病毒性肺炎病證結(jié)合動(dòng)物模型的制備與評(píng)價(jià)

楊上松 張庭瑞 溫偉波 李欽

【摘 要】 文章對(duì)現(xiàn)有病毒性肺炎病證結(jié)合模型的動(dòng)物種屬、雌雄選擇、模型構(gòu)建方法及評(píng)價(jià)指標(biāo)4個(gè)方面進(jìn)行了總結(jié)比較，認(rèn)為目前主要研究的病毒性肺炎證型有濕熱證、寒濕證、風(fēng)熱郁肺證、腎陽(yáng)虛證、肝郁脾虛證，在造模方法上主要選用病因模擬法先復(fù)制證型后選用病毒或病毒模擬物誘導(dǎo)疾病模型的造模方法，常選用小鼠作為研究對(duì)象，復(fù)制周期在5～24 d。通過(guò)分析病毒性肺炎病證結(jié)合各造模方法的優(yōu)缺點(diǎn)，對(duì)改進(jìn)完善模型的評(píng)價(jià)指標(biāo)提出建議，同時(shí)為深入研究中醫(yī)藥防治病毒性肺炎具體作用機(jī)制奠定模型基礎(chǔ)，以促進(jìn)病毒性肺炎的臨床研究。

【關(guān)鍵詞】 病毒性肺炎；病證結(jié)合；動(dòng)物模型選擇；模型建立與評(píng)價(jià)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R563.1+9?? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A??? 【文章編號(hào)】1007-8517（2024）09-0033-07

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.09.zgmzmjyyzz202409009

Establishment and Evaluation of Viral Pneumonia Animal Model in Combination of Disease and Syndrome

YANG Shangsong1，2 ZHANG Tingrui1，2 WEN Weibo1，2 LI Qin1，2*

1.Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500，China;

2.Key Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine for Chronic

Diseases in Yunnan Province，Kunming 650500，China

Abstract：

This paper summarized and compared the VPanimal model in the combination of disease and syndrome from four aspects，includingselection of model animal species sexual selection，preparation methods of VP animal model in the combination of disease and syndromeindicators of model evaluationby summarizing studies.Research shows that VP syndrome mainly studied at present includes damp-heat syndrome，cold and wet syndrome，wind and heat depression lung syndrome，kidney Yang deficiency syndrome，liver depression and spleen deficiency syndrome. In the modeling method，the etiology simulation method is mainly used to first copy the syndrome type before the virus or virus mimics were used to induce the disease model，and mice were often selected as the research objects，and the replication cycle was 5 to 24 days. By analyzing the advantages and disadvantages of each modeling method of VP， this study provides suggestions on improving the evaluation index animal model，for further research on prevention and treatment of VP specific mechanism of action of TCM model basis to promote clinical research of VP.

Keywords：Viral Pneumonia；Combination of Disease and Syndrome；Animal Model Selection；Model Establishment and Evaluation

病毒性肺炎（viral pneumonia，VP）是呼吸道病毒感染并蔓延引起的肺實(shí)質(zhì)炎癥。由于病毒具有高度變異性和復(fù)雜的致病機(jī)制等特點(diǎn)，使得疫苗及抗病毒藥物的研發(fā)受到了嚴(yán)重制約。中醫(yī)對(duì)疫病的治療，并不以病原體的確定為先決條件，而是從患者感疫戾之邪后出現(xiàn)的癥狀和體征出發(fā)，進(jìn)行辨證論治。中醫(yī)藥對(duì)于呼吸道病毒感染的防治具有十分重要的意義。

