醫(yī)院的病理PCR實(shí)驗(yàn)室可開(kāi)展哪些檢查項(xiàng)目

任偉民

什么是病理P C R實(shí)驗(yàn)室

P C R實(shí)驗(yàn)室也稱為基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，實(shí)時(shí)的熒光定量P C R技術(shù)是D N A定量技術(shù)的一個(gè)飛躍，是用來(lái)擴(kuò)增特異的D N A片段，也可以看作生物體外的特異D N A復(fù)制。經(jīng)過(guò)D N A基因追蹤系統(tǒng)，可以快速了解患者體內(nèi)特定D N A改變的情況，尤其是腫瘤，其準(zhǔn)確度可達(dá)到納米級(jí)別。而實(shí)時(shí)熒光定量P C R技術(shù)，就是實(shí)現(xiàn)此技術(shù)的重要載體。P C R試驗(yàn)也可用來(lái)檢測(cè)結(jié)核、人乳頭瘤病毒等感染性疾病，利用將病毒內(nèi)含有的基因組進(jìn)行擴(kuò)增的方式，測(cè)定某些病毒濃度不高的感染者身上是否存在特異的病毒。P C R檢測(cè)技術(shù)具備較高的靈敏度和特性，且操作簡(jiǎn)便快速，對(duì)樣本沒(méi)有過(guò)高的要求，所以，當(dāng)前已受到臨床醫(yī)師的一致肯定，并在臨床診斷中得到了廣泛運(yùn)用。但許多人可能并不清楚，病理P C R檢測(cè)其實(shí)是病理檢查的一部分。

什么是病理檢查

那什么是病理檢查呢？病理檢查屬于一種可靠且直觀的腫瘤診斷技術(shù)，是直接把人體器官取下來(lái)的病灶制作成切片，放置于顯微鏡下觀察，確定病變性質(zhì)。倘若明確是惡性腫瘤，就應(yīng)對(duì)腫瘤實(shí)施病理評(píng)估，如命名、分級(jí)、侵襲范圍、是否充分切除、組織學(xué)療效評(píng)價(jià)、預(yù)后等相關(guān)信息，這些均為臨床制訂和實(shí)施治療方案的關(guān)鍵性依據(jù)。所以，病理檢查也被稱為腫瘤診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。例如，人們聞到一股特殊的氣味，表示空氣中含有異常物質(zhì)。但倘若需具體明確是何種物質(zhì)，就需采用專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備進(jìn)行分析，病理檢查就是這樣的。

病理檢查的步驟

（一）標(biāo)本采集

病理檢查的第一步是采集病理標(biāo)本，包括活體組織、手術(shù)切除標(biāo)本、細(xì)針穿刺標(biāo)本等。標(biāo)本的采集需要遵循一定的操作規(guī)范，以保證標(biāo)本的完整性和質(zhì)量。

（二）標(biāo)本處理

采集到的病理標(biāo)本需要進(jìn)行一系列的處理步驟，包括固定、切片、染色等。固定是將標(biāo)本中的細(xì)胞和組織固定在載玻片上，以保持其形態(tài)和結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。切片是將固定的組織標(biāo)本切割成非常薄的切片，以便于觀察和分析。染色指通過(guò)染色劑對(duì)切片進(jìn)行染色，以突出細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)特征。

（三）鏡下觀察

經(jīng)過(guò)處理的標(biāo)本切片會(huì)被放置在顯微鏡下，由病理醫(yī)師進(jìn)行觀察和分析。病理醫(yī)師通過(guò)觀察切片中的細(xì)胞和組織形態(tài)學(xué)特征，來(lái)確定是否存在病理變化和病變類型。他們會(huì)注意細(xì)胞和組織的形狀、大小、排列方式、染色性質(zhì)等方面的變化。

