清肺飲治療急性咽炎模型大鼠的藥效及代謝組學(xué)研究

雷燕莉 唐焓嫣 時(shí)政 劉日慧 鄧夢(mèng)雨 吳磊 劉濤

摘要：目的 研究清肺飲對(duì)急性咽炎大鼠的藥效作用，闡明其作用機(jī)制。方法 在清肺飲治療氨水誘導(dǎo)的急性咽炎大鼠藥效試驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過(guò)UPLC-Q-TOF-MS代謝組學(xué)技術(shù)，結(jié)合多元數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)篩選清肺飲治療氨水誘導(dǎo)的急性咽炎大鼠的潛在生物標(biāo)志物，進(jìn)一步分析相關(guān)代謝通路。結(jié)果 血常規(guī)、血清炎性因子、病理切片結(jié)果均表明清肺飲對(duì)于氨水誘導(dǎo)的急性咽炎大鼠具有良好的治療效果。血清代謝組學(xué)共篩選出 10個(gè)清肺飲治療急性咽炎的內(nèi)源性生物標(biāo)志物，可能通過(guò)?；撬岷痛闻；撬岽x，初級(jí)膽汁酸生物合成，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解和嘧啶代謝4條重要代謝通路發(fā)揮藥效。結(jié)論 清肺飲具有治療急性咽炎的作用，可能的機(jī)制為調(diào)控?；撬岷痛闻；撬岽x，初級(jí)膽汁酸生物合成，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解和嘧啶代謝4條重要代謝通路發(fā)揮藥效，為臨床進(jìn)一步應(yīng)用該藥提供參考。

關(guān)鍵詞：急性咽炎；清肺飲；潛在生物標(biāo)志物；代謝通路

中圖分類(lèi)號(hào)：R285文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Pharmacodynamics and metabonomics of Qingfei decoction in treating acute pharyngitis model rats

Lei Yanli1， Tang Hanyan1， Shi Zheng2， Liu Rihui1， Deng Mengyu1， ?Wu Lei1， and Liu Tao3，4

（1 College of Pharmacy， Chengdu University， Chengdu 610106; 2 Affiliated Hospital of Chengdu University， Chengdu 610081;

3 College of Food and Bioengineering， Chengdu University， Chengdu 610106; 4 Engineering Technology Research Center of Antiviral Traditional Chinese Medicine Industrialization， ?Chengdu 610106）

Abstract Objective To study the pharmacodynamic effect of Qingfei decoction on acute pharyngitis rats and clarify its mechanism. Methods Based on the efficacy test of Qingfei decoction in treating acute pharyngitis induced by ammonia water in rats， the potential biomarkers of Qingfei decoction in treating acute pharyngitis induced by ammonia water in rats were screened by UPLC-Q-TOF-MS metabonomics technology combined with multivariate data statistics， and the related metabolic pathways were further analyzed. Results The results of the blood routine， serum inflammatory factors， and pathological section showed that Qingfei decoction had a good therapeutic effect on acute pharyngitis induced by ammonia water in rats. Ten endogenous biomarkers of Qingfei decoction in the treatment of acute pharyngitis were screened out by serum metabonomics， which may play a role through four important metabolic pathways： Taurine and hypotaurine metabolism， primary bile acid biosynthesis， valine， leucine and isoleucine degradation， and pyrimidine metabolism. Conclusion Qingfei decoction has the effect of treating acute pharyngitis， and the possible mechanisms are regulation of taurine and hypotaurine metabolism， biosynthesis of primary bile acids， degradation of valine， leucine and isoleucine， and pyrimidine metabolism， which provide references for further clinical application of this medicine.

