七氟烷后處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究

毛藝錕 王士雷 吳秀云 趙芹 李瑜

［摘要］ ?目的??探討七氟烷后處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注（I/R）損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。

方法選擇SPF級(jí)成年健康雄性SD大鼠80只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（S組）、腦缺血再灌注組（I/R組）、腦I/R+七氟烷后處理組（ISP組）、腦I/R+七氟烷后處理+核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）抑制劑組（ISPB組），每組20只。除S組外，其余組大鼠均用線(xiàn)栓法閉塞大腦中動(dòng)脈2 h并再灌注24 h的方法制備腦I/R損傷大鼠模型（S組大鼠只在大腦中動(dòng)脈下穿線(xiàn)不結(jié)扎）。ISP組大鼠于再灌注即刻吸入3%七氟烷30 min，ISPB組在缺血前30 min腹腔注射N(xiāo)rf2抑制劑鴉膽子苦醇（2 mg/kg），其余處理同ISP組。建模成功后通過(guò)神經(jīng)功能評(píng)分評(píng)估各組大鼠神經(jīng)功能損害程度。隨后獲取大鼠左心室血及腦組織病理切片，以2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色測(cè)定各組大鼠腦梗死體積百分比，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)大鼠血清中炎癥因子白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和氧化應(yīng)激相關(guān)因子丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平，采用免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠腦組織中凋亡相關(guān)蛋白B細(xì)胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相關(guān)聯(lián)x（Bax）、半胱胺酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）及Nrf2信號(hào)通路相關(guān)蛋白Nrf2和血紅素加氧酶1（HO-1）表達(dá)，采用免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠腦組織細(xì)胞核內(nèi)外Nrf2表達(dá)。

結(jié)果與I/R組相比，ISP組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死體積百分比，以及血清IL-1β、TNF-α、MDA水平和腦組織總蛋白Bax、Caspase-3水平均下降（t=5.76～18.39，P<0.05）；血清中SOD水平及腦組織總蛋白Nrf2、HO-1、Bcl-2水平均升高（t=5.73～14.08，P<0.05），Nrf2免疫熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。與ISP組相比，ISPB組神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死體積百分比，以及血清中IL-1β、TNF-α、MDA水平和腦組織總蛋白Bax、Caspase-3水平均升高（t=3.06～8.19，P<0.05）；血清中SOD水平和腦組織總蛋白Nrf2、HO-1、Bcl-2水平均下降（t=2.67～9.01，P<0.05），Nrf2免疫熒光強(qiáng)度減弱。

結(jié)論七氟烷后處理可以通過(guò)激活Nrf2信號(hào)通路抑制氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，減輕大鼠腦I/R損傷。

［關(guān)鍵詞］ ?七氟烷；缺血后處理；腦缺血；再灌注損傷；NF-E2相關(guān)因子2；信號(hào)傳導(dǎo)；大鼠，Sprague-Dawley

［中圖分類(lèi)號(hào)］ ?R619.9;R743.31

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ ?A

Protective effect of sevoflurane postconditioning against cerebral ischemia/reperfusion injury in rats

MAO Yikun， WANG Shilei， WU Xiuyun， ZHAO Qin， LI Yu

（Department of Anesthesiology， The Affiliated Hospital of Qingdao University， Qingdao 266555， China）

;［ABSTRACT］?Objective?To investigate the protective effect of sevoflurane postconditioning against cerebral ischemia/reperfusion （I/R） injury in rats and its mechanism of action.