由于中藥制劑在VP治療過(guò)程中具體機(jī)制不明確，加之中藥的使用需要精準(zhǔn)辨證用藥才能有的放矢以提升臨床治療有效率，因此研究簡(jiǎn)單易行，可操作性強(qiáng)，易于復(fù)制的“病證結(jié)合”VP動(dòng)物模型，對(duì)于闡述中藥治療VP具體作用機(jī)制及治療效果，開(kāi)發(fā)新型中藥制劑具有重要的意義。既往研究中發(fā)現(xiàn)不同動(dòng)物的種屬、性別在病理及臨床表現(xiàn)上存在一定差異，對(duì)中醫(yī)證候的復(fù)制具有一定影響，而不同的病證結(jié)合造模方式同樣影響著動(dòng)物模型的建立。本文從動(dòng)物種屬、性別選擇、VP常見(jiàn)證型病證結(jié)合動(dòng)物模型制備方法，模型“證”的評(píng)價(jià)及相關(guān)變化因子評(píng)價(jià)指標(biāo)5大方面對(duì)VP病證結(jié)合動(dòng)物模型進(jìn)行歸納比較研究，為探索更加符合病證結(jié)合的VP動(dòng)物模型提供參考。

1 VP模型動(dòng)物選擇比較

1.1 VP模型動(dòng)物種屬的選擇 VP模型動(dòng)物建立種屬的選擇上遵循與人類(lèi)臨床表現(xiàn)及病理變化更加貼合的動(dòng)物，從而更好地反映藥物在人體治療中的機(jī)制以及疫苗的開(kāi)發(fā)。同時(shí)在模型動(dòng)物的選取上應(yīng)該遵循動(dòng)物可穩(wěn)定復(fù)制、來(lái)源易得且經(jīng)濟(jì)的原則。目前國(guó)內(nèi)外在研究VP時(shí)選擇的動(dòng)物種屬包括小鼠、大鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、豬、貓和犬、雪貂、猿猴等動(dòng)物，其中鼠類(lèi)在VP模型中運(yùn)用最為廣泛。Chen F等［1］給予C57BL/6雄性小鼠氣管緩慢注射Poly （I∶C），3 d后可見(jiàn)支氣管上皮結(jié)構(gòu)破壞、肺實(shí)質(zhì)損傷、嚴(yán)重肺泡破壞和塌陷以及間質(zhì)性水腫，與病毒性肺炎的病理表現(xiàn)一致。小鼠個(gè)體差異小，遺傳譜系清晰，品系純正，價(jià)格相對(duì)低廉，容易獲得，易于飼養(yǎng)，并且更易于采用外部條件構(gòu)建中醫(yī)藥證候模型，但是小鼠不是流感的天然宿主，不能傳播流感病毒，且氣管滴注造模易造成小鼠死亡，造模過(guò)程具有一定的局限性［2］。Huang Z等［3］選用Wister雌性大鼠滴鼻感染呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus， RSV）病毒，造模后可見(jiàn)大鼠精神狀態(tài)差、呼吸急促、支氣管周?chē)装Y浸潤(rùn)、肺葉斑片狀滲出。采用大鼠模型動(dòng)物來(lái)源廣，容易獲得，成模時(shí)間短，但由于大鼠體積相對(duì)較大，證候造模時(shí)間長(zhǎng)，且對(duì)部分病毒缺乏易感性，在VP造模動(dòng)物選擇上沒(méi)有小鼠廣泛。張坤［4］在豚鼠鼻內(nèi)接種H5N1禽流感病毒液后1～5 d可檢測(cè)到病毒的復(fù)制，到第7 d未檢測(cè)到病毒的排除，且癥狀表現(xiàn)不甚明顯，豚鼠對(duì)流感病毒具有高度易感性，成本低，易飼養(yǎng)，可以彌補(bǔ)小鼠間不能傳播的不足［5］，且豚鼠可以在感染后5～7 d清除流感病毒，為宿主利用先天性免疫應(yīng)答機(jī)制清除流感病毒提供了十分理想的動(dòng)物模型。除此之外，中國(guó)倉(cāng)鼠對(duì)多種細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)具有高度敏感性，可作為傳染性疾病研究的候選模型動(dòng)物，廣泛應(yīng)用于傳染病學(xué)研究［6］。且與敘利亞金黃倉(cāng)鼠模型相比，中國(guó)倉(cāng)鼠造模具有臨床癥狀更明顯，遺傳基因特征良好的優(yōu)勢(shì)，但中國(guó)倉(cāng)鼠的研究歷史較短，基礎(chǔ)研究資料相對(duì)稀缺，缺乏特異性強(qiáng)的檢測(cè)試劑盒和方法，國(guó)內(nèi)外應(yīng)用有局限性。