Key words Acute pharyngitis; Qingfei decoction; Potential biomarkers; Metabolic pathway

急性咽炎（acute pharyngitis，AP）為咽部黏膜及黏膜下組織的突發(fā)性炎癥，常涉及淋巴組織[1]，病因包括感染性因素（如病毒、細(xì)菌、支原體和衣原體等感染）和非感染性因素（如粉塵、煙霧、刺激性氣體和機(jī)械刺激等）[2-3]。其臨床常表現(xiàn)為咽痛、咽干和咳嗽等癥狀[4]。急性咽炎模型通常使用氨水等刺激物建立，用來(lái)模擬環(huán)境污染或不健康的生活方式[5]。在中醫(yī)治療中，急性咽炎屬于中醫(yī)學(xué)“急喉痹”范疇。本病起病急，變化迅速，若不及時(shí)治療，極易引起中耳炎、鼻竇炎和喉炎等疾病[6]。西醫(yī)治療中，臨床治療多使用糖皮質(zhì)激素、抗生素和非甾體類(lèi)抗炎藥，存在較為明顯的副作用[7-8]。一直以來(lái)，中醫(yī)藥療法在應(yīng)對(duì)急性病癥方面顯示了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)[9]，特別是流感、熱病等，用中醫(yī)藥治療疾病對(duì)替代抗生素、遏制耐藥具有積極意義[10]。

清肺飲處方來(lái)源于成都大學(xué)附屬醫(yī)院的中藥復(fù)方制劑臨床經(jīng)驗(yàn)方，全方由羅漢果、西青果和百合等7味藥材組成，具有潤(rùn)喉利咽、清肺化痰、潤(rùn)肺止咳和補(bǔ)肺生津等功效，且在以往的咽炎治療中顯示了良好的臨床療效，但其作用機(jī)制不清、體內(nèi)代謝途徑不明。中藥復(fù)方作為中藥臨床應(yīng)用的重要形式，探索其作用機(jī)制在中藥復(fù)方研究中至關(guān)重要[11]。

代謝組學(xué)作為后基因組時(shí)代的新技術(shù)，是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，其具有的動(dòng)態(tài)性、整體性研究體系與中醫(yī)藥的“整體觀”研究思想不謀而合，和中醫(yī)藥多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn)相吻合[12]。采用代謝組學(xué)方法，可以篩選得到與藥效作用有關(guān)的潛在生物標(biāo)志物，從而進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)代謝途徑分析[13]。因此，本研究從整體出發(fā)，采用代謝組學(xué)研究方法，探究清肺飲治療咽炎模型大鼠前后血清代謝物的變化，分析發(fā)揮藥效的作用機(jī)制，明確清肺飲治療急性咽炎的潛在生物標(biāo)志物和代謝通路，為其后續(xù)的清肺飲的臨床開(kāi)發(fā)和急性咽炎的治療提供依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠56只，雌雄各半，6～8周，體重（200±20） g，購(gòu)于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（川）2020-030。普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.2 藥品與試劑

清肺飲中間體（20230322）；阿莫西林膠囊購(gòu)于石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司（批號(hào)1882221284）；氨水（分析純）、水合氯醛（分析純）購(gòu)于成都市科隆化學(xué)試劑有限公司；乙酸銨（質(zhì)譜純）購(gòu)于美國(guó)Honeywell公司；乙腈、甲醇（質(zhì)譜純）購(gòu)于美國(guó) Thermo Fischer公司。

腫瘤壞死因子α（TNF-α，批號(hào)A38230363）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β，批號(hào)A30130437）、白細(xì)胞介素6（IL-6，批號(hào)A30630482）、白細(xì)胞介素10（IL-10，批號(hào)A31030365）試劑盒均購(gòu)于杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司。

1.3 主要儀器

TEK-VET5血液細(xì)胞分析儀（江西特康科技有限公司）；SAF-680T型酶標(biāo)儀（上海巴玖公司）；JB-L5包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司）；RM2016切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司）；DM500正置光學(xué)顯微鏡（上海徠卡儀器有限公司）；LC-30A型超高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；Triple TOF 6600型四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó) AB SCIEX公司）。

2 方法

2.1 清肺飲中間體粉末的制備

按處方量，羅漢果等加入12.15倍水提取3次，每次1.5 h，魚(yú)腥草等加入18倍水提取4 h，合并濾液，80 ℃減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05的浸膏，95%乙醇醇沉至最終醇濃度為60%，靜置24 h后抽濾，醇沉液在80 ℃下減壓濃縮后于80 ℃減壓干燥，提取物得率為26.28%。

