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    基于高通量基因表達數(shù)據(jù)庫及生物信息學對坐骨神經(jīng)痛差異表達基因的分析研究

    2024-05-09 07:21:24曲艷平賀文廷王旭董浩范智東
    大醫(yī)生 2024年5期
    關(guān)鍵詞:生物信息學

    曲艷平 賀文廷 王旭 董浩 范智東

    基金項目:云南省科技廳科學研究基金項目(編號:2023Y0966)

    作者簡介:曲艷平,碩士研究生,醫(yī)師,研究方向:慢性神經(jīng)病理性疼痛的診療。

    通信作者:范智東,大學本科,主任醫(yī)師,研究方向:臨床麻醉學。E-mail:fanzhidong68@163.com

    【摘要】目的 基于高通量基因表達(GEO)數(shù)據(jù)庫及生物信息學篩選坐骨神經(jīng)痛相關(guān)差異表達基因(DEGs),分析其生物學功能,為臨床治療坐骨神經(jīng)痛提供參考。方法 通過GEO數(shù)據(jù)庫獲取坐骨神經(jīng)痛基因芯片(GSE124272)數(shù)據(jù)集,經(jīng)仙桃學術(shù)軟件異質(zhì)性分析獲取坐骨神經(jīng)痛相關(guān)DEGs,對坐骨神經(jīng)痛相關(guān)DEGs進行基因本體論(GO)、京都基因與基因組百科全書(KEGG)的通路富集分析。借助Cytoscape軟件實施蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)分析獲取關(guān)鍵基因,經(jīng)轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)專用數(shù)據(jù)庫(TRRUST)確定關(guān)鍵基因的主要調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子及相應(yīng)的調(diào)節(jié)關(guān)系。結(jié)果 415個坐骨神經(jīng)痛相關(guān)DEGs經(jīng)PPI分析共獲取15個關(guān)鍵基因,經(jīng)TRRUST確定共12個TF協(xié)同參與檢查點激酶1(CHEK1)、含桿狀病毒IAP重復(fù)序列蛋白5(BIRC5)、細胞周期蛋白B2(CCNB2)、胸苷酸合成酶(TYMS)、細胞周期蛋白B1(CCNB1)關(guān)鍵基因的調(diào)控。結(jié)論 CHEK1、BIRC5、CCNB2、TYMS、CCNB1可作為坐骨神經(jīng)痛的新治療靶點和預(yù)防標志物。

    【關(guān)鍵詞】高通量基因表達數(shù)據(jù)庫;生物信息學;坐骨神經(jīng)痛;差異表達基因

    【中圖分類號】R614 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-2665.2024.05.0041.03

    DOI:10.3969/j.issn.2096-2665.2024.05.014

    坐骨神經(jīng)痛是慢性神經(jīng)病理性疼痛中常見的周圍神經(jīng)痛,其主要表現(xiàn)為坐骨神經(jīng)循環(huán)和分布區(qū)域的持續(xù)性或陣發(fā)性疼痛。有研究表明,45%的坐骨神痛病人癥狀會持續(xù)12個月,多發(fā)生于40~60歲人群[1]。該疾病不僅降低了患者晚年生活質(zhì)量,也給社會帶來嚴重的經(jīng)濟負擔。坐骨神經(jīng)痛的發(fā)病機制可能與坐骨神經(jīng)根或其支配的感覺神經(jīng)節(jié)受壓迫與扭曲有關(guān),也可能與局部炎性細胞因子的高表達有關(guān)。本研究基于高通量基因表達(gene expression omnibus,GEO)數(shù)據(jù)庫及生物信息學,對8例坐骨神經(jīng)痛患者和8例健康人的基因數(shù)據(jù)進行分析,旨在了解坐骨神經(jīng)痛的發(fā)病機制,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 數(shù)據(jù)的來源與獲取 在GEO數(shù)據(jù)庫點擊“GEO Data Sets”,輸入“SCIATICA”,根據(jù)研究樣本及類別篩選坐骨神經(jīng)痛基因芯片,即:坐骨神經(jīng)痛基因芯片(GSE124272)數(shù)據(jù)集。選取GSE124272數(shù)據(jù)集為研究對象,其中包括

    8例坐骨神經(jīng)痛患者及8例健康人的基因數(shù)據(jù)。

    1.2 篩選差異表達基因 運用仙桃學術(shù)軟件對GSE124272數(shù)據(jù)集進行標準化預(yù)處理,獲得16例研究對象的基因數(shù)據(jù)的表達矩陣,以|logFC|>1及矯正后P<0.05為閾值篩選坐骨神經(jīng)痛相關(guān)差異表達基因(differential expressed genes, DEGs)。

