核桃葉片揮發(fā)性成分提取及其驅(qū)蚊活性的研究

王茹 楊夢(mèng)思 張萍 孫雅麗 虎海防

摘要：為篩選具有較強(qiáng)持效性和驅(qū)蚊效果的核桃葉片提取物，利用超聲輔助水蒸氣蒸餾法提取‘溫185‘山核桃‘美國(guó)東部黑核桃和‘實(shí)生核桃葉片揮發(fā)油，以核桃葉片揮發(fā)油提取率為指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn)，得出核桃葉片揮發(fā)油的最佳提取條件，并結(jié)合驅(qū)蚊試驗(yàn)，以驅(qū)蚊率為指標(biāo)，篩選4種核桃葉片提取物的最佳驅(qū)蚊含量水平。結(jié)果表明，超聲輔助水蒸氣蒸餾法提取‘美國(guó)東部黑核桃葉片揮發(fā)油的最佳提取條件為提取時(shí)間8 h，超聲時(shí)間10 min，固液比1∶10（ g·mL-1）；在此條件下，核桃葉片揮發(fā)油的提取率為0.475%。以無(wú)水乙醇為溶劑將4種核桃葉片揮發(fā)油提取物溶液稀釋為10%、20%、30%、40%并測(cè)定其溶液的驅(qū)蚊率，‘美國(guó)東部黑核桃葉片揮發(fā)油提取溶液在30%含量水平下驅(qū)蚊時(shí)間可達(dá)20 min，此時(shí)驅(qū)蚊率為85.18%，驅(qū)蚊效果最佳。‘美國(guó)東部黑核桃葉片揮發(fā)油提取物溶液具有良好的驅(qū)蚊效果，具有開發(fā)為植物源驅(qū)避劑的潛力，可進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：核桃葉片；最佳提取條件；活性成分；驅(qū)蚊效果

doi：10.13304/j.nykjdb.2022.0448

中圖分類號(hào)：S664.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008‐0864（2024）03‐0223‐11