2.2 造模與分組

選用56只SD大鼠，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d 后，除空白組（NC）和空白給藥組（NC-MD）外，使用喉頭噴霧器向造模組大鼠咽部噴15%氨水，3撳/次，2次/d，連續(xù)3 d，建立急性咽炎模型[14-15]，空白組（NC）和空白給藥組（NC-MD）噴純凈水作為對(duì)照。造模成功后，造模組大鼠隨機(jī)分為模型組（MX）、阿莫西林（Amoxicillin）（0.3 g/kg）組和清肺飲高（HD）（2.76 g/kg）、中（MD）（1.38 g/kg）、低劑量（LD）（0.69 g/kg）組。各給藥組ig相應(yīng)藥物，1次/d，連續(xù)5 d，對(duì)照組和模型組 ig等體積的0.5% CMC-Na。給藥結(jié)束后，大鼠禁食不禁水12 h，ip 10%水合氯醛（3 mL/kg）進(jìn)行麻醉，每組隨機(jī)取6只大鼠全血、血清和咽部組織，于低溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 行為學(xué)及咽部表觀狀態(tài)觀察[16]

記錄各組大鼠的體重，每天根據(jù)大鼠的脫毛程度、毛發(fā)狀態(tài)和咽部紅腫程度等觀察并記錄造模后大鼠的行為狀態(tài)。造模后，觀察各組大鼠毛發(fā)情況、精神狀況、活動(dòng)情況、飲水量等，額帶反光鏡下觀察咽部黏膜情況。

2.4 血常規(guī)檢測(cè)

取各組大鼠腹主動(dòng)脈血1 mL，置于EDTA的采血管中。采用TEK-VET5血液細(xì)胞分析儀測(cè)定全血白細(xì)胞（WBC）、淋巴細(xì)胞（LYMP）數(shù)目。

2.5 血清炎癥因子指標(biāo)檢測(cè)

取各組大鼠腹腔主動(dòng)脈血，4 ℃靜置60 min，3500 r/min離心15 min，取上層血清，采用ELISA法測(cè)定各組血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10水平。

2.6 咽部組織病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)

取各組大鼠咽部組織，4%多聚甲醛固定、乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片，制得3 μm石蠟切片，HE染色，中性樹(shù)脂封片干燥，光鏡觀察咽部組織形態(tài)學(xué)改變。

2.7 代謝組學(xué)分析

2.7.1 UPLC-Q-TOF-MS分析

（1）血清樣本處理：將用液氮速凍后并保存于-80 ℃的正常組、模型組和清肺飲中劑量組的血清樣本于常溫解凍，取100 μL樣本加入已預(yù)冷的甲醇-乙腈溶液（1：1，V/V）400 μL，渦旋混合30 s，低溫超聲10 min，-20 ℃靜置60 min，12000 r/min、4 ℃離心15 min，取上清液用氮?dú)獯蹈伞Ｙ|(zhì)譜分析時(shí)加入乙腈-水（1：1，V/V）100 μL復(fù)溶，渦旋，14000 r/min、4 ℃離心15 min，取上清液進(jìn)樣分析。

（2）色譜條件：Waters ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱（100 mm× 2.1 mm，1.8 μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-25 mmol/L乙酸銨水溶液（B）梯度洗脫（0～2 min，95% A；2～18 min，95%～65% A；18～20 min，65%～40% A；20～22 min，40% A；22～22.1 min，40%～95% A；22.1～30 min，95% A），流速0.3 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量1 μL。

（3）質(zhì)譜條件：點(diǎn)噴霧離子源（ESI），噴霧電壓（IS）分別為+5500 V，﹣4500 V；離子源溫度（TEMP）為550 ℃；簇裂解電壓（DP）為80 V；碰撞能量（CE）為35 V；碰撞能量擴(kuò)展（CES）為15 V；霧化氣壓力（GS1）和輔助氣壓力（GS2）為55psi；氣簾壓力（CUR）為35psi；檢測(cè)模式為開(kāi)啟動(dòng)態(tài)背景扣除（DBS）的信息關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)采集模式（IDA）。

