朱麗 劉麗芳
基金項(xiàng)目?深圳市寶安區(qū)科技計(jì)劃基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(No.20200514112429001)
作者單位?1.深圳市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院(廣東深圳 ?518000),E-mail:a13712296366@126.com;2.贛南醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院
引用信息?朱麗,劉麗芳.miR-23a-3p、ZNF395水平與妊娠期高血壓病人胎兒生長受限的關(guān)系[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2024,22(7):1306-1309.
摘要?目的:探討妊娠期高血壓病人胎盤組織微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)、鋅指蛋白395(ZNF395)水平與胎兒生長受限的關(guān)系。方法:選取120例妊娠期高血壓病人作為研究對象,根據(jù)孕期胎兒生長狀況將其分為正常對照組(95例)和胎兒生長受限組(25例)。采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)法檢測胎盤組織中miR-23a-3p表達(dá)水平,免疫組化法檢測ZNF395蛋白表達(dá)水平,收集新生兒體重、胎盤重量等一般資料;采用Pearson法及Spearman法分析胎兒生長受限病人胎盤組織miR-23a-3p、ZNF395水平與新生兒體重、胎盤重量的相關(guān)性;采用單因素及多因素Logistic回歸分析胎兒生長受限的影響因素。結(jié)果:胎兒生長受限組胎盤組織ZNF395蛋白陽性率、新生兒體重、胎盤重量低于正常對照組,miR-23a-3p水平高于正常對照組(P<0.05)。胎兒生長受限病人胎盤組織miR-23a-3p與ZNF395水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05);新生兒體重、胎盤重量與miR-23a-3p呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),與ZNF395呈正相關(guān)(P<0.05)。miR-23a-3p是胎兒生長受限的獨(dú)立危險因素(P<0.05),ZNF395是胎兒生長受限的保護(hù)因素(P<0.05)。結(jié)論:胎兒生長受限病人胎盤組織中miR-23a-3p高表達(dá),ZNF395低表達(dá),miR-23a-3p可能通過下調(diào)ZNF395表達(dá)影響胎兒生長發(fā)育。
關(guān)鍵詞?妊娠期高血壓;胎盤組織;胎兒生長受限;微小RNA-23a-3p;鋅指蛋白395
doi:10.12102/j.issn.1672-1349.2024.07.027
胎兒生長受限是產(chǎn)科常見妊娠合并癥之一,指胎兒在母體內(nèi)因各種因素導(dǎo)致其生長受到限制而未能到達(dá)其應(yīng)表現(xiàn)出的生長速率,從而使胎兒致殘率和病死率增高,甚至?xí)黾犹撼赡旰蟮幕疾÷剩?]。妊娠期高血壓孕產(chǎn)婦易合并胎兒生長受限,故近年來已引起高度關(guān)注[2]。滋養(yǎng)細(xì)胞侵入異常、胎盤血供異常均是影響胎兒生長發(fā)育的因素[3]。微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)參與細(xì)胞發(fā)育的各個階段,其中包括增殖、侵襲、遷移、凋亡[4]。鋅指蛋白395(zinc finger protein 395,ZNF395)可參與腫瘤進(jìn)展,且有研究表明ZNF395與胎兒生長發(fā)育有關(guān)[5-6]。本研究前期通過生物信息學(xué)預(yù)測網(wǎng)站miRDB(http://mirdb.org/cgi-bin/search.cgi)預(yù)測發(fā)現(xiàn),miR-23a-3p與ZNF395存在靶向結(jié)合位點(diǎn)。推測miR-23a-3p可能通過靶向ZNF395調(diào)控胎兒生長發(fā)育。因此,本研究主要探討妊娠期高血壓病人胎盤組織miR-23a-3p、ZNF395水平與胎兒生長受限的關(guān)系,以期為胎兒生長受限提供基因修飾靶點(diǎn)。
1?對象與方法
1.1?一般資料
選取我院2020年6月—2022年6月收治的120例妊娠期高血壓病人作為研究對象,年齡25~33(29.06±3.46)歲。根據(jù)胎兒生長狀況將孕婦分為正常對照組(95例)和胎兒生長受限組(25例)。納入標(biāo)準(zhǔn):1)符合妊娠期高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],胎兒生長受限組符合胎兒生長受限診斷標(biāo)準(zhǔn)(新生兒體重不足同期新生兒體重平均值的90%或足月分娩新生兒體重低于2.5 kg)[8],正常對照組以《婦產(chǎn)科學(xué)》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)為參考(足月新生兒體重>2.5 kg且<4.0 kg);2)孕周≥37周;3)病歷資料齊全;4)均為單胎頭位妊娠。排除標(biāo)準(zhǔn):1)胎兒伴有宮內(nèi)感染性疾病或先天性心臟病等疾??;2)孕婦妊娠期間存在飲酒及吸煙史,或依從性較差者;3)孕婦妊娠期間合并前置胎盤、膽汁淤積等其他妊娠內(nèi)科合并癥。本研究經(jīng)我院臨床研究倫理委員會批準(zhǔn),符合倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn),病人知情同意并簽署知情同意書。