蚊蟲是重要的病媒之一，不僅傳播瘧疾、黃熱病、登革熱等傳染病，而且嚴(yán)重威脅人類健康[1]。使用化學(xué)殺蟲劑防治是控制蚊蟲危害的重要措施。目前市場(chǎng)上使用的蚊蟲驅(qū)避劑主要是化學(xué)合成的避蚊胺（N， N-diethyl-3-methyl benzoyl amide，DEET），因其良好的驅(qū)蚊作用而被廣泛地用作驅(qū)蟲劑，但DEET有毒，對(duì)皮膚有刺激作用。化學(xué)殺蟲劑的大量、長(zhǎng)期使用易引起蚊蟲抗藥性并對(duì)環(huán)境造成污染，所以研發(fā)安全有效、低毒無(wú)副作用的驅(qū)蚊劑，已成為研究熱點(diǎn)[2]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者致力于研究天然殺蟲成分和植物源的天然驅(qū)避劑代替殺蟲劑。從植物中提取的揮發(fā)性化合物[3‐4]是重要的次生代謝物，是從葉片和植株表層釋放出來(lái)的揮發(fā)性化學(xué)成分，其所含的檸檬烯、石竹烯、α-蒎烯、香葉醇和芳樟醇均有驅(qū)蚊效果[5-9]。有學(xué)者利用高效液相層析法（high performance liquidchromatography，HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gaschromatography-mass spectrometer，GC-MS）等手段對(duì)植物揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行分析研究，取得了重大突破。楊中林[10]采用GC-MS分析山雞椒油、薄荷油和月桂油的主要組成成分有肉桂烯、萜品油烯、D-檸檬烯等，并獲得對(duì)人體驅(qū)蚊效果較好的配方制劑，可作為植物源驅(qū)避劑。林琳[11]對(duì)側(cè)柏、孔雀草、薄荷、驅(qū)蚊香草、番茄等不同種類驅(qū)蚊材料的驅(qū)蚊效果進(jìn)行了測(cè)試，發(fā)現(xiàn)5種植物都有一定的驅(qū)蚊作用，隨時(shí)間的推移驅(qū)蚊效果逐漸減弱。Tunón等[12]發(fā)現(xiàn)青蒿中的香豆素和側(cè)柏醇可作為驅(qū)蚊物質(zhì)。植物源驅(qū)蟲劑作為一種天然產(chǎn)品，對(duì)環(huán)境無(wú)害，因此利用植物衍生資源產(chǎn)品開發(fā)驅(qū)蟲劑，已經(jīng)成為目前的研究熱點(diǎn)。但是，從天然驅(qū)避劑中研制出一種可以取代DEET的高效、廣譜的驅(qū)蟲劑，仍然存在著許多問(wèn)題[13]。比如，在開發(fā)的過(guò)程中，如何兼顧植物資源的保護(hù)，如何利用植物資源，是否對(duì)環(huán)境產(chǎn)生影響，是否破壞生態(tài)平衡，以及能否推廣到工業(yè)化生產(chǎn)中，這些問(wèn)題都要慎重考慮[14]。而在當(dāng)前的人工合成驅(qū)避劑中，尚無(wú)性能較好、毒性較低、環(huán)境友好的驅(qū)避劑。本研究利用超聲波輔助水蒸氣蒸餾提取方法，分別對(duì)‘美國(guó)東部黑核桃（J. nigra）、‘ 溫185（J. regiaWenl85）、‘實(shí)生核桃（J. regia Shisheng）及‘山核桃（C. cathayensis）進(jìn)行有效成分的提取，結(jié)合驅(qū)蚊試驗(yàn)，篩選4種核桃葉片提取物的最佳驅(qū)蚊劑量。以期為開展核桃種質(zhì)資源利用提供參考依據(jù)，也為核桃葉片揮發(fā)性物質(zhì)在醫(yī)藥、植物源揮發(fā)性物質(zhì)研究和農(nóng)副產(chǎn)品工業(yè)的開發(fā)與應(yīng)用提供參考數(shù)據(jù)，對(duì)實(shí)現(xiàn)核桃資源多功能利用和產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 驅(qū)蚊植物供試材料 石竹烯、香葉醇、芳樟醇、羅勒烯、檸檬烯對(duì)白紋伊蚊（Aedes albopictus）具有強(qiáng)殺蚊活性，對(duì)新疆佳木果樹學(xué)國(guó)家長(zhǎng)期科研基地的核桃樹進(jìn)行篩選，選擇‘美國(guó)東部黑核桃‘溫185‘實(shí)生核桃和‘山核桃葉片為試驗(yàn)材料。采樣樹齡為9 年，株行距為4 m×6 m，生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害。每個(gè)品種選3棵樣樹，樹形為開心形，從東、西、南、北4個(gè)方位進(jìn)行收集，樣品采摘大小相似。于2021年5、6、7和8月底，采摘同一株樹相同部位、無(wú)病蟲害且葉片完整的老葉，然后對(duì)收集的新鮮核桃葉片進(jìn)行篩選，去除灰塵及其他雜質(zhì)，陰干，粉碎，過(guò)40目篩，按樣品號(hào)分別標(biāo)記，稱重后備用。

1.1.2 供試蚊蟲 白紋伊蚊在飛凡標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司養(yǎng)蟲室內(nèi)飼養(yǎng)。室內(nèi)溫度（temperature，T）（26±1）℃；相對(duì)濕度（relative humidity，RH）65%±10%；光周期（光照/黑暗）12 h/12 h，試驗(yàn)時(shí)選用整齊一致的健康3～5 d齡成蟲。