2.7.2 數(shù)據(jù)處理與分析

將LC-MS/MS采集的質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)使用Analyst? TF 1.6、 PeakView 2.0等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)預(yù)處理，得到包括質(zhì)荷比、保留時(shí)間及峰面積等信息的數(shù)據(jù)矩陣[17]，采用ZhuLab實(shí)驗(yàn)室、KEGG等數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定代謝物。使用SIMCA 14.1軟件進(jìn)行樣本的主成分分析（PCA）和偏最小二乘法判別分析（OPLS-DA），以變量投影重要性（VIP）>1和t檢驗(yàn)（P<0. 05）為標(biāo)準(zhǔn)篩選差異代謝物。將滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)的化合物作為差異代謝物，并導(dǎo)入MetaboAnalyst 5.0數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行進(jìn)一步的代謝通路分析。

3 結(jié)果

3.1 行為學(xué)及咽部表觀狀態(tài)觀察結(jié)果

從造模第1天開(kāi)始，造模組大鼠出現(xiàn)撓嘴癥狀，造模第2～3天癥狀明顯，唇周有抓撓血痕，毛發(fā)無(wú)光澤，出現(xiàn)喘息急促，飲水增多，食量減小等現(xiàn)象。造模3 d后咽部有紅腫現(xiàn)象出現(xiàn)，即造模成功。在給予藥物治療5 d后，與模型組比較，各給藥組大鼠咽部紅腫情況有所好轉(zhuǎn)，說(shuō)明清肺飲對(duì)急性咽炎有較好的治療效果。

3.2 血常規(guī)結(jié)果

白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞是炎癥反應(yīng)的效應(yīng)器官，血液中其數(shù)目的多少可以反應(yīng)炎癥狀況。與正常組相比，模型組大鼠白細(xì)胞（WBC）數(shù)目和淋巴細(xì)胞（LYMP）數(shù)目顯著增加，空白給藥組無(wú)顯著變化；與模型組相比，阿莫西林組、清肺飲高、中、低劑量組大鼠白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)目均顯著降低，見(jiàn)圖1。

3.3 血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和 IL-10 水平的影響

與對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中的IL-1β、IL-6和TNF-α 促炎因子水平顯著升高（P＜0.01），與模型組相比，各給藥組大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α 水平均顯著降低。對(duì)照組、模型組和各給藥組血清中抑炎因子IL-10均無(wú)顯著性差異，見(jiàn)圖2。

3.4 各組大鼠咽部組織形態(tài)學(xué)結(jié)果

空白組黏膜層和肌層結(jié)構(gòu)清晰，分界明顯，整體染色較均勻，未見(jiàn)炎性滲出物，上皮細(xì)胞無(wú)變性、壞死、炎癥，腺體未見(jiàn)增生、萎縮等病理變化；較于空白組，空白給藥組基本相同。模型組上皮增生增厚（綠色箭頭），少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)（藍(lán)色箭頭），黏膜下層腺體萎縮較明顯，結(jié)締組織內(nèi)見(jiàn)散在較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)。相較于模型組，各給藥組均有一定改善。阿莫西林組偶見(jiàn)上皮增生情況，炎細(xì)胞不明顯，固有層內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少；高、中、劑量組樣本改善情況均較好，上皮增生情況較少，固有層內(nèi)無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體萎縮情況較少，見(jiàn)圖3。以上結(jié)果說(shuō)明清肺飲可以使氨水誘導(dǎo)的急性咽炎大鼠損傷的咽部組織得到明顯的恢復(fù)。