1.2?主要試劑與儀器
免疫組化試劑盒(貨號:YDDEF001)購自上海羽哚生物科技有限公司;ZNF395抗體(貨號:340163.000)購自艾美捷科技有限公司;RNA提取試劑盒(貨號:R1200-100)購自北京索萊寶科技有限公司;qPCR SYBR Green Master Mix(貨號:YB11201ES03)購自上海鈺博生物科技有限公司;反轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號:YT9036)購自北京伊塔生物科技有限公司;實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)儀(型號:CFX384)購自美國Bio-Rad公司。
1.3?研究方法
1.3.1?樣品采集及保存
采集受試者新鮮胎盤,無菌操作取胎盤滋養(yǎng)層組織1 cm×1 cm×1 cm(臍帶附著處至胎盤另一面中央?yún)^(qū)1/2處),放入經(jīng)焦炭酸二乙酯處理的冷凍管中,保存待測。
1.3.2?miR-23a-3p表達(dá)水平測定
采用RNA提取試劑盒及反轉(zhuǎn)錄試劑盒提取胎盤組織總RNA后反轉(zhuǎn)錄為cDNA,具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。采用qRT-PCR儀對miR-23a-3p及其內(nèi)參進(jìn)行擴(kuò)增,引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列見表1。反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性5 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,40個循環(huán)。qRT-PCR反應(yīng)體系:cDNA(50 ng/μL)2 μL,正反向引物(10 μmol/L)各0.8 μL,qPCR SYBR Green Master Mix 10 μL,雙蒸水(ddH2O)6.4 μL。每份樣品均設(shè)3個重復(fù)孔,采用2-△△CT法計(jì)算胎盤組織miR-23a-3p相對表達(dá)量。
1.3.3?ZNF395蛋白水平測定
將胎盤組織標(biāo)本采用4%多聚甲醛固定、石蠟包埋、連續(xù)切片,采用免疫組織化學(xué)法檢測胎盤組織ZNF395蛋白表達(dá)水平,具體染色方法按照通用免疫組化試劑盒說明書進(jìn)行操作。隨機(jī)選5個高倍鏡視野觀察(計(jì)數(shù)200個細(xì)胞),由2名高年資的病理醫(yī)師采用半定量法進(jìn)行評分,按陽性細(xì)胞比例計(jì)分,陽性細(xì)胞比例0~<26%計(jì)1分,26%~<51%計(jì)2分,51%~75%計(jì)3分,>75%計(jì)4分;按染色強(qiáng)度計(jì)分:棕褐色計(jì)3分,棕黃色計(jì)2分,淺黃色計(jì)1分,無色計(jì)0分。2次評分乘積≤2分為陰性表達(dá),>2分為陽性表達(dá)。
1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。定量資料符合正態(tài)分布,用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩組間比較行t檢驗(yàn);定性資料采用例數(shù)、百分比(%)表示,組間比較行χ2檢驗(yàn);采用Pearson法及Spearman法分析胎兒生長受限病人胎盤組織miR-23a-3p、ZNF395水平與新生兒體重、胎盤重量的相關(guān)性;采用單因素及多因素Logistic回歸分析法分析胎兒生長受限的影響因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2?結(jié)?果
2.1?兩組臨床資料比較
兩組孕婦年齡、孕前體質(zhì)指數(shù)(BMI)、孕中期BMI增加、孕周、分娩史、新生兒性別、孕期羊水量異常情況比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。
2.2?兩組新生兒體重及胎盤重量比較
胎兒生長受限組新生兒體重、胎盤重量低于正常對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表3。
2.3?兩組胎盤組織miR-23a-3p、ZNF395蛋白水平比較
胎兒生長受限組胎盤組織miR-23a-3p水平高于正常對照組,ZNF395蛋白陽性率低于正常對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表4。
2.4?胎兒生長受限病人胎盤組織中miR-23a-3p、ZNF395水平與新生兒體重、胎盤重量的相關(guān)性