豬是一種研究流感病毒性的良好動(dòng)物模型。Halbur P G和王承宇在豬體內(nèi)接種豬生殖和呼吸綜合征病毒，兩周后出現(xiàn)不同程度的食欲不振、嗜睡和發(fā)熱，并且發(fā)現(xiàn)發(fā)熱有利于病情的恢復(fù)［7-8］。豬與人的氨基酸同源性高達(dá)84.1%，在解剖學(xué)、生理學(xué)、疾病特征等方面與人類(lèi)極為相似［9］。豬作為禽流感的中間宿主，其動(dòng)物模型的研究對(duì)于防治禽流感及疫苗的開(kāi)發(fā)具有重要的價(jià)值，但因其價(jià)格較高，藥物干預(yù)劑量大，操作難度高，用于豬細(xì)胞因子檢測(cè)的方法和試劑的缺乏等均是進(jìn)行豬模型研究的主要障礙。貓和犬與人類(lèi)密切接觸，了解它們對(duì)病毒的易感性對(duì)于控制傳染性疾病較為重要，貓和犬體型大，易感染，且操作難度大，不是常規(guī)的動(dòng)物模型［10-11］。

雪貂是甲型流感病毒（influenza a virus，IAV）感染的理想動(dòng)物，在IAV研究中廣泛應(yīng)用［12］。Kim等［13］報(bào)告通過(guò)鼻腔接種SARS-CoV-2的雪貂模型，8 d后出現(xiàn)體溫升高和病毒復(fù)制的情況，在排泄物中可檢測(cè)到病毒，通過(guò)直接或間接接觸可感染幼小雪貂。雪貂與人類(lèi)唾液酸受體種類(lèi)、呼吸道受體分布相似，對(duì)不同亞型的IAV易感性強(qiáng)，有明顯的和人類(lèi)感染類(lèi)似的臨床體征和癥狀，呼吸道病理變化與人類(lèi)相似，能夠更加真實(shí)地接近人VP的特征等優(yōu)勢(shì)［14］。但是雪貂作為國(guó)家級(jí)保護(hù)動(dòng)物，價(jià)格昂貴不易獲得，飼養(yǎng)條件要求較高，缺少特定的免疫抗體，實(shí)驗(yàn)使用數(shù)量有限，結(jié)果可能存在一定的誤差，不能廣泛應(yīng)用于動(dòng)物模型的構(gòu)建。非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物解剖以及生理結(jié)構(gòu)與人類(lèi)相似，受到了醫(yī)學(xué)科研工作者的青睞。Lu等［15］研究表明恒河猴、食蟹猴對(duì)SARS-CoV-2的感染較為敏感，影像學(xué)變化、肺組織病理改變、病毒載量、抗體水平等變化方面與人體感染相似，并且有自愈的傾向。目前，非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物作為與人類(lèi)遺傳學(xué)最為接近的動(dòng)物，是最有參考價(jià)值的動(dòng)物模型，可適用于發(fā)病機(jī)制的研究，疫苗開(kāi)發(fā)及治療性藥物的評(píng)估，但其價(jià)格極為昂貴，不易獲得，操作難度大，研究數(shù)量少，同樣具有一定的局限性。不同的種屬模型動(dòng)物對(duì)VP的呈現(xiàn)貼合度具有一定差異，選取合適的動(dòng)物制作VP模型，是研究中的重要一環(huán)，在研究中應(yīng)綜合各因素選擇最適宜的動(dòng)物種屬為研究奠定基礎(chǔ)。詳見(jiàn)表1。

1.2 VP模型動(dòng)物雌雄選擇 性別差異對(duì)醫(yī)學(xué)研究具有重要的生物學(xué)意義。既往有研究［16］表明新型冠狀病毒感染肺炎（corna virus disease2019，COVID-19）在男性中發(fā)生率更高，老年男性比女性更容易感染新冠肺炎，重型患者中男性也更為多見(jiàn)。然而，大多數(shù)研究［17］都忽視了性別相關(guān)因素的關(guān)鍵意義，不同種屬和品系的動(dòng)物對(duì)同一致病因素易感性不同，如Wistar大鼠和SD大鼠雌雄間體質(zhì)有明顯的寒熱差異，不同體質(zhì)中醫(yī)證型的轉(zhuǎn)化也有一定的差異［18］。因此，在動(dòng)物模型復(fù)制上需注意性別差異對(duì)中醫(yī)證型和疾病的影響，不同疾病最適宜的證型動(dòng)物種屬還需要進(jìn)一步研究。