（四）診斷和報(bào)告

根據(jù)觀察和分析的結(jié)果，病理醫(yī)師會(huì)進(jìn)行診斷，并生成病理報(bào)告。病理報(bào)告中會(huì)詳細(xì)描述標(biāo)本的病理特征、診斷結(jié)果和可能的預(yù)后信息。這些報(bào)告會(huì)被發(fā)送給臨床醫(yī)生，作為輔助臨床診斷和治療的重要依據(jù)。

為什么必須要進(jìn)行病理檢查

病理檢查實(shí)際上就是把切除的腫塊送往實(shí)驗(yàn)室展開(kāi)進(jìn)一步檢查，明確該腫塊屬于良性或者惡性，倘若屬于良性腫塊，手術(shù)切除就可以實(shí)現(xiàn)徹底治愈的目標(biāo)，但倘若是惡性的，只通過(guò)手術(shù)切除是不行的，還應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大手術(shù)，術(shù)后還應(yīng)到腫瘤科接受放療和化療干預(yù)。所以，病理醫(yī)師就好比是一個(gè)法官，他的判定和患者的生存情況存在密切聯(lián)系。外科醫(yī)師根據(jù)病理檢查結(jié)果，來(lái)確定是開(kāi)展局部切除腫塊的小手術(shù)，或是徹底性治愈的大手術(shù)。腫瘤內(nèi)科醫(yī)師根據(jù)病理結(jié)果，給患者制定藥物治療方案。在經(jīng)過(guò)顯微鏡對(duì)檢查組織進(jìn)行形態(tài)評(píng)估后，會(huì)針對(duì)很多惡性腫瘤進(jìn)行進(jìn)一步分子病理評(píng)估，這就需要在病理P C R實(shí)驗(yàn)室來(lái)完成了。

P C R實(shí)驗(yàn)室可開(kāi)展哪些檢驗(yàn)項(xiàng)目

（一）病原體檢測(cè)

P C R技術(shù)的提出和發(fā)展可以使病原體檢測(cè)迅速、便捷地實(shí)施。因?yàn)榇隧?xiàng)技術(shù)的陽(yáng)性率較高，僅需利用微量病原體即可獲得陽(yáng)性結(jié)果，這并不能作為診斷依據(jù)，只有存在相應(yīng)數(shù)量的病原體后，才具備臨床意義。所以，使用熒光技術(shù)P C R可以迅速獲得精準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)于模板精準(zhǔn)定量具有非常重要的意義。針對(duì)免疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期”問(wèn)題的處理，判定病癥是否處于亞臨床或者隱性狀態(tài)，以及抗體檢測(cè)無(wú)法判斷屬于既往感染或現(xiàn)癥感染的情況，都能夠通過(guò)P C R來(lái)明確。比如，新型冠狀病毒核酸檢測(cè)，以熒光P C R法作為方法學(xué)，用于體外定性檢測(cè)感染新冠病毒的疑似肺炎病例、疑似聚集性病例，及診斷鑒別其他新型冠狀病毒感染病。具體可以通過(guò)采集上呼吸道標(biāo)本，包括咽拭子、鼻拭子等；也可以采集下呼吸道標(biāo)本，包括呼吸道抽取物、肺泡灌洗液樣本、肺組織活檢標(biāo)本等。其他病原體檢測(cè)，如H IV、甲乙丙肝、H P V、肺支、肺衣、E B病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族鏈球菌等均可以使用P C R技術(shù)。

（二）遺傳病檢測(cè)