    1.3 富集分析 基因本體論(gene ontology,GO)數(shù)據(jù)庫由基因本體聯(lián)合建立,其從功能、生物學途徑和細胞位置等方面提供基因的簡單注釋[2]。京都基因與基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)數(shù)據(jù)庫主要用于存儲不同物種的基因路徑信息,分析DEGs所涉及信號通路[3]。運用仙桃學術(shù)軟件對坐骨神經(jīng)痛相關(guān)DEGs進行GO和KEGG通路富集分析,顯著性基因富集臨界值設(shè)定為P<0.05。

    1.4 篩選關(guān)鍵基因 運用仙桃學術(shù)軟件對坐骨神經(jīng)痛DEGs進行蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)分析,分析結(jié)果輸入Cytoscape軟件,運用CytoHubba插件中度數(shù)關(guān)聯(lián)度算法獲取節(jié)點最高的15個基因,選取較高連通度的基因為該疾病的關(guān)鍵基因。

    1.5 轉(zhuǎn)錄因子(TF)的預(yù)測與驗證轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)專用數(shù)據(jù)庫(transcriptional regulatory relationships unraveled by sentence-based text mining,TRRUST)是1個用于預(yù)測轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的數(shù)據(jù)庫,目前包括人和小鼠2個物種[4]。通過TRRUST獲取調(diào)控關(guān)鍵基因的TF,以及與關(guān)鍵基因之間的調(diào)控關(guān)系。

    2 結(jié)果

    2.1 差異表達基因標準化預(yù)處理結(jié)果 GSE124272數(shù)據(jù)集標準化預(yù)處理結(jié)果顯示:共415個坐骨神經(jīng)痛相關(guān)DEGs,見圖1。8個坐骨神經(jīng)痛患者樣本及8個健康人群的樣本標準化預(yù)處理篩選結(jié)果以箱式圖呈現(xiàn),見圖2。

    圖1 差異表達基因火山圖

    注:紅色為篩選出的上調(diào)基因,藍色為篩選出的下調(diào)基因。

    圖2 差異表達基因箱式圖

    注:紅色為坐骨神經(jīng)痛組,藍色為健康對照組。

    2.2 GO和KEGG通路富集分析結(jié)果 GO通路富集分析結(jié)果顯示:坐骨神經(jīng)痛相關(guān)DEGs主要富集于分泌顆粒管腔、特異性顆粒管腔、三級顆粒管腔、特異性顆粒管腔等部位,主要涉及有絲分裂核分裂的調(diào)節(jié)、有絲分裂核分裂的負調(diào)控、中性粒細胞介導的細胞毒性、嗜中性粒細胞介導的共生體細胞殺傷等過程。KEGG通路富集分析結(jié)果顯示:坐骨神經(jīng)痛相關(guān)DEGs主要與過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)信號通路有關(guān),PPAR信號通路主要調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄,見圖3。

    圖3 GO和KEGG通路富集分析圖

    注:CC :細胞組分;BP:生物過程;KEGG:京都基因與基因組百科全書。

    2.3 PPI分析結(jié)果 通過CytoHubba插件計算出15個節(jié)點,這15個節(jié)點稱為關(guān)鍵基因,包含含桿狀病毒IAP重復(fù)序列蛋白5(BIRC5)、檢查點激酶1(CHEK1)、細胞周期蛋白B2(CCNB2)、胸苷酸合成酶(TYMS)、細胞周期蛋白B1(CCNB1)、Opa 相互作用蛋白 5(OIP5)、苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白1(BUB1)、有絲分裂檢查點絲氨酸/蘇氨酸激酶 B(BUB1B)、細胞分裂周期相關(guān) 2(CDCA2)、驅(qū)動蛋白家族成員 C1(KIFC1)、Holliday交叉識別蛋白(HJURP)、驅(qū)動蛋白家族成員11(KIF11)、非 SMC Condensin II 復(fù)合物亞基 G2(NCAPG2)、透明質(zhì)酸介導的運動受體(HMMR)及NDC80 著絲粒復(fù)合物的 NUF2 組分(NUF2),見圖3。