2 VP常見(jiàn)證型“病證結(jié)合”動(dòng)物模型制備

目前VP研究比較多的證型包括濕熱證、寒濕證、肺熱證、腎陽(yáng)虛證、肝郁脾虛證。在病證結(jié)合動(dòng)物模型的制備上，多采取復(fù)合制備方法，比如目前濕熱證動(dòng)物模型大多使用“外濕”結(jié)合“內(nèi)濕”的造模方法，可同時(shí)復(fù)合“體質(zhì)”或“外邪”因素，單因素化學(xué)藥物干預(yù)造模較少。

復(fù)合因素造模雖不能完全模擬出中醫(yī)證候發(fā)生機(jī)制，但可反映出大部分中醫(yī)證候表現(xiàn)。通過(guò)方證對(duì)應(yīng)的有效性來(lái)判定證候模型復(fù)制的有效性也是一種模型制備的新思路［19］。對(duì)以上證型“病證結(jié)合”動(dòng)物模型制備方法進(jìn)行比較和評(píng)價(jià)見(jiàn)表2。

3 模型評(píng)價(jià)指標(biāo)

3.1 VP模型證候評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)動(dòng)物模型證候的評(píng)價(jià)，由于無(wú)法通過(guò)問(wèn)診及難以結(jié)合舌脈象對(duì)模型動(dòng)物進(jìn)行四診合參判定具體證型，動(dòng)物的主觀(guān)感受如頭痛、乏力、咽痛無(wú)法得知，咳嗽癥狀也難以表現(xiàn)，故在動(dòng)物模型證候的判定中主要依據(jù)疾病在人中所表現(xiàn)的證候進(jìn)行判定，輔以動(dòng)物一般情況如體質(zhì)量、飲水量、體溫、毛色、活動(dòng)情況等綜合對(duì)VP動(dòng)物的證候進(jìn)行判定。見(jiàn)表3。

4 VP病證結(jié)合動(dòng)物模型不同證型主要相關(guān)因子

判定是否成功建立符合中醫(yī)VP機(jī)制的動(dòng)物模型，大多文獻(xiàn)采用癥狀觀(guān)察如毛色、精神狀況、活動(dòng)度等，以及可測(cè)量的體質(zhì)量、飲水量、體溫等表示病證結(jié)合動(dòng)物模型的建立成功，而這一判斷標(biāo)準(zhǔn)存在一些主觀(guān)偏倚，不夠嚴(yán)謹(jǐn)。應(yīng)該盡可能的多收集客觀(guān)資料，通過(guò)不同證型的主要相關(guān)變化因子檢測(cè)來(lái)客觀(guān)評(píng)價(jià)中醫(yī)證型，同時(shí)，通過(guò)對(duì)“病證結(jié)合”動(dòng)物模型施加相關(guān)中藥方劑干預(yù)后，研究相關(guān)因子變化，闡釋中醫(yī)藥發(fā)生機(jī)制，有機(jī)地將中醫(yī)臨床的有效性和基礎(chǔ)研究的創(chuàng)新性聯(lián)系起來(lái)，形成良性循環(huán)。見(jiàn)表4。

