化鈉（NaBEt4）等試劑進行衍生，操作復雜，且NaBEt4 室溫下遇到含有機物的蒸汽易發(fā)生燃燒或爆炸，危險性高。采用液相色譜—原子熒光光譜聯(lián)用法檢測，線性方程穩(wěn)定、檢出限低、穩(wěn)定性高。此試驗通過對試樣提取的處理方法進行研究，建立適合的樣品提取優(yōu)化條件，改進提出適用于測定水產(chǎn)品中甲基汞的液相色譜—原子熒光光譜聯(lián)用法，為今后水產(chǎn)品中甲基汞檢測提供方法依據(jù)。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器設(shè)備

BSA-100液相色譜—原子熒光光譜聯(lián)用儀，北京寶德儀器有限公司；PX223ZH/E千分之一電子天平，奧豪斯儀器（常州）有限公司；TGL16M冷凍離心機，湖南凱達科學儀器有限公司；SK3300H超聲波清洗器，上?？茖С晝x器有限公司；MS3basic漩渦混合器，IKA。

1.1.2 材料與試劑

鹽酸為優(yōu)級純，L-半胱氨酸、乙酸銨、硼氫化鈉、氫氧化鈉為分析純，甲醇為色譜純，氯化甲基汞標準儲備溶液［1 000 mg/L，上海安普璀世標準技術(shù)服務有限公司，冷凍（-20±5）℃，置于陰涼處貯存］。

1.2 儀器條件

1.2.1 原子熒光檢測條件

載流為濃度10%的鹽酸溶液，還原劑為2 g/L的硼氫化鈉溶液，負高壓為280 V，屏蔽氣的流量為900 mL/min，載氣的流量為400 mL/min，主陰極電流為30 mA，輔陰極電流為0 mA，蠕動泵速為35 r/min。

1.2.2 液相色譜檢測條件

C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相為（3%甲醇+0.04 mol/L乙酸銨+1 g/L L-半胱氨酸），進樣體積為100 μL，流速為1.0 mL/min。

1.2.3 甲基汞標準溶液的曲線配制繪制

準確吸取氯化甲基汞標準儲備液1.0 mL，用流動相定容至1 000 mL，得到1.0 mg/L甲基汞標準使用液。分別準確吸取不同體積的甲基汞標準使用液，用流動相定容至10 mL的容量瓶中，以甲基汞的峰面積為縱坐標，甲基汞的濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.3 樣品前處理

稱取樣品1.0 g（精確到0.001 g），放置于50 mL塑料離心管中，加入10 mL的5 mol/L鹽酸溶液，于旋渦混合器中混合，水浴超聲60 min，中途搖勻4次。超聲結(jié)束后，放置于冷凍離心機，8 000 r/min離心15 min。離心結(jié)束后準確吸取上清液2.0 mL放置于15 mL塑料離心管中，用6 mol/L的氫氧化鈉溶液進行逐滴加入，測得pH值為3～7時，加入L-半胱氨酸溶液0.1 mL，用水定容至5 mL，待用。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理條件的優(yōu)化

樣品前處理的目的是提取出目標化合物。此試驗采用GB5009.17—2021《食品安全國家標準 食品中總汞及有機汞的測定》的第二篇第一法檢測［6］；測定過程中發(fā)現(xiàn)，滴加0.1%的甲基橙溶液作為指示劑，溶液由紅色變?yōu)槌壬珪r，測得的pH值均超過7.0。此試驗用到的色譜柱Venusi MP系列推薦的pH值范圍為2.0～6.0，當樣品溶液為呈堿性時，對色譜柱不利，影響使用壽命［8］。當逐一滴加6 mol/L的氫氧化鈉溶液時，酸堿中和產(chǎn)生的熱量會使甲基汞揮發(fā)，檢測數(shù)值會偏低；再者樣品溶液溫度較高，無法第一時間測得pH值，使得試驗操作煩瑣耗時，降低試驗效率。

因此，此試驗需要在冰水浴中進行pH值調(diào)節(jié)［9］，以避免放熱反應對試驗數(shù)據(jù)的影響，且能提高試驗效率。當用0.1%的甲基橙溶液作為指示劑，溶液由紅色變?yōu)槌壬珪r，往往pH值會超過所要求的范圍，因此可以在滴定到終點時，用50 μL的移液槍緩慢貼管壁滴加6 mol/L的氫氧化鈉溶液［10］，當pH值超過7.0時，也可以用微量的5 mol/L的鹽酸溶液進行中和，使測得的pH值在5.0～6.5。在測定pH值時，pH計探頭會殘留樣品溶液，需用水沖洗探頭（控制在1 mL左右，以保證樣品溶液的準確性）。

2.2 方法驗證

用流動相將甲基汞標準使用液稀釋成濃度為0.0、1.0、5.0、10.0、30.0、50.0 μg/L的標準系列溶液。甲基汞的含量與峰面積呈線性關(guān)系，以色譜峰面積為縱坐標，甲基汞濃度為橫坐標，繪制曲線，計算相關(guān)系數(shù)，見表1、圖1、圖2。

2.3 樣品測定

用該方法對不同種類、地域的水產(chǎn)品進行檢測，包括對蝦、貽貝、章魚、青花魚、金槍魚、安康魚、鯧魚、秘魯魷魚等8種水產(chǎn)品。樣品均取可食部分，勻漿后冷凍保存?zhèn)溆?。樣品中甲基汞檢出情況見表2。

2.4 加標回收率及精密度

此次試驗采用金槍魚樣品進行加標試驗，添加3個不同濃度的甲基汞標準液，每個濃度平行測定6次，測定加標回收率。試驗結(jié)果表明，回收率的結(jié)果在77.2%～102.4%，相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）的結(jié)果在5.4%～12.3%，見表3。

3 結(jié)論

此試驗采用GB 5009.17—2021《食品安全國家標準 食品中總汞及有機汞的測定》的第二篇第一法檢測水產(chǎn)品中的甲基汞含量，并對試驗條件進行優(yōu)化，精密度和回收率均符合要求。此方法樣品前處理過程簡單，利用寶德儀器公司開發(fā)的BSA-100液相色譜—原子熒光光譜聯(lián)用儀進行處理。該儀器操作簡單并且運行成本低，能提供簡便可靠的技術(shù)手段，可為水產(chǎn)品質(zhì)量安全提供技術(shù)支持。

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（欄目編輯：李 菡）

作者簡介：厲君悄（1989—），女，本科，助理工程師，研究方向：水產(chǎn)品安全（通信作者）。