1.2 核桃葉片揮發(fā)物制備

超聲波水蒸氣蒸餾法提取葉片揮發(fā)性物質(zhì)，提取方法如下：準(zhǔn)確稱取‘溫185‘山核桃‘實(shí)生核桃‘美國(guó)東部黑核桃4種核桃干葉片粉末20g，置于圓底燒瓶中，加入定量水，振蕩混勻后置于超聲波清洗器中（超聲頻率40 kHz、輸出功率200W）進(jìn)行超聲處理，然后將圓底燒瓶放入電熱套并連接冷凝管及揮發(fā)油提取器，回流提取。揮發(fā)油經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，稱重，根據(jù)公式（1）計(jì)算提取率[15]，于-4℃保存待用[16]。試驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果取平均值。通過(guò)揮發(fā)油質(zhì)量，比較同一種植物的不同提取時(shí)間、不同固液比、不同超聲時(shí)間的提取率。

1.3 超聲波水蒸氣蒸餾法的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以超聲時(shí)間、提取時(shí)間、固液比為考察因素，采用3因素3水平正交試驗(yàn)，以核桃葉片揮發(fā)油提取率為指標(biāo)，確定最佳提取條件[17]。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

1.3.1 提取時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取率的影響試驗(yàn) 稱取核桃葉片20 g，在設(shè)定固液比為1∶10（g·mL-1），超聲時(shí)間為10 min，超聲功率為200 W，提取時(shí)間分別為6、7、8、9 h的條件下，于揮發(fā)油提取裝置中提取，研究不同提取時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取率的影響。

1.3.2 固液比對(duì)揮發(fā)油提取率的影響試驗(yàn) 稱取核桃葉片20 g，在設(shè)定提取時(shí)間為8 h，超聲時(shí)間為10 min，超聲功率為200 W，固液比分別為1∶5、1∶10、1∶15、1∶20（g·mL-1）條件下，利用揮發(fā)油提取裝置提取，研究不同固液比對(duì)揮發(fā)油提取率的影響。

1.3.3 超聲時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取率的影響試驗(yàn) 稱取核桃葉片20 g，在設(shè)定提取時(shí)間為8 h，固液比為1∶10（g·mL-1），超聲功率為200 W，超聲時(shí)間分別為5、10、15、20 min 條件下，利用揮發(fā)油提取裝置提取，研究不同超聲時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取率的影響。

1.3.4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化 采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，在綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，以核桃葉片揮發(fā)油的提取率（%）為值，通過(guò)正交試驗(yàn)分析，進(jìn)行揮發(fā)油提取條件的優(yōu)化[18]。

1.4 驅(qū)蚊活性指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 驅(qū)避液制劑制備方法 將4種核桃葉片提取液使用乙醇稀釋為4 個(gè)體積分?jǐn)?shù)處理：10%、20%、30%、40%（以目前市場(chǎng)驅(qū)避劑中精油含量為依據(jù)），并對(duì)其進(jìn)行蚊蟲驅(qū)避試驗(yàn)測(cè)定，篩選出最佳驅(qū)蚊效果的含量水平。

1.4.2 驅(qū)蚊試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)室溫度為25～27 ℃，相對(duì)濕度為60%～70%。將3個(gè)直徑21 cm、長(zhǎng)度43 cm的透明圓筒進(jìn)行串聯(lián)，3個(gè)圓筒之間用擋板隔開，兩側(cè)用擋板擋住，一邊圓筒用透氣紗網(wǎng)封口，中間圓筒預(yù)先放100只試驗(yàn)蚊蟲，另一圓筒放入測(cè)試精油并用擋板密封。放入測(cè)試精油樣品5 min后，同時(shí)抽開3 個(gè)圓筒間的2 塊擋板，分別在5、10、15、20、45、60 min時(shí)將擋板插回并記錄兩邊圓筒的蚊蟲數(shù)量[19]，參照公式（2）計(jì)算驅(qū)蚊率。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2016 進(jìn)行試驗(yàn)資料的整理與統(tǒng)計(jì)，采用SPSS 26.0進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及顯著性的差異分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取率的影響