相關(guān)分析結(jié)果顯示,胎兒生長受限病人胎盤組織miR-23a-3p與ZNF395水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.582,P<0.05);新生兒體重、胎盤重量與miR-23a-3p呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.504,-0.527,P均<0.05),與ZNF395 呈正相關(guān)(r值分別為0.489,0.513,P均<0.05)。
2.5?胎兒生長受限影響因素的單因素及多因素Logistic回歸分析
以是否存在胎兒生長受限為因變量,以miR-23a-3p、ZNF395、年齡、孕前BMI、孕中期BMI增加、孕周、分娩史、新生兒性別、孕期羊水量異常為自變量,進(jìn)行單因素Logistic回歸分析,以單因素分析結(jié)果中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)miR-23a-3p、ZNF395、孕期羊水量異常為自變量,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,miR-23a-3p是影響胎兒生長受限的獨(dú)立危險因素(P<0.05),ZNF395是影響胎兒生長受限的保護(hù)因素(P<0.05)。詳見表5、表6。
3?討?論
妊娠期高血壓是婦產(chǎn)科常見病和多發(fā)病,其病因尚未完全闡明,但重度妊娠期高血壓病人體內(nèi)小動脈存在痙攣的情況,會導(dǎo)致胎盤血流灌注不足進(jìn)而致使胎兒宮內(nèi)生長受限[9-10]。胎兒生長受限不僅對新生兒生長發(fā)育造成影響,還可能會對心血管及大腦等系統(tǒng)發(fā)育產(chǎn)生不利影響,增加孕產(chǎn)婦痛苦,嚴(yán)重影響優(yōu)生優(yōu)育,同時給家庭和社會帶來嚴(yán)重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)[11-12]。因此,尋找相關(guān)基因修飾靶點(diǎn),進(jìn)而及時采取個體化治療措施,可能是改善胎兒生長受限、降低疾病發(fā)生率的有效措施。
miRNA主要通過與靶基因特異性配對結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)性調(diào)控靶基因表達(dá)[13]。miR-23表達(dá)參與骨骼肌的發(fā)育[14]。miR-23a是miR-23的一種亞型,也是腫瘤研究中的明星分子,一般作為致癌基因促進(jìn)癌細(xì)胞生長、侵襲轉(zhuǎn)移[15-16]。ZNF395是鋅指蛋白家族的成員,是一個核質(zhì)穿梭轉(zhuǎn)錄因子,最初被鑒定為調(diào)控人乳頭狀瘤病毒的轉(zhuǎn)錄因子,參與細(xì)胞生長和凋亡[17-18]。根據(jù)胎兒生長受限診斷標(biāo)準(zhǔn)將本研究中120例妊娠期高血壓孕婦分為胎兒生長受限組和正常對照組,結(jié)果顯示,胎兒生長受限組胎盤組織miR-23a-3p水平高于正常對照組,ZNF395蛋白陽性率水平低于正常對照組,且miR-23a-3p是胎兒生長受限的獨(dú)立危險因素,ZNF395是胎兒生長受限的保護(hù)因素。ZNF395表達(dá)趨勢與曹文紅等[6]研究結(jié)果一致。提示胎盤組織中miR-23a-3p、ZNF395的表達(dá)差異可能與胎兒生長受限的發(fā)生具有一定的相關(guān)性,其機(jī)制可能為部分妊娠期高血壓病人血流高阻低排導(dǎo)致子宮有效灌注壓降低,內(nèi)皮細(xì)胞受損,miR-23a-3p表達(dá)量升高,miR-23a-3p在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)性調(diào)控靶基因ZNF395使其低表達(dá),進(jìn)而影響滋養(yǎng)細(xì)胞的正常侵入和遷移,造成胚胎發(fā)育異常,最終影響胎兒生長發(fā)育,導(dǎo)致胎兒生長受限;亦或是miR-23a-3p通過抑制ZNF395表達(dá),影響子宮血流動力學(xué),影響胎盤血供,進(jìn)而影響胎兒生長。此外,相關(guān)性分析結(jié)果顯示,胎兒生長受限病人胎盤組織miR-23a-3p與ZNF395水平呈負(fù)相關(guān),且二者與新生兒體重、胎盤重量均有相關(guān)性。進(jìn)一步提示miR-23a-3p可能是通過抑制ZNF395表達(dá),抑制胎盤尤其是滋養(yǎng)細(xì)胞的發(fā)育,進(jìn)而造成胎兒發(fā)育受限。提示臨床研究中應(yīng)密切監(jiān)測妊娠期高血壓孕婦胎兒的宮內(nèi)情況及miR-23a-3p、ZNF395水平。
綜上所述,胎兒生長受限病人胎盤組織中miR-23a-3p表達(dá)水平升高,ZNF395表達(dá)水平降低,二者均與新生兒體重、胎盤重量相關(guān),且是胎兒生長受限的影響因素。miR-23a-3p可能通過負(fù)向調(diào)控ZNF395表達(dá)參與胎兒生長受限過程,miR-23a-3p、ZNF395可能是改善胎兒生長受限的基因修飾靶點(diǎn)。但仍需進(jìn)一步加大樣本量來驗(yàn)證miR-23a-3p、ZNF395基因的臨床應(yīng)用價值及其影響胎兒生長受限的分子基礎(chǔ)。
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(收稿日期:2022-07-21)
(本文編輯王麗)