Methods?A total of 80 specific pathogen-free healthy adult male Sprague-Dawley rats were selected and randomly divided into sham-operation group （S group）， cerebral I/R group （I/R group）， cerebral I/R+sevoflurane postconditioning group （ISP group）， and cerebral I/R+sevoflurane

postconditioning+nuclear factor ery-throid 2-related factor 2 （Nrf2） inhibitor group （ISPB group）， with 20 rats in each group. All rats except those in the S group were used to establish a rat model of cerebral I/R injury using the suture method for occlusion of the middle cerebral artery for 2 h， followed by reperfusion for 24 h， and for the rats in the S group， threading was performed below the middle cerebral artery without ligation. The rats in the ISP group were given inhalation of 3% sevoflurane immediately after reperfusion for 30 min， and those in the ISPB group were given intraperitoneal injection of the Nrf2 inhibitor brusatol （2 mg/kg） at 30 min before ischemia in addition to the treatment in the ISP group. After successful modeling， neurological deficit score was used to eval-

uate the degree of neurological impairment. Left ventricular blood samples and pathological sections of brain tissue were obtained， and 2，3，5-triphenyltetrazolium chloride staining was used to determine the percentage of cerebral infarct volume; enzyme-linked immunosorbent assay was used to measure the serum levels of inflammatory factors （interleukin-1β ［IL-1β］ and tumor necrosis factor-α ［TNF-α］） and oxidative stress-related factors （malondialdehyde ［MDA］ and superoxide dismutase ［SOD］）; Western blotting was used to mea-sure the expression of apoptosis-related proteins （B-cell lymphoma-2 ［Bcl-2］， Bcl-2 related x ［Bax］， and Caspase-3） and Nrf2 signaling pathway-related proteins （Nrf2 and heme oxygenase-1 ［HO-1］） in brain tissue; immunofluorescence assay was used to measure the expression of Nrf2 inside and outside the nucleus of brain tissue cells.

Results?Compared with the I/R group， the ISP group had significant reductions in neurological deficit score， the percentage of cerebral infarct volume， the serum levels of IL-1β， TNF-α， and MDA， and the levels of Bax and Caspase-3 in brain tissue （t=5.76-18.39，P<0.05） and significant increases in the serum level of SOD and the levels of Nrf2， HO-1， and Bcl-2 in brain tissue （t=5.73-14.08，P<0.05）， as well as a significant increase in Nrf2 immunofluorescence intensity. Compared with the ISP group， the ISPB group had significant increases in neurological deficit score， the percentage of cerebral infarct volume， the se-

rum levels of IL-1β， TNF-α， and MDA， and the levels of Bax and Caspase-3 in brain tissue （t=3.06-8.19，P<0.05） and significant reductions in the serum level of SOD and the levels of Nrf2， HO-1， and Bcl-2 in brain tissue （t=2.67-9.01，P<0.05）， as well as a reduction in Nrf2 immunofluorescence intensity.

Conclusion?Sevoflurane postconditioning can inhibit oxidative stress， inflammatory response， and cell apoptosis by activating the Nrf2 signaling pathway， thereby alleviating cerebral I/R injury in rats.

［KEY WORDS］?Sevoflurane; Ischemic postconditioning; Brain ischemia; Reperfusion injury; NF-E2-related factor 2; Signal transduction; Rats， Sprague-Dawley

腦缺血再灌注（I/R）損傷大多發(fā)生在大腦主要?jiǎng)用}閉塞的情況下，缺血后血管再通往往會(huì)給機(jī)體造成更大損害。大量實(shí)驗(yàn)均采用大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）模型來(lái)研究腦I/R的機(jī)制［1］。當(dāng)前，缺血性腦卒中在臨床中的發(fā)生率和致殘率仍較高，其病理?yè)p傷所涉及的分子機(jī)制復(fù)雜多樣，例如炎癥反應(yīng)、細(xì)胞自噬、線(xiàn)粒體自噬、氧化應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、鈣超載、血腦屏障破壞等［2-3］，因此臨床上目前缺少針對(duì)腦I/R損傷的有效治療方案。