5 結(jié)論

中醫(yī)藥在VP防治中具有理論基礎(chǔ)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)豐富，治療手段多樣化、且多靶點(diǎn)整體調(diào)節(jié)、療效穩(wěn)定等優(yōu)勢(shì)，在新型冠狀病毒肺炎疫情防治中早期介入、全程深度參與，從參與者變成了主力軍［35］。隨著中醫(yī)藥運(yùn)用越來(lái)越廣泛，對(duì)中醫(yī)藥的研究也越發(fā)深入和細(xì)化，凸顯出建立符合中醫(yī)辨證特色的“病證結(jié)合”模型的必要性，既需要具備西醫(yī)病理發(fā)展過(guò)程，也應(yīng)當(dāng)具備中醫(yī)證型特征，從而能全面地反映出中醫(yī)藥作用機(jī)制。目前，在建立符合病證模型的動(dòng)物類(lèi)型選擇、造模方式、時(shí)間及藥物制劑相關(guān)的機(jī)制上，研究者們進(jìn)行了積極地探索和驗(yàn)證。在實(shí)驗(yàn)研究方面目前主要研究的VP證型有濕熱證、寒濕疫毒證、風(fēng)熱郁肺證、腎陽(yáng)虛證、肝郁脾虛證，在造模方法上主要選用內(nèi)因、外因或者化學(xué)試劑聯(lián)合模擬復(fù)制證型后選用病毒或病毒模擬物誘導(dǎo)疾病模型的造模方法。常選用鼠類(lèi)作為研究對(duì)象，復(fù)制周期在5～24 d，造模方式主要以（高脂飼料+人工氣候箱+病毒滴鼻+游泳）、（腹腔注射苯甲酸雌二醇、利血平+病毒滴鼻/點(diǎn)眼）為主。這種模型復(fù)制方法不僅可同時(shí)兼顧VP的西醫(yī)病理和中醫(yī)病機(jī)特征，且對(duì)于闡釋中醫(yī)的“證”和西醫(yī)的“病”更微觀(guān)層面的聯(lián)系及中醫(yī)藥治療VP相關(guān)機(jī)制具有重大的意義。

通過(guò)對(duì)現(xiàn)有的病證結(jié)合VP動(dòng)物模型復(fù)制方法分析發(fā)現(xiàn)仍然存在一些不足：第一，動(dòng)物選擇局限于小鼠、大鼠；第二，現(xiàn)有的病證結(jié)合模型研究集中在濕熱、寒濕等證候模型，缺乏VP早期痰熱郁肺證及恢復(fù)期肺脾氣虛證、氣陰兩虛證病毒感染的動(dòng)物模型，值得繼續(xù)進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)的研究；第三，病證結(jié)合模型復(fù)制時(shí)序問(wèn)題。在病證結(jié)合模型復(fù)制中是在中醫(yī)證型模型復(fù)制基礎(chǔ)上予以生物因素復(fù)制疾病模型，但是在臨床實(shí)際發(fā)病過(guò)程中，疾病和證候并非呈先后發(fā)展順序，且會(huì)發(fā)生證型轉(zhuǎn)化，一病多證；第四，于動(dòng)物與人在種屬上的固有差異，且在動(dòng)物身上只能用望診、聞診，因此尋找客觀(guān)、特異性的癥狀和指標(biāo)成為判斷病證結(jié)合動(dòng)物模型造模成功與否的關(guān)鍵，而證型的評(píng)估缺乏客觀(guān)化指標(biāo)，同一證型缺乏統(tǒng)一的相關(guān)變化因子作為判定標(biāo)準(zhǔn)。各個(gè)造模因素如外濕因素溫度、相對(duì)濕度、誘導(dǎo)時(shí)間，內(nèi)濕造模因素飼料的具體配比等無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，同樣的實(shí)驗(yàn)變量增加，可復(fù)制性低，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度不高。目前，以宏基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)結(jié)合生物信息學(xué)的新形式，通過(guò)分析其高通量數(shù)據(jù)芯片，可以獲得“病證結(jié)合”模型生物學(xué)靶標(biāo)，未來(lái)可以此為導(dǎo)向繼續(xù)建立一系列符合中醫(yī)發(fā)病機(jī)制的VP證候模型，為中醫(yī)藥微觀(guān)深入研究奠定可持續(xù)的模型基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

［1］CHEN F，QU F，JIA Y，et al.Xiao-Chai-Hu Decoction Ameliorates Poly （I：C）-Induced Viral Pneumonia through Inhibiting Inflammatory Response and Modulating Serum Metabolism［J］. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine， 2022，12（7）：1-15.