由圖1可見提取時(shí)間對(duì)核桃葉片揮發(fā)油提取率的影響，提取時(shí)間6～9 h，核桃葉片揮發(fā)油提取率‘ 溫185為0.031 5%～0.037 0%、‘ 山核桃為0.032 0%～0.042 0%、‘ 實(shí)生核桃為0.025 0%～0.027 5%、‘ 美國(guó)東部黑核桃為0.034 5%～0.043 0%。不同提取時(shí)間下各核桃葉片揮發(fā)油提取率依次為‘美國(guó)東部黑核桃>‘山核桃>‘溫185>‘實(shí)生核桃。隨著提取時(shí)間的不斷增加，揮發(fā)油的提取率先增加后減少，8 h時(shí)‘美國(guó)東部黑核桃揮發(fā)油的提取率最大，為0.043 0%。隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，核桃葉片中的揮發(fā)油提取率不斷增加，提取時(shí)間超過(guò)8 h后，揮發(fā)油已基本被提取出來(lái)，核桃葉片揮發(fā)油提取率開始緩慢降低，說(shuō)明核桃葉片揮發(fā)油的最佳提取時(shí)間為8 h。

2.2 固液比對(duì)揮發(fā)油提取率的影響

由圖2可以看出，固液比對(duì)核桃葉片揮發(fā)油提取率的影響，固液比1∶5～1∶20（g·mL-1）揮發(fā)油提取率‘溫185為0.018 5%～0.030 5%，‘山核桃為0.020 5%～0.032 0%，‘實(shí)生核桃為0.014 5%～0.027 5%，‘ 美國(guó)東部黑核桃為0.023 0%～0.037 5%。在不同固液比下各核桃葉片揮發(fā)油提取率依次為‘美國(guó)東部黑核桃>‘山核桃>‘溫185>‘實(shí)生核桃。隨著固液比中水分的增加，揮發(fā)油的提取率先升高后下降，固液比超過(guò)1∶10（g·mL-1）之后，揮發(fā)油提取率開始下降。隨著固液比中水分的不斷增加，揮發(fā)油的釋放空間充足，揮發(fā)油量將不會(huì)增加，而水溶液過(guò)多則會(huì)增加揮發(fā)油的溶解速度，不易收集水蒸氣，所以隨著固液比中水分不斷增大，當(dāng)超出一定范圍時(shí)，揮發(fā)油提取率會(huì)有相應(yīng)程度的減小[20]。固液比為1∶10（g·mL-1）時(shí)提取效果最佳，核桃葉片精油的提取率達(dá)到最大。

2.3 超聲時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取率的影響

由圖3可見，超聲時(shí)間對(duì)核桃葉片揮發(fā)油提取率的影響，超聲時(shí)間5～20 min時(shí)揮發(fā)油提取率‘溫185為0.027 0%～0.037 5%，‘山核桃為0.025 0%～0.036 5%，‘實(shí)生核桃為0.019 5%～0.029 0%，‘美國(guó)東部黑核桃為0.029 5%～0.047 5%。不同超聲時(shí)間下各核桃葉片揮發(fā)油提取率依次為‘美國(guó)東部黑核桃>‘溫185>‘山核桃>‘實(shí)生核桃。超聲波在一定程度上提高了核桃葉片揮發(fā)油提取率，隨著超聲處理時(shí)間的增加，其提取率呈遞增趨勢(shì)，當(dāng)超聲持續(xù)10 min后，提取率有所降低。隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞越容易破碎，有利于精油進(jìn)入溶劑中；但由于精油是易揮發(fā)物質(zhì)，提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致精油提取率下降[21‐22]。當(dāng)超聲時(shí)間為10 min時(shí)，核桃葉片精油的提取率達(dá)到最大。