核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）是堿性亮氨酸拉鏈蛋白家族的成員之一，也是維持組織和細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡的重要防御因子。有研究表明在腦I/R損傷等中樞神經(jīng)系統(tǒng)急性損傷的病理過(guò)程中，Nrf2發(fā)揮了重要的神經(jīng)保護(hù)作用，其中包括抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，減輕炎癥反應(yīng)，抑制細(xì)胞凋亡等［4］。既往有研究證實(shí)，腦組織中Nrf2的上調(diào)可一定程度改善缺血后腦神經(jīng)損傷［5］。七氟烷作為吸入麻醉劑，因其起效快、誘導(dǎo)平穩(wěn)等優(yōu)點(diǎn)，在臨床得到廣泛應(yīng)用。許多研究表明I/R開(kāi)始時(shí)對(duì)缺血組織進(jìn)行七氟烷處理（即七氟烷后處理）具有抑制活性氧的過(guò)度釋放、抑制氧化應(yīng)激平衡失調(diào)、減輕炎癥反應(yīng)、防止細(xì)胞內(nèi)鈣超載、減少神經(jīng)元凋亡和穩(wěn)定神經(jīng)細(xì)胞膜等神經(jīng)保護(hù)作用［6-7］，但七氟烷保護(hù)作用的具體機(jī)制尚未完全清楚。本研究擬通過(guò)建立大鼠MCAO模型，探討七氟烷對(duì)大鼠腦I/R損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

SPF級(jí)成年健康雄性SD大鼠80只（體質(zhì)量230～250 g）購(gòu)自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，鴉膽子苦醇購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色液購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，血清超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）ELISA試劑盒購(gòu)江蘇蘇酶科生物科技有限公司，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）的ELISA試劑盒購(gòu)自武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司，B細(xì)胞淋巴瘤-2（Bcl-2）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，Nrf2及Bcl-2相關(guān)聯(lián)x（Bax）購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）購(gòu)買(mǎi)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，β-actin購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.2 分組與處理

將大鼠飼養(yǎng)在SPF動(dòng)物房中，12 h/12 h晝夜環(huán)境，溫度控制在（22±2）℃，可以自由獲取水和食物。按簡(jiǎn)單隨機(jī)分組將大鼠分為假手術(shù)組（S組）、腦I/R組（I/R組）、腦I/R+七氟烷后處理組（ISP組）、腦I/R+七氟烷后處理+Nrf2抑制劑組（ISPB組），每組20只。

將各組大鼠禁食12 h，麻醉后仰臥位固定，常規(guī)暴露并分離大鼠的右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈。動(dòng)脈夾夾閉頸外動(dòng)脈，結(jié)扎頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，間隔為1 cm左右。I/R、ISP及ISPB組大鼠于兩結(jié)扎點(diǎn)中間動(dòng)脈段上剪一小口，將備好的線(xiàn)栓插入至大腦中動(dòng)脈起始處，線(xiàn)栓插入深度為17～18 mm，S組大鼠結(jié)扎中間不做處理，結(jié)扎消毒后縫合各組大鼠組織皮膚。MCAO 2 h后將線(xiàn)栓拔出，使頭端退到頸總動(dòng)脈，即可恢復(fù)血流再灌注，大鼠出現(xiàn)偏癱癥狀視為造模成功。ISP組大鼠再灌注開(kāi)始時(shí)暴露于3%七氟烷30 min，ISPB組大鼠MCAO前30 min腹腔注射N(xiāo)rf2信號(hào)通路抑制劑鴉膽子苦醇（溶于1 mL生理鹽水中）2 mg/kg，再灌注開(kāi)始時(shí)暴露于3%七氟烷30 min。

1.3 神經(jīng)功能缺損評(píng)分

再灌注24 h后，每組中隨機(jī)選取4只大鼠，參照Z(yǔ)ea-longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［8］評(píng)估神經(jīng)功能缺損情況。

1.4 腦梗死體積百分比測(cè)定

再灌注24 h后麻醉各組大鼠，左心室采血（每只3～5 mL），置于離心機(jī)中以3 500 r/min離心15 min，取上清液保存?zhèn)溆?；隨后使用PBS對(duì)大鼠進(jìn)行心臟灌注，待大鼠肺和口唇黏膜等由紅潤(rùn)變?yōu)樯n白，心臟和肝臟等由深紅變?yōu)闇\紅時(shí)結(jié)束灌注，冰上斷頭取腦備用。每組隨機(jī)選取3只大鼠的腦組織，置于－20 ℃冰箱冷凍30 min后，由前向后間隔2 mm進(jìn)行冠狀切片，共切5片。將切片置于2% TTC染色液中，37 ℃下避光孵育30 min，切片變色后將其置于4%多聚甲醛中固定并拍照。用Image J軟件計(jì)算每層的梗死體積，并計(jì)算腦梗死體積百分比。腦梗死體積百分比（%）=梗塞體積/（梗塞體積+非梗塞體積）×100%。