    圖4 關(guān)鍵基因蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

    2.4 關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄因子驗證結(jié)果 基于TRRUST數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)12個調(diào)控關(guān)鍵基因的TF,分別為腫瘤蛋白P53(TP53)、上游轉(zhuǎn)錄因子1(USF1)、E1A結(jié)合蛋白P300(EP300)、Sp1轉(zhuǎn)錄因子(SP1)、E2F轉(zhuǎn)錄因子1(E2F1)、KLF 轉(zhuǎn)錄因子 4(KLF4)、核因子 Kappa B 亞基 1(NFKB1)、Y-Box 結(jié)合蛋白 1(YBX1)、RELA 原癌基因,NF-KB 亞基(RELA)、E2F轉(zhuǎn)錄因子4(E2F4)、MYC 原癌基因,BHLH 轉(zhuǎn)錄因子(MYC)、KLF 轉(zhuǎn)錄因子 5(KLF5),協(xié)同參與CHEK1、BIRC5、CCNB2、TYMS、CCNB1這5個關(guān)鍵基因的調(diào)控,見圖5。

    圖5 轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖

    3 討論

    近年來,人們對精準醫(yī)療的要求越來越高,許多新型的治療手段被應(yīng)用于臨床診療中。目前,與疾病相關(guān)的基因研究成為研究熱點,但多關(guān)于癌癥方面,對于坐骨神經(jīng)痛基因的研究較少。臨床治療坐骨神經(jīng)痛主要為臥床休息、手術(shù)治療、西藥治療。臥床休息能夠緩解坐骨神經(jīng)痛急性發(fā)作期因神經(jīng)損傷所引起的疼痛及因機體活動所引起的神經(jīng)牽拉。雖然長期臥床能夠緩解一定程度的坐骨神經(jīng)痛,但也會產(chǎn)生不良反應(yīng),如形成靜脈血栓、肌肉萎縮、骨質(zhì)疏松等;另外,長期臥床還會使患者心情煩躁,增加心理疾病發(fā)生的風險[5]。

    研究顯示,手術(shù)治療與保守治療相比,能夠更快地緩解疼痛,但治療1年和2年后疼痛緩解程度無明顯差異[6]。西藥治療坐骨神經(jīng)痛以鎮(zhèn)痛與營養(yǎng)神經(jīng)類藥物進行對癥治療為主,研究表明目前臨床治療坐骨神經(jīng)痛常用的非甾體類抗炎藥并不能從根本上解決因坐骨神經(jīng)受損引起的疼痛[7]。且在臨床實踐中,可觀察到部分患者經(jīng)過西藥治療后疼痛癥狀并未得到充分緩解[8]。因此,尋找新的坐骨神經(jīng)痛治療靶點和預(yù)防標志物對臨床治療具有重要意義。

    本研究選取8個坐骨神經(jīng)痛患者樣本和8個健康人為研究對象,共篩選出了415個坐骨神經(jīng)痛相關(guān)DEGs以及可能參與坐骨神經(jīng)痛發(fā)生發(fā)展的15個關(guān)鍵基因?;赥RRUST數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)12個調(diào)控關(guān)鍵基因的TF協(xié)同參與CHEK1、BIRC5、CCNB2、TYMS、CCNB1這5個關(guān)鍵基因的調(diào)控。

    CHEK1屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族中的一員,在細胞DNA損傷時或未完全復(fù)制的DNA中表達,主要功能為參與調(diào)節(jié)細胞周期修復(fù)DNA的損傷[9]。有研究指出,CHEK1參與調(diào)節(jié)細胞周期及DNA的損傷修復(fù)[10]。同時,CHEK1的異常表達還可使細胞減數(shù)分裂進展緩慢[11]。高表達的BIRC5與趨化因子活性和免疫細胞趨化性相關(guān)[12]。TYMS是一種葉酸依賴性必需酶,可產(chǎn)生DNA合成和修復(fù)所需的tRNA[13]。細胞周期蛋白(Cyclin)家族成員是細胞周期進程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,CCNB1和CCNB2是Cyclin家族中非常重要的成員,在細胞周期的不同階段發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[14]。有絲分裂主要由CCNB1及其相關(guān)的催化活性伴侶所驅(qū)動[15]。以上5個關(guān)鍵基因在細胞的發(fā)育、組織分化等過程中發(fā)揮著重要的作用,因此,這5個關(guān)鍵基因有可能成為坐骨神經(jīng)痛的新治療靶點和預(yù)防標志物。

    綜上所述,坐骨神經(jīng)痛發(fā)病與預(yù)后中發(fā)揮關(guān)鍵作用的基因為CHEK1、BIRC5、CCNB2、TYMS、CCNB1,可作為坐骨神經(jīng)痛的新治療靶點和預(yù)防標志物。

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