2.4 正交試驗(yàn)結(jié)果分析

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以超聲時(shí)間、提取時(shí)間、固液比為考察因素，采用3因素3水平正交試驗(yàn)，以核桃葉片揮發(fā)油提取率為指標(biāo)，確定最佳提取條件[23]，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。從極差結(jié)果分析得出，3個(gè)因素對(duì)核桃葉片揮發(fā)油提取率的影響由強(qiáng)到弱順序?yàn)樘崛r(shí)間>超聲時(shí)間>固液比，提取時(shí)間的極差最大，為0.062，表明提取時(shí)間對(duì)核桃葉片揮發(fā)油提取量影響最大；固液比的極差最小，為0.030，表明固液比對(duì)核桃葉片揮發(fā)油提取量的影響最??；正交試驗(yàn)結(jié)果表明，在超聲波處理時(shí)間為10 min的條件下，A2B2C2 為核桃葉片揮發(fā)油提取條件的最佳組合，即提取時(shí)間為8 h，超聲時(shí)間為10 min，固液比為1∶10（g·mL-1）。

2.5 不同核桃葉片粗揮發(fā)油提取溶液的驅(qū)蚊效果分析

2.5.1 ‘溫185葉片提取物溶液驅(qū)蚊效果 從圖4可以看出，核桃葉片揮發(fā)油的含量水平不同，驅(qū)蚊效果也有所不同。通過(guò)對(duì)4種含量水平‘溫185核桃葉片揮發(fā)油驅(qū)蚊效果的比較可以看出，其驅(qū)蚊率依次為30%處理>40%處理>20%處理>10%處理，30%含量水平的驅(qū)蚊時(shí)間最長(zhǎng)，是驅(qū)蚊效果最好的處理水平，40% 含量水平揮發(fā)油效果比30% 處理效果稍差。在30% 含量水平下驅(qū)蚊時(shí)間達(dá)到20 min，說(shuō)明‘溫185葉片揮發(fā)油對(duì)蚊蟲的驅(qū)避效果，在30%含量水平下效果最好。

2.5.2 ‘美國(guó)東部黑核桃葉片提取物溶液驅(qū)蚊效果 由圖5可知，‘美國(guó)東部黑核桃葉片揮發(fā)油提取物隨著時(shí)間的增加驅(qū)蚊率先增加后減小。4種含量水平‘美國(guó)東部黑核桃葉片揮發(fā)油驅(qū)蚊效果依次為30% 處理>40% 處理>20% 處理>10% 處理，30%含量水平葉片揮發(fā)油在前20 min內(nèi)的驅(qū)蚊率為85.18%，具有最好的驅(qū)蚊效果。但是從20 min后驅(qū)蚊率開始下降，說(shuō)明揮發(fā)油溶液在空氣中揮發(fā)較快。

2.5.3 山核桃葉片提取物溶液驅(qū)蚊效果 由圖6可知，‘山核桃葉片揮發(fā)油提取物溶液的驅(qū)蚊率由高到低依次為20%處理>40%處理>30%處理>10% 處理。20%、40% 和10% 含量水平下20 min時(shí)，其驅(qū)蚊率均達(dá)到最高，驅(qū)蚊效果較好，但從20 min后驅(qū)蚊率出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，直至60 min時(shí)20% 含量水平的驅(qū)蚊率下降為27.04%。30% 含量水平的揮發(fā)油提取物溶液不同于其他含量水平，30% 含量水平在15 min時(shí)驅(qū)蚊率達(dá)到最高，驅(qū)蚊效果較20%和40%含量水平稍差，當(dāng)驅(qū)蚊時(shí)間為20 min時(shí)，30%含量水平的驅(qū)蚊率已經(jīng)開始下降，且下降較快?！胶颂胰~片揮發(fā)油提取物溶液在20 min內(nèi)20%、40%、30%和10%具有一定的驅(qū)蚊效果，其中揮發(fā)油提取物溶液含量水平為20%、驅(qū)蚊時(shí)間為20 min時(shí)驅(qū)蚊效果最好，驅(qū)蚊率達(dá)到最高，為68.82%。