1.5酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)大鼠血清中氧化應(yīng)激相關(guān)因子SOD、MDA以及炎癥因子TNF-α、IL-1β水平 每組隨機(jī)采集4只大鼠的血清，按照ELISA試劑盒按照說(shuō)明書(shū)要求測(cè)定各組大鼠血清中SOD、MDA、TNF-α及IL-1β水平。

1.6免疫印跡法檢測(cè)腦組織中Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3表達(dá)

每組隨機(jī)選取4只大鼠腦組織，切片后選取梗死部位，加入含蛋白酶抑制劑的組織裂解液將腦組織裂解，并提取腦梗死區(qū)域總蛋白。使用BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度，上樣30 μg蛋白，80 V下于凝膠中電泳30 min，待蛋白到達(dá)分離膠后，調(diào)整為120 V下于凝膠中電泳60 min；通過(guò)濕轉(zhuǎn)法按290 mA、120 min將蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜，用含體積分?jǐn)?shù)0.05脫脂奶粉的TBST緩沖液于室溫封閉2 h，洗膜后分別加入Nrf2（1∶5 000）、Bax（1∶15 000）、Bcl-2（1∶2 000）及Caspase-3（1∶1 000）一抗，4 ℃下孵育過(guò)夜；次日加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔多克隆抗體（1∶5 000）或者抗鼠多克隆抗體（1∶5 000）室溫孵育1.5 h，條帶上滴加ECL化學(xué)發(fā)光液置于凝膠成像儀顯影。用Image J軟件測(cè)定蛋白條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值和內(nèi)參β-actin（1∶1 000）條帶灰度值比值代表各目的蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。

1.7免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腦組織中Nrf2表達(dá)

每組隨機(jī)選取4只大鼠腦組織，在冠狀平面由前向后以4 μm厚切片，石蠟包埋并脫水，用EDTA抗原修復(fù)緩沖液將脫水后的組織切片進(jìn)行抗原修復(fù)；再用體積分?jǐn)?shù)0.10的驢血清封閉30 min，甩干封閉液后加入Nrf2一抗（1∶500），4 ℃下孵育過(guò)夜；洗滌之后再加入Cy3標(biāo)記山羊抗兔二抗（1∶300），避光室溫孵育1 h；再加入DAPI染液，避光室溫下孵育10 min，甩干后封片，將切片置于熒光顯微鏡下觀(guān)察并采集圖像。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 8.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以 ±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Tukey檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) ?果

2.1 四組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分和腦梗死體積百分比比較

S組、I/R組、ISP組及ISPB組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分分別為0、（3.70±0.61）、（1.10±0.10）、（2.43±0.49）分，以上四組腦梗死體積百分比分別為0、（33.44±2.55）%、（12.50±0.88）%和（24.47±2.67）%。I/R組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分及腦梗死體積百分比均顯著高于S組及ISP組（F=49.67、176.20，t=7.31～22.74，P<0.05），ISP組神經(jīng)功能缺損評(píng)分以及腦梗死體積百分比顯著低于ISPB組（t=4.59、7.37，P<0.05）。見(jiàn)圖1。

2.2四組大鼠血清中IL-1β、TNF-α、MDA、SOD水平比較

I/R組大鼠血清中IL-1β、TNF-α和MDA水平顯著高于S、ISP組（F=60.58～126.70，t=6.16～28.74，P<0.05），SOD水平顯著低于S、ISP組（F=208.00，t=14.08、21.90，P<0.05）；ISP組IL-1β、TNF-α和MDA水平顯著低于ISPB組（t=3.06～8.19，P<0.05），SOD水平則顯著高于ISPB組（t=7.79，P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.3四組大鼠腦組織當(dāng)中Bax、Bcl-2、Caspase-3、Nrf2、HO-1蛋白水平比較