3.5 代謝組學(xué)研究

3.5.1 UPLC-Q-TOF-MS分析

正常組、模型組、中劑量組大鼠血清樣本和QC樣本在正、負(fù)離子模式下的總離子流圖，見(jiàn)圖4。

3.5.2 PCA和OPLS-DA分析

分別將各組代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA），PCA 結(jié)果顯示，正、負(fù)離子模式下，QC樣本集聚良好，表明儀器分析系統(tǒng)穩(wěn)定性良好；PCA和OPLS-DA 結(jié)果顯示，正、負(fù)離子模式下，正常組、模型組及清肺飲中劑量組3組樣本能顯著區(qū)分開(kāi)，表明各組間血清代謝輪廓有明顯差異，即各組間內(nèi)源性代謝物發(fā)生了顯著變化，見(jiàn)圖5。

OPLS-DA得分圖及模型驗(yàn)證圖見(jiàn)圖6～7。正離子模式下，OPLS-DA得分圖顯示空白組和模型組組間血清樣本，清肺飲中劑量組和模型組組間血清樣品均可明顯分離，模型參數(shù)如下表1，Q2>0.5時(shí)可認(rèn)為是有效的模型，說(shuō)明該模型的數(shù)據(jù)有效可靠，具有良好的預(yù)測(cè)能力[18]。各模型進(jìn)行隨機(jī)置換測(cè)試（n=200），結(jié)果表明 OPLS-DA 模型不存在過(guò)擬合的情況，各模型的建模結(jié)果可靠。

3.5.3 差異代謝物分析

結(jié)合VIP >1和P<0. 05的篩選條件，根據(jù)代謝物的保留時(shí)間、一級(jí)質(zhì)譜及二級(jí)質(zhì)譜碎片等信息，利用KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)和Zhulab代謝組學(xué)數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行差異代謝物定性鑒別。模型組與對(duì)照組有73個(gè)差異代謝物，為急性咽炎大鼠潛在血清生物標(biāo)志物；中劑量組與模型組有73個(gè)差異代謝物，為治療急性咽炎大鼠潛在血清生物標(biāo)志物，其中10個(gè)為急性咽炎大鼠血清生物標(biāo)志物。10個(gè)代謝物中，9個(gè)在模型組呈上調(diào)趨勢(shì)，1個(gè)呈下調(diào)趨勢(shì)，經(jīng)清肺飲中劑量給藥治療后，均呈現(xiàn)回調(diào)趨勢(shì)，見(jiàn)表2。

3.5.4 代謝通路分析

將10個(gè)共同的差異代謝物輸入MetaboAnalyst 5.0平臺(tái)中進(jìn)行代謝通路分析，篩選出6條代謝通路，其中4條impact＞0 ，分別為?；撬岷痛闻；撬岽x，初級(jí)膽汁酸生物合成，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解和嘧啶代謝，見(jiàn)表3，代謝通路網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖8。此外，將其余63個(gè)治療急性咽炎大鼠的潛在血清生物標(biāo)志物進(jìn)行代謝通路分析，得到包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、戊糖和葡糖醛酸的相互轉(zhuǎn)化、色氨酸代謝在內(nèi)的16條代謝通路，其中10條impact＞0，代謝通路網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖 9。

4 討論

本研究通過(guò)氨水誘導(dǎo)建立大鼠急性咽炎模型，考察了清肺飲對(duì)大鼠白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞、血清炎癥因子、病理切片的影響。目前，相關(guān)研究多采用咽部黏膜注射乙型溶血性鏈球菌和咽部黏膜氨水噴霧刺激兩種方法制備大鼠急性咽炎模型[19]，前者主要是模擬感染性因素導(dǎo)致的急性咽炎，后者主要是模擬非感染因素（物理刺激）導(dǎo)致的急性咽炎。相比于注射乙型溶血性鏈球菌感染模型，氨水致炎模型較為簡(jiǎn)便、安全，且更符合人們?nèi)粘Ｉ钪行晾薄⒋碳わ嬍车牟涣剂?xí)慣，故本研究采用氨水致炎模型。結(jié)果表明清肺飲高、中低劑量組給藥治療后，體征較模型組比有明顯好轉(zhuǎn)，白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)目均有不同程度的降低，血清中IL-1β、IL-6、TNF-α炎性因子水平均顯著降低，病理切片中咽部組織的炎性反應(yīng)降低?？瞻捉o藥組與空白組各指標(biāo)無(wú)明顯差異，說(shuō)明清肺飲對(duì)正常大鼠無(wú)致炎反應(yīng)。以上結(jié)果說(shuō)明清肺飲對(duì)急性咽炎大鼠有良好的治療作用。

