不同醋制方法對(duì)香附揮發(fā)性成分的影響*

谷彩花，陳 衛(wèi)，牛麗梅，柴丹寧，張 莉，信龍飛，張艷玲**

(1.信陽農(nóng)林學(xué)院 農(nóng)學(xué)院，河南 信陽 464000；2.信陽農(nóng)林學(xué)院 制藥工程學(xué)院，河南 信陽 464000)

香附為莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根莖，別名莎草、香附子、香附米、莎草根、爪哇草等[1]。最早在《名醫(yī)別錄》中記載并列為中品，繼而在《新修本草》中開始被稱為香附，后來被列入《本草綱目》草部芳草類，名為莎草香附。其性平，味辛、微苦、微甘，具有疏肝解郁，理氣寬中，調(diào)經(jīng)止痛之功效，可用于多種婦科疾病[2]，被譽(yù)為“婦科之要藥”。香附通過加入不同輔料炮制能夠起到不同的藥理作用，并且炮制品的功效區(qū)別較大[3]，全國18個(gè)省市地方藥材飲片標(biāo)準(zhǔn)中記載香附有醋制、酒制、四制、姜制、鹽炙等多種炮制方法，因香附經(jīng)醋制后可引藥入肝，增強(qiáng)其疏肝解郁之功效[4]，故以醋制法最多，《中華人民共和國藥典》2020年版(以下簡稱《中國藥典》)也僅收載醋制香附一種。經(jīng)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，雖名為“醋制”，但各地采用的醋制法亦有不同，如醋炙、醋蒸、醋煮等。目前，有關(guān)醋制香附的研究集中在以某一化學(xué)成分為指標(biāo)進(jìn)行炮制工藝研究方面[5-8]，缺乏對(duì)其化學(xué)成分變化的具體分析，如醋制時(shí)，不同的醋制方法及悶潤時(shí)間對(duì)香附揮發(fā)油提取率及化學(xué)成分的影響。本研究設(shè)置了不同的悶潤時(shí)間，對(duì)比醋炙品和醋蒸品與生品中的化學(xué)成分變化，以期為香附的綜合開發(fā)利用和臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

米醋(江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司，20210123H)、香附(購于河南禹州藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地河南)，經(jīng)信陽農(nóng)林學(xué)院農(nóng)學(xué)院張艷玲副教授鑒定為莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根莖。

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Thermo公司，美國，型號(hào)：ISQ 7000)；電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：FA2004)；多功能粉碎機(jī)(永康市紅太陽機(jī)電有限公司，型號(hào)：800A)；低溫冷卻液循環(huán)泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司，型號(hào)：DLSB-5L/30)；揮發(fā)油提取器(鹽城新明特玻璃儀器有限公司，相對(duì)密度小于1型)。無水乙醚(鄭州派尼化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20211226)。

1.2 方法

1.2.1 香附炮制品的制備

取香附樣品，去除雜質(zhì)，切片，作為生品(樣品a)。取香附飲片適量，加入20%的米醋拌勻，分別悶制 8 h、16 h、24 h，置 80 ℃ 炒制容器內(nèi)進(jìn)行翻炒，取出，放涼，粉碎，過40目篩，作為香附醋炙品(樣品b～d)。取香附飲片適量，加入20%的米醋拌勻，分別悶制 8 h、16 h、24 h，加入與米醋等量蒸餾水，蒸制 4 h，悶 2 h，取出，陰干，粉碎，過40目篩，作為醋蒸品(樣品e～g)。

1.2.2 香附揮發(fā)油的提取及提取率的測(cè)定

分別稱取不同炮制方法制備的香附粉各 50 g，在圓底燒瓶內(nèi)加入 1250 mL 蒸餾水，按照2020年版《中國藥典》(四部)通則中2204揮發(fā)油測(cè)定法 (甲法) 測(cè)定炮制香附中揮發(fā)油的含量。將溫度設(shè)置為 150 ℃，緩緩加熱至沸騰。從沸騰后開始計(jì)時(shí)，提取 5 h。提取結(jié)束后，進(jìn)行冷卻 1 h。冷卻結(jié)束，開啟測(cè)定器下端的活塞，緩緩將水放出，讀取揮發(fā)油體積并計(jì)算提取率(揮發(fā)油提取率=揮發(fā)油體積/香附粉重×100%)。放入冰箱 4 ℃ 進(jìn)行冷藏保存?zhèn)溆肹9-10]。

1.2.3 香附揮發(fā)油成分的分析

用移液槍取 10 μL 的香附揮發(fā)油置于 10 mL 容量瓶中，加入無水乙醚稀釋1000倍，搖均，備用。

GC條件：色譜柱為HP-5ms毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；載氣為高純氦氣，恒流，流速為 1.0 mL/min；程序升溫，初始柱溫為 60 ℃，保持 2 min，以 10 ℃/min 升溫速率升至 230 ℃，保持 1 min；進(jìn)樣量為 1.0 μL，不分流。MS條件：離子源溫度：280 ℃；連接線溫度：250 ℃；電子源：EI；電離能量：70 eV；采集離子范圍：33～350 m/z。