I/R組大鼠腦組織中Bax、Caspase-3蛋白的水平顯著高于S、ISP組（F=26.05、31.95，t=5.44～12.19，P<0.05），Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白水平低于S組、ISP組（F=23.55～65.14，t=5.73～11.43，P<0.05）；ISP組Bax、Caspase-3蛋白水平顯著低于ISPB組（t=3.06、3.41，P<0.05），Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白水平顯著高于ISPB組（t=2.67～9.01，P<0.05）。見(jiàn)表2、圖2。

2.4四組大鼠腦組織中Nrf2表達(dá)的比較

免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，ISP組大鼠腦組織中Nrf2免疫熒光強(qiáng)度高于S、ISP及ISPB組。見(jiàn)圖3。

3 討 ?論

腦I/R損傷會(huì)造成機(jī)體一系列應(yīng)激反應(yīng)，如氧化應(yīng)激平衡失調(diào)、炎癥反應(yīng)發(fā)生、細(xì)胞出現(xiàn)凋亡和自噬等。既往研究表明，I/R模型造模前30 min腹腔注射N(xiāo)rf2抑制劑鴉膽子苦醇會(huì)減少腦組織中Nrf2的表達(dá)［9］，本課題組前期的預(yù)實(shí)驗(yàn)也得出了同樣結(jié)論，因此本研究參考以上結(jié)論設(shè)置了ISPB組。

本研究結(jié)果顯示，與ISP組相比，ISPB組大鼠的神經(jīng)功能缺損評(píng)分增加，腦梗死體積百分比增加，血清中MDA、IL-1β以及TNF-α水平均升高，SOD水平降低，腦組織總蛋白Bax、Caspase-3水平升高，Bcl-2、Nrf2和HO-1水平降低，腦組織Nrf2免疫熒光強(qiáng)度下降，提示七氟烷后處理可以通過(guò)激活Nrf2信號(hào)通路，從而抑制氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，減輕大鼠腦I/R損傷。

正常情況下，機(jī)體內(nèi)活性氧（ROS）的生成與細(xì)胞抗氧化機(jī)制相平衡。當(dāng)暴露于有害刺激時(shí)，ROS會(huì)大量生成而打破平衡，導(dǎo)致氧化應(yīng)激平衡失調(diào)。氧化應(yīng)激通過(guò)多種不同途徑參與腦缺血損傷，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，損害細(xì)胞正常功能，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞壞死和凋亡?？寡趸到y(tǒng)的激活是機(jī)體對(duì)各類(lèi)氧化損傷的反應(yīng)機(jī)制，以減少氧化應(yīng)激帶來(lái)的損害。SOD和谷胱甘肽等通過(guò)維持細(xì)胞和組織的氧化還原平衡發(fā)揮抗氧化作用［10］。SOD和MDA是衡量氧化應(yīng)激反應(yīng)的兩個(gè)重要的指標(biāo)，SOD能夠清除體內(nèi)的氧自由基，MDA則是衡量膜脂過(guò)氧化程度的常用指標(biāo)之一［8］。ROS能夠?qū)е录?xì)胞膜脂質(zhì)的過(guò)氧化，生成MDA，進(jìn)而加重血腦屏障等結(jié)構(gòu)的損傷［11］。腦I/R損傷可以引起炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，包括氧化應(yīng)激、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)和炎癥因子產(chǎn)生等。被激活的免疫細(xì)胞中促炎M1表型小膠質(zhì)細(xì)胞能夠釋放TNF-α、IL-1β和IL-6等炎癥因子，加劇腦損傷［12-13］。作為堿性亮氨酸家族成員之一，Nrf2可結(jié)合抗氧化反應(yīng)元件激活轉(zhuǎn)錄因子（如HO-1等），募集炎癥細(xì)胞促進(jìn)抗炎過(guò)程，Nrf2的上調(diào)能夠抑制TNF-α和IL-1β等炎癥因子的過(guò)度產(chǎn)生，并遏制慢性炎癥性疾病進(jìn)程。Nrf2也參與細(xì)胞及組織氧化還原平衡的調(diào)節(jié)過(guò)程，Nrf2能夠激活多種抗氧化蛋白的表達(dá)，減少ROS導(dǎo)致的細(xì)胞損傷［14］。有研究表明，腦I/R損傷后，Nrf2被激活，一系列抗氧化基因開(kāi)始轉(zhuǎn)錄，HO-1等表達(dá)增加［15］。HO-1可催化氧化性血紅素分解代謝的關(guān)鍵步驟［16］，增強(qiáng)腦組織對(duì)缺血導(dǎo)致氧化損傷的耐受程度［17］。既往研究表明，Nrf2和HO-1的表達(dá)能夠抑制細(xì)胞炎癥反應(yīng)，在腦I/R過(guò)程中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用［18］。本研究中，與I/R組相比，ISP組大鼠血清中MDA水平下降，SOD水平上升，血清中IL-1β和TNF-α水平下降，腦組織總蛋白Nrf2和HO-1水平上升，腦組織Nrf2免疫熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，表明在腦I/R損傷過(guò)程中，七氟烷后處理激活了大鼠Nrf2信號(hào)通路，減弱了I/R導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)，并在一定程度上抑制了氧化應(yīng)激反應(yīng)。