2.5.4 ‘ 實(shí)生核桃葉片提取物溶液驅(qū)蚊效果 由圖7可知，‘實(shí)生核桃葉片揮發(fā)油提取物隨著時(shí)間的增加驅(qū)蚊率呈先增加后減小的趨勢(shì)，‘實(shí)生核桃葉片揮發(fā)油不同含量水平驅(qū)蚊率由高到低依次為40%處理>30%處理>20%處理>10%處理，‘實(shí)生核桃葉片揮發(fā)油提取物稀釋為40%水平、驅(qū)蚊時(shí)間為20 min時(shí)驅(qū)蚊率為63.40%，具有最好的驅(qū)蚊效果。

2.6 同一水平下不同核桃葉片驅(qū)蚊效果由表3所知，4個(gè)核桃樣品葉片揮發(fā)油提取溶液均具有一定的驅(qū)蚊活性，不同含量水平下驅(qū)蚊效果有明顯差異。‘美國(guó)東部黑核桃揮發(fā)油提取溶液在30%含量水平下效果最佳，驅(qū)蚊率可達(dá)到85.18%；其次是‘溫185，驅(qū)蚊率達(dá)到84.11%；‘山核桃和‘實(shí)生核桃揮發(fā)油提取溶液驅(qū)蚊效果低于‘美國(guó)東部黑核桃和‘溫185。可知4個(gè)核桃葉片揮發(fā)油提取溶液在30%含量水平下驅(qū)蚊效果由強(qiáng)到弱依次為‘美國(guó)東部黑核桃>‘溫185>‘山核桃>‘實(shí)生核桃。

3 討論

利用超聲水蒸氣蒸餾法提取核桃葉片揮發(fā)油，可以選擇的因素較多。采用正交試驗(yàn)?zāi)苋娴乇容^各因素之間的相互作用，并且通過(guò)正交試驗(yàn)的設(shè)計(jì)能分析出最優(yōu)的提取方案，在核桃葉片揮發(fā)油的提取優(yōu)化方面廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)得出超聲水蒸氣蒸餾法提取‘美國(guó)東部黑核桃葉片揮發(fā)油的最佳工藝條件為提取時(shí)間8 h，超聲時(shí)間10 min，固液比1∶10（g·mL-1）。其中，核桃葉片粉末含量過(guò)多對(duì)核桃葉精油提取率有負(fù)影響，隨固液比中水分的增加，揮發(fā)油提取率先增加后下降，當(dāng)固液比增大到1∶10（g·mL-1）后提取率明顯開始下降，可能是當(dāng)核桃葉片與水溶液之間混合后擴(kuò)散達(dá)到一定平衡，提取率反而降低，因?yàn)楹颂曳勰┻^(guò)多，固液比過(guò)大，蒸餾瓶容積太小，核桃葉片溶解不完全導(dǎo)致提取率降低[23]，這和Ravanfar等[24]的試驗(yàn)結(jié)果相一致。隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，核桃葉片中揮發(fā)油成分不斷析出，到達(dá)一定量后基本飽和，提取率趨于平緩，所以揮發(fā)油提取率先增加后減少，這與王藝茜[25]對(duì)桃葉最佳提取條件優(yōu)化中結(jié)果一致。但張鷹等[26]在不同蒸餾提取時(shí)間對(duì)柚皮精油提取率的影響中得出，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，柚皮精油提取率增加，當(dāng)提取時(shí)間達(dá)到2 h后，精油提取率趨于平緩，并沒有下降，而本試驗(yàn)中核桃葉片揮發(fā)油提取率則先上升后下降。