［2］PANDEY P，AL RUMAIH Z，KELS M J T，et al.Targeting ectromelia virus and TNF/NF-κB or STAT3 signaling for effective treatment of viral pneumonia ［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2022，119（8）：1-12.

［3］HUANG Z， LIU X， WU X， et al. MiR-146a alleviates lung injury caused by RSV infection in young rats by targeting TRAF-6 and regulating JNK/ERKMAPK signaling pathways［J］. Scientific reports，2022，12（1）：1-12.

［4］張坤.豚鼠抗流感病毒相關(guān)因子研究及H9N2亞型禽流感病毒致病力分析［D］.北京：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院， 2013.

［5］MUBAREKA S，LOWEN A C，STEEL J，et al.Transmission of influenza virus via aerosols and fomites in the guinea pig model［J］.The Journal of infectious diseases，2009，199（6）：858-865.

［6］BERTZBACH L D， VLADIMIROVA D， DIETERT K， et al. SARS-CoV-2 infection of Chinese hamsters （Cricetulus griseus） reproduces COVID-19 pneumonia in a well-established small animal model［J］. Transboundary and emerging diseases， 2021， 68（3）：1075-1079.

［7］HALBUR P G， PAUL P S， ANDREWS J J， et al. Experimental transmission of an apparent viral pneumonia in conventional and gnotobiotic pigs［J］.The Veterinary Record，1993，132（11）：263-266.

［8］王承宇. H5N1亞型禽流感精制免疫球蛋白及靶向重組免疫毒素的制備與評(píng)價(jià)研究［D］.長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2007.

［9］FANG X，MU Y，HUANG Z，et al.The sequence and analysis of a Chinese pig genome［J］.Gigascience， 2012， 1（1）：1-11.

［10］GAUDREAULT N N，TRUJILLO J D，CAROSSINO M，et al.SARS-CoV-2 infection， disease and transmission in domestic cats［J］.Emerging microbes & infections，2020，9（1）：2322-2332.

［11］SIT T H C，BRACKMAN C J，IP S M，et al.Infection of dogs with SARS-CoV-2［J］.Nature，2020，586（7831）：776-778.

［12］馬樹(shù)杰，張博，孔宇飛，等.A型流感病毒感染雪貂造模的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2019，27（2）：254-260.

［13］KIM Y I，KIM S G，KIM S M，et al. Infection and rapid transmission of SARS-CoV-2 in ferrets［J］. Cell host & microbe，2020，27（5）：704-709.

［14］BELSER J A，TUMPEY T M. H5N1 pathogenesis studies in mammalian models［J］. Virus research， 2013，178（1）：168-185.

［15］LU S，ZHAO Y， YU W， et al. Comparison of nonhuman primates identified the suitable model for COVID-19［J］. Signal transduction and targeted therapy， 2020， 5（1）： 1-9.

［16］ZHOU F，YU T，DU R，et al.Clinical course and risk factors for mortality of adult inpatients with COVID-19 in Wuhan， China： a retrospective cohort study［J］.The lancet，2020，395（10229）：1054-1062.

［17］NADAL-CASELLAS A，PROENZA A M，et al.Sex-dependent differences in rat hepatic lipid accumulation and insulin sensitivity in response to diet-induced obesity［J］.Biochemistry and Cell Biology，2012，90（2）：164-172.

［18］張宇鵬，周永生，蔣小麗，等.大鼠性別間中醫(yī)體質(zhì)差異的初步評(píng)價(jià)［J］.上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2001，21（4）：229-232.

［19］盧林竹，胡志希，李琳，等.“以方測(cè)證”法在動(dòng)物模型研究中的運(yùn)用［J］.勤云標(biāo)準(zhǔn)版測(cè)試，2017，37（5）：570-573.

［20］趙榮華，郭姍姍，孫靜，等.體外培育牛黃對(duì)人冠狀病毒肺炎濕毒疫模型的機(jī)制研究［J］.中國(guó)藥物警戒，2021，18（12）：1117-1122.

［21］鮑巖巖，時(shí)宇靜，郭姍姍，等.復(fù)方芩蘭口服液對(duì)人冠狀病毒肺炎疫毒襲肺證的治療作用［J］.中國(guó)中藥雜志，2020，45（7）：1473-1480.