I/R過(guò)程可通過(guò)細(xì)胞凋亡導(dǎo)致細(xì)胞死亡，而細(xì)胞凋亡則導(dǎo)致缺血組織產(chǎn)生大量炎癥反應(yīng)［19］。細(xì)胞凋亡分為內(nèi)源性和外源性?xún)煞N途徑，其中外源性途徑是指在病理?xiàng)l件下，細(xì)胞膜表面被激活的死亡配體與受體結(jié)合誘發(fā)的一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)。腦I/R損傷引起的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激能夠激活巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，其與細(xì)胞表面Toll樣受體結(jié)合后，激活Caspase-8，Caspase-8進(jìn)一步激活Caspase-3，引發(fā)外源性細(xì)胞凋亡［20］。細(xì)胞內(nèi)部的多種因素如DNA損傷、存活因子缺少或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等均可引起內(nèi)源性凋亡，促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2是內(nèi)源性凋亡途徑中的關(guān)鍵蛋白，其平衡在I/R誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起關(guān)鍵作用［21］。Nrf2信號(hào)通路可通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡在I/R過(guò)程中起到腦保護(hù)作用，Nrf2可誘導(dǎo)抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)并且抑制Bax易位至線(xiàn)粒體，從而降低細(xì)胞色素c的釋放。另外，Nrf2受體的依賴(lài)性激活能夠通過(guò)抑制Caspase-3的激活而減少腦缺血造成的細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示，ISP組較I/R組大鼠腦組織總蛋白Bax、Caspase-3水平下降，Bcl-2水平上升，表明七氟烷后處理抑制了I/R誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。

綜上所述，七氟烷后處理可以通過(guò)激活Nrf2信號(hào)通路抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡，減輕大鼠腦I/R損傷。

倫理批準(zhǔn)和動(dòng)物權(quán)利聲明： 本研究涉及的所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均已通過(guò)青島大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)（文件號(hào)AH-QU-MAL20220218）。所有實(shí)驗(yàn)過(guò)程均遵照《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用指南》的條例進(jìn)行。

作者聲明： 毛藝錕、王士雷、李瑜參與了研究設(shè)計(jì)；毛藝錕、王士雷、吳秀云、趙芹、李瑜參與了論文的寫(xiě)作和修改。所有作者均閱讀并同意發(fā)表該論文，且均聲明不存在利益沖突。

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（本文編輯 范睿心 厲建強(qiáng)）