核桃葉片揮發(fā)油的提取率隨超聲時(shí)間的增加，呈現(xiàn)先增加后下降趨勢(shì)，當(dāng)超聲時(shí)間為10 min時(shí)提取率達(dá)到最大，10 min以后核桃葉片揮發(fā)油提取率隨著超聲時(shí)間延長(zhǎng)開始緩慢下降。這與華燕青等[27]對(duì)薄荷揮發(fā)油的提取試驗(yàn)結(jié)果一致。但覃勇榮等[28]在對(duì)無(wú)患子總皂苷提取率研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)皂苷提取率逐漸下降。本試驗(yàn)中提取率的下降是由于超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，大量核桃葉片細(xì)胞破碎且破碎程度增加，揮發(fā)油溶出較多，但是由于揮發(fā)油易揮發(fā)，提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，引起核桃葉片物質(zhì)結(jié)構(gòu)和組成的變化，導(dǎo)致核桃葉片揮發(fā)油提取率下降，所以核桃葉片揮發(fā)油提取率隨超聲時(shí)間的增加先增加后減小[29‐30]。同時(shí)，超聲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不僅增加了成本，而且可能影響精油成分[31]。本試驗(yàn)在影響核桃葉片揮發(fā)油的提取率單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將正交試驗(yàn)法應(yīng)用于優(yōu)化核桃葉片揮發(fā)油提取工藝中，確定提取時(shí)間為8 h，超聲時(shí)間為10 min，固液比為1∶10（g·mL-1）為最佳提取條件。在此條件下，核桃葉片揮發(fā)油的提取率為0.475%，顯著高于桃葉提取率[27]。本試驗(yàn)利用正交試驗(yàn)法對(duì)超聲輔助水蒸氣蒸餾法提取核桃葉片揮發(fā)油的提取方法進(jìn)行優(yōu)化，為后期提高核桃葉片揮發(fā)油的提取率及核桃葉片驅(qū)蚊精油的綜合開發(fā)利用提供依據(jù)。

天然植物精油大多具有芳香性，毒性低，刺激性低，對(duì)人體和環(huán)境無(wú)害，使用安全，使嗅覺和感覺更容易接受[32‐33]。驅(qū)蚊試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，30%含量水平下‘美國(guó)東部黑核桃葉片揮發(fā)油提取溶液驅(qū)蚊效果最佳，在驅(qū)蚊時(shí)間為20 min 時(shí)，驅(qū)蚊率達(dá)85.18%，具有很好的開發(fā)前景。目前關(guān)于植物精油驅(qū)蚊效果的研究較多，但多集中于植物本身，而有關(guān)揮發(fā)性物質(zhì)的有效組分和不同植物間的相互協(xié)作關(guān)系的探討很少[34]。劉磊等[35]通過(guò)比較5種驅(qū)蚊植物及植物萃取液驅(qū)蚊效果發(fā)現(xiàn)，5種驅(qū)蚊植物提取液在2 h后均表現(xiàn)出不同程度的蚊蟲驅(qū)避作用，且隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，其作用由開始升高在20 min內(nèi)逐漸降低，而在120 min內(nèi)，香葉天竺葵沒有顯著的降低。這與本試驗(yàn)結(jié)果中核桃葉片揮發(fā)油提取物的驅(qū)蚊效果相一致。唐麗萍等[36]對(duì)4種植物精油驅(qū)蚊貼對(duì)白紋伊蚊的驅(qū)避效果的研究發(fā)現(xiàn)，香茅油驅(qū)蚊貼的驅(qū)避效果最好，高達(dá)78.2%，復(fù)方精油驅(qū)蚊貼的驅(qū)避率為56.0%，所有測(cè)試的驅(qū)蚊貼在24 h后驅(qū)蚊效果明顯減弱。以30%含量水平核桃葉片的精油為驅(qū)蚊劑的最佳配比，但其作用不及市面上的驅(qū)蚊產(chǎn)品?？紤]到核桃葉片的獨(dú)殊香氣和低成本，該產(chǎn)品與其他植物精油配合使用，能實(shí)現(xiàn)較好的驅(qū)蚊作用，是一種具有潛力的新型驅(qū)蚊劑。

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（責(zé)任編輯：胡立霞）