［22］孫靜，趙榮華，郭姍姍，等.苦參堿氯化鈉注射液對(duì)人冠狀病毒肺炎寒濕疫毒襲肺證小鼠病證結(jié)合模型的治療作用［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2020，55（3）：366-373.

［23］耿子涵， 鮑巖巖， 包蕾， 等. 葛根湯顆粒對(duì)人冠狀病毒229E寒濕疫毒襲肺證病證結(jié)合小鼠肺炎模型的治療作用［J］. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 2022， 28（19）：34-41.

［24］趙榮華，孫靜，郭姍姍，等.體外培育牛黃對(duì)人冠狀病毒肺炎疫毒襲肺證小鼠病證結(jié)合模型的效用特點(diǎn)［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2021，27（2）：66-73.

［25］ZHANG S J， CHEN Z， LI G W， et al. Effect of the Haoqinqingdan decoction on damp-heat syndrome in rats with influenza viral pneumonia［J］. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine，2013，6（8）：653-657.

［26］畢倩宇，張桂菊，崔有利，等.甘露消毒丹對(duì)濕熱證型病毒性肺炎小鼠模型的多靶點(diǎn)干預(yù)作用［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2019，30（8）：1840-1844.

［27］FU Y J，YAN Y Q，ZHENG X，et al. Effects of Xinjiaxiangruyin on the TLR7 pathway in influenza virus-infected lungs of mice housed in a hygrothermal environment［J］. Chinese Medicine，2019，14（1）：1-13.

［28］季旭明，莊凌云，崔有利，等.三仁湯對(duì)濕熱證型病毒性肺炎小鼠模型的多靶點(diǎn)干預(yù)作用［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊， 2019， 37（6）：1287-1289，1537-1538.

［29］陸平成，龔婕寧，楊進(jìn)，等.仙臺(tái)病毒小鼠肺熱證模型的實(shí)驗(yàn)研究［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1996（3）：22-24.

［30］鄧銳涵，周紫沖，楊艷艷，等.金芩藍(lán)口服液對(duì)雞風(fēng)熱犯肺證的療效研究［J］.中國(guó)獸藥雜志，2021，55（2）：46-52.

［31］尹翠翠，楊勇，李靜，等.腎陽(yáng)虛外感小鼠模型的建立及評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013， 19（10）：253-257.

［32］侯衍豹，李榮榮，楊勇，等.不同配比麻黃細(xì)辛附子湯對(duì)腎陽(yáng)虛外感模型小鼠的干預(yù)作用［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，39（4）：354-357.

［33］張靜.柴胡桂枝湯復(fù)方化學(xué)成分表征及抗肝郁脾虛外感模型藥效及其相關(guān)性研究［D］.濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)， 2019.

［34］李俊蓮，李艷彥，高鵬，等.麻黃加術(shù)湯對(duì)呼吸道合胞病毒感染小鼠血清IL-2，IFN-γ的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（13）：196-199.

［35］李琳，楊豐文，高樹(shù)明，等.張伯禮：防控疫情，中醫(yī)從參與者變成主力軍［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，39（1）：1-3.

（收稿日期：2023-11-14 編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金地區(qū)基金項(xiàng)目（編號(hào)：82260930） ；高海拔地區(qū)中醫(yī)藥治療新冠病毒感染重癥臨床研究，國(guó)家中醫(yī)藥管理局新型冠狀病毒感染中醫(yī)藥應(yīng)急專(zhuān)項(xiàng)課題（編號(hào)：2023ZYLCYJ02-24）；云南省科學(xué)技術(shù)廳中醫(yī)聯(lián)合專(zhuān)項(xiàng)-面上項(xiàng)目（編號(hào)：202101AZ070001-020）；云南省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào)：2023Y0440）。

作者簡(jiǎn)介：楊上松（1998—），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)治則治法。E-mail：1046504205@qq.com

通信作者：李欽（1981—），女，漢族，副教授，博士，研究方向?yàn)樾掳l(fā)突發(fā)傳染病中醫(yī)理論及臨床研究。E-mail：736870541@qq.com