對(duì)于遺傳性疾病來(lái)說(shuō)，基因突變和拷貝數(shù)變異是關(guān)鍵的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，也是檢測(cè)遺傳性疾病的重要指標(biāo)。遺傳性疾病的繁雜性，跟隨基因突變的類型及數(shù)量變化而變化；基因拷貝數(shù)變異除呈現(xiàn)出復(fù)制與缺失外，缺失的部位、大小和復(fù)制倍數(shù)上也具有多樣性。基因變異的復(fù)雜性，給遺傳病的臨床應(yīng)用測(cè)定提供了技術(shù)挑戰(zhàn)。實(shí)時(shí)P C R技術(shù)是目前應(yīng)用最廣泛的一種新型技術(shù)，使用熒光標(biāo)記法或熔點(diǎn)分析，能夠在同一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)測(cè)定多種作用靶點(diǎn)。比如，檢測(cè)人Y染色體A Z F區(qū)微缺失，以熒光P C R法為主要方法學(xué)。該產(chǎn)品適用于對(duì)男性全血樣本中Y染色體無(wú)精子癥因子進(jìn)行定性檢測(cè)。以往研究顯示，Y染色體A Z F區(qū)的各種程度缺失可造成男性無(wú)精癥、少精癥、精子畸形癥等，進(jìn)而造成男性不育。

（三）基因突變檢測(cè)

病理P C R實(shí)驗(yàn)室還可開(kāi)展基因突變檢測(cè)?；蛲蛔兪且环N重要的遺傳疾病原因，如遺傳性腫瘤、遺傳性心臟病等。病理P C R可以用于檢測(cè)某些重要基因的突變，如B R C A 1 /2基因、E G F R基因等。對(duì)基因的突變情況進(jìn)行檢測(cè)，可以快速確定患者是否存在遺傳性疾病的風(fēng)險(xiǎn)，為個(gè)體化治療和遺傳咨詢提供重要依據(jù)。

（四）個(gè)性化用藥

藥物基因組學(xué)及藥理學(xué)的進(jìn)一步發(fā)展，明確了藥物代謝與效應(yīng)個(gè)體化差異的遺傳特質(zhì)，用藥后出現(xiàn)不良反應(yīng)的原因是藥物代謝酶基因變異，造成酶活性失常，用藥后體內(nèi)藥物無(wú)法被順利代謝、吸收或排泄體外，導(dǎo)致體內(nèi)藥物含量過(guò)多或過(guò)少，達(dá)不到理想的醫(yī)療效果。這種特殊用藥反應(yīng)，可以通過(guò)檢查與患者所使用藥品有關(guān)的遺傳基因，改變用藥劑型或?qū)で筇娲椒?，最大程度地制定出合理、可行、?jīng)濟(jì)的用藥處理方法。例如，對(duì)于心血管疾病的個(gè)體化用藥，可以通過(guò)熒光P C R法來(lái)選擇治療心血管疾病的藥物，如葉酸、氯吡格雷、華法林、硝酸甘油等，同時(shí)還可以通過(guò)生物檢測(cè)來(lái)判斷心血管用藥的指導(dǎo)分子，明確基因類型。藥學(xué)醫(yī)師針對(duì)檢測(cè)結(jié)果，且全方位考慮患者個(gè)體因素、臨床診斷、聯(lián)合用藥等信息，為臨床個(gè)體化用藥提供科學(xué)依據(jù)。其他種類的個(gè)體化用藥，比如他汀類藥物、β受體阻滯劑、兒童安全用藥、腫瘤靶向化療個(gè)性化用藥等均可采用P C R法。

（五）腫瘤研究

很多對(duì)原癌基因和抑癌基因的表達(dá)情況的測(cè)定均可發(fā)現(xiàn)致癌的可能性，而P C R方法學(xué)也有助于解決這些問(wèn)題。比如，利用多重?zé)晒舛縋 C R檢查乳腺癌E S R、B R C A I、C D K N 2 A等基因，有助于乳腺癌的診斷及治療。又比如乳腺癌2 1基因檢測(cè)，主要是對(duì)乳腺癌患者腫瘤組織中的特異性基因表達(dá)水平進(jìn)行定量測(cè)定，再通過(guò)計(jì)算公式轉(zhuǎn)化為復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)分，并通過(guò)評(píng)分對(duì)乳腺癌患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)、預(yù)后檢測(cè)和治療提供指導(dǎo)信息。