2 結(jié)果與討論

2.1 香附揮發(fā)油得率的比較

由表1可知，樣品a(生品)揮發(fā)油提取率最高為1.18%，樣品b～d(醋炙品)和e～g(醋蒸品)香附揮發(fā)油提取率均低于樣品a(生品)，這可能與揮發(fā)性成分本身的性質(zhì)有關(guān)，香附在加醋悶潤的過程中可以使細(xì)胞壁軟化，此時(shí)藥材內(nèi)部的揮發(fā)性成分隨之溶出，再進(jìn)行加熱翻炒和蒸制更加速了成分的流失，導(dǎo)致?lián)]發(fā)油得率較生品低。在加醋悶制時(shí)間相同的條件下，醋炙品揮發(fā)油的得率均高于醋蒸品，可能與藥材炮制過程中的受熱時(shí)間有關(guān)，炙法通常炮制15～20 min 即可完成，而蒸法卻需耗時(shí)4小時(shí)，其炮制時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于炙法，揮發(fā)性成分損失較多引起。數(shù)據(jù)顯示，樣品f揮發(fā)油提取率最低為1.03%，可能由于該條件下香附中雜質(zhì)溶出多而影響了揮發(fā)油的提取率。

表1 揮發(fā)油提取率比較

2.2 香附揮發(fā)油的化學(xué)成分分析

分別取“1.2”項(xiàng)下方法獲得的香附揮發(fā)油樣品，按“1.2.3”項(xiàng)下測(cè)定方法，分別取 1 μL進(jìn)行測(cè)定，得總離子流圖(圖1～圖7)。將質(zhì)譜所得的信息采用 NIST 14數(shù)據(jù)庫進(jìn)行相似性檢索，對(duì)圖譜進(jìn)行分析確定各個(gè)化學(xué)成分。采用峰面積歸一化法得出各化學(xué)成分在揮發(fā)油組成成分中的相對(duì)含量，結(jié)果見表2。分析可知，醋制香附揮發(fā)油中所含的共有化學(xué)成分主要為α-香附酮、香附烯酮和抗氧化劑BHT，現(xiàn)代研究[11]證實(shí)，香附具有抗痛經(jīng)及鎮(zhèn)痛藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)正是α-香附酮和香附烯酮，因此醋制香附7個(gè)樣品中均含有這兩種成分，而抗氧化劑BHT相對(duì)含量較高但尚未見報(bào)道，化學(xué)成分6，9-愈創(chuàng)木二烯、(-)-α-古蕓烯、α-愈創(chuàng)木烯、Cypera-2，4-diene和β-巖蘭草烯含量相對(duì)較高，但并非所有樣品共有，可能是由于香附經(jīng)過醋炙制和醋蒸制受到外界溫度、濕度、炮制時(shí)間等因素影響使其內(nèi)部化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變或成分揮發(fā)引起。

圖1 樣品a的總離子流圖

圖2 樣品b的總離子流圖

圖3 樣品c的總離子流圖

圖4 樣品d的總離子流圖

圖5 樣品e的總離子流圖

圖6 樣品f的總離子流圖

圖7 樣品g的總離子流圖

表2 醋制香附揮發(fā)油的GC-MS分析結(jié)果

2.3 不同炮制方法揮發(fā)油提取率與氣相色譜綜合分析

由表3可知，67.07(醋蒸品 24 h)>66.74(醋蒸品 8 h)>65.60(醋炙品 16 h)>65.04(醋炙品 8 h)>63.55(醋炙品 24 h)>62.42(生品)>61.81(醋蒸品 16 h)，所以采用不同的炮制方法均可影響到香附揮發(fā)油得率及化學(xué)成分的相對(duì)含量。

表3 綜合評(píng)價(jià)表

3 結(jié)論

香附多為野生，被李時(shí)珍稱為“女科之主帥”，是臨床上用于治療婦科疾病的常用中藥，現(xiàn)在多為醋制品[12]。本研究對(duì)比醋炙品和醋蒸品的揮發(fā)油得率和化學(xué)成分的相對(duì)含量進(jìn)行綜合分析發(fā)現(xiàn)，不同醋制品表現(xiàn)出一定的差異。醋蒸制 8 h、16 h、24 h 后再進(jìn)行炒制或蒸制所得的炮制品揮發(fā)油得率均低于生品，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]，其原因是在悶潤、炒制或蒸制過程中，受溫度、時(shí)間、濕度等外界條件的影響導(dǎo)致部分揮發(fā)性成分散失。但生品及醋制品中化學(xué)成分相對(duì)含量最高的均為香附烯酮而非α-香附酮，與文獻(xiàn)中的研究結(jié)果不一致[14]，考慮可能是由于悶潤時(shí)間、藥材產(chǎn)地不同所致。由于臨床需求不同，在使用過程中建議綜合考慮揮發(fā)油得率和化學(xué)成分相對(duì)含量，本研究結(jié)果顯示醋蒸品 24 h 綜合得分最高，醋蒸品 16 h 綜合得分最低，可根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)行選擇悶制時(shí)間和炮制方法。藥材的炮制對(duì)藥性有很大的影響，主要在四氣五味和升降浮沉以及歸經(jīng)這幾個(gè)方面，其目的主要在于改變藥材的藥效和療效。本試驗(yàn)揮發(fā)油的提取方法已應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)，通過本課題的試驗(yàn)，作了進(jìn)一步的探究，可以為生產(chǎn)實(shí)踐提供一些更科學(xué)的指導(dǎo)意義，但本試驗(yàn)僅從不同炮制方法對(duì)香附揮發(fā)油成分這一角度進(jìn)行比較與分析，缺乏抑菌活性及藥理作用方面的研究。