為進(jìn)一步探究清肺飲治療急性咽炎的作用機(jī)制，研究采用代謝組學(xué)相關(guān)方法，利用質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)了清肺飲中劑量組、模型組和正常大鼠血清代謝物的變化。與空白組比較，模型組在正、負(fù)離子模式下共73個(gè)代謝物發(fā)生顯著性改變，與模型組相比，清肺飲中劑量組在正、負(fù)離子模式下也共有73個(gè)差異代謝物。清肺飲中劑量治療后，3-甲基-2-氧代戊酸、?；撬?、尿苷等10個(gè)共同差異代謝物較模型組回調(diào)，說(shuō)明這10個(gè)代謝成分可能為清肺飲治療急性咽炎大鼠的血清生物標(biāo)志物，主要涉及有?；撬岷痛闻；撬岽x，初級(jí)膽汁酸生物合成，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解和嘧啶代謝4條代謝通路，代謝通路中涉及代謝物為牛磺酸、尿苷和3-甲基-2-氧代戊酸，表明這3種代謝物在清肺飲中劑量治療急性咽炎大鼠時(shí)具有極其重要的作用。

牛磺酸是一種在大多數(shù)動(dòng)物組織中表達(dá)的非蛋白質(zhì)氨基酸，可影響細(xì)胞功能，包括滲透調(diào)節(jié)，抗氧化，膽汁酸結(jié)合等[20]。研究表明，其能夠通過(guò)抑制膽汁酸膜受體介導(dǎo)的大鼠肺泡巨噬細(xì)胞NR8383分泌腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）來(lái)發(fā)揮其抗炎、免疫調(diào)節(jié)的作用[21]。此外，?；撬嵋苍谘装Y反應(yīng)中可通過(guò)鹵化反應(yīng)生成?；撬崧劝罚瑥亩种蒲装Y介質(zhì)的產(chǎn)生，增加抗氧化蛋白的表達(dá)，發(fā)揮抗炎和細(xì)胞保護(hù)的作用[22]。本研究中有牛磺酸參與的?；撬岷痛闻；撬岽x、初級(jí)膽汁酸生物合成介導(dǎo)了急性咽炎的發(fā)生和發(fā)展，可能為治療急性咽炎的關(guān)鍵途徑。尿苷是嘧啶合成代謝的中間體，與核酸代謝相關(guān)[23]，本研究表明急性咽炎的發(fā)生可能與嘧啶代謝紊亂相關(guān)。此外，相對(duì)于模型組，清肺飲中劑量組的其余63個(gè)差異代謝物涉及通路有苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、戊糖和葡糖醛酸的相互轉(zhuǎn)化、色氨酸代謝等16個(gè)代謝通路。

綜上所述，本研究采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)，血清代謝組學(xué)方法，發(fā)現(xiàn)清肺飲對(duì)急性咽炎大鼠具有良好療效，是通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多途徑共同調(diào)控的結(jié)果，符合中藥多成分、多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同發(fā)揮作用的整體觀點(diǎn)[24]。

近年來(lái)，中醫(yī)方法的血清藥物化學(xué)與代謝組學(xué)相結(jié)合，建立了一種創(chuàng)新的中藥組學(xué)策略，能夠探索證候生物標(biāo)志物并評(píng)估中醫(yī)療效，發(fā)現(xiàn)藥效物質(zhì)[25]。同時(shí)，中藥藥效物質(zhì)也是研究中藥臨床療效的關(guān)鍵，對(duì)新藥研發(fā)和中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究都具有著重大意義[26]。本研究后續(xù)將對(duì)清肺飲治療急性咽炎的藥效物質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步分析，探究其入血成分，將血清藥物化學(xué)與代謝組學(xué)相結(jié)合，明確其“物質(zhì)-效應(yīng)”機(jī)制，為清肺飲的臨床利用提供依據(jù)。

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