• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高產(chǎn)γ-氨基丁酸植物乳桿菌的篩選、鑒定及益生特性

    2024-03-28 10:15:36吳劍南博李俠曹勇王玉華王秀娟
    食品研究與開發(fā) 2024年6期
    關(guān)鍵詞:膽鹽產(chǎn)酸乳酸菌

    吳劍,南博,李俠,曹勇,王玉華,4,5*,王秀娟*

    (1.吉林國際旅行衛(wèi)生保健中心(長(zhǎng)春海關(guān)口岸門診部),吉林 長(zhǎng)春 130062;2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,吉林 長(zhǎng)春 130118;3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品生物制造創(chuàng)新中心,吉林 長(zhǎng)春 130118;4.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 大豆工業(yè)與技術(shù)國家加工實(shí)驗(yàn)室,吉林 長(zhǎng)春 130118;5.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 國家小麥和玉米深加工工程研究中心,吉林 長(zhǎng)春 130118)

    γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是一種天然的、自身不能合成蛋白的氨基酸,由于其獨(dú)特的生理功能,如改善睡眠、抗抑郁癥[1]、醫(yī)治癲癇、降血壓[2-4]、降血糖、激活和增強(qiáng)記憶力、緩解和治療孕婦自主神經(jīng)障礙等[5],還可作為治療尿毒癥的輔助藥物[6],并具有間接促進(jìn)受孕等功能[7],近年來GABA 的發(fā)展和使用受到越來越多的關(guān)注[8-9]。

    獲取GABA 的傳統(tǒng)生產(chǎn)途徑一般分為化學(xué)法和生物合成法,化學(xué)法由于對(duì)環(huán)境的污染較大,生產(chǎn)的GABA 難以完全提純,副產(chǎn)物對(duì)人體的危害大不能應(yīng)用于食品醫(yī)藥行業(yè)中。生物合成法更常用[10],主要包括植物富集法和微生物發(fā)酵法。植物富集法比化學(xué)法的反應(yīng)條件溫和且基本不會(huì)對(duì)環(huán)境造成危害。植物富集法的主要原理是高等植物組織中的內(nèi)源酶催化谷氨酸鈉的脫羧和多胺的降解[11],這兩條合成和轉(zhuǎn)化途徑生成GABA,具有反應(yīng)慢、不穩(wěn)定及產(chǎn)率低等缺點(diǎn),因此不常用于GABA 的生產(chǎn)。微生物發(fā)酵法具有反應(yīng)迅速、產(chǎn)率較高的優(yōu)點(diǎn),大量微生物都能通過發(fā)酵生產(chǎn)GABA[12]。GABA 在生物體中一般以谷氨酸通過谷氨酸脫羧酶脫羧反應(yīng)產(chǎn)生,選擇合適的產(chǎn)GABA 的生物載體是大量獲得GABA 的前提條件[13]。在早期的研究中,微生物以大腸桿菌為主,通過谷氨酸鈉的脫羧反應(yīng)生產(chǎn)GABA,雖然大腸桿菌有很強(qiáng)的谷氨酸脫羧酶的能力,但是將所得產(chǎn)物應(yīng)用于食品中存在許多局限性。乳酸菌是一種國際公認(rèn)的食品級(jí)食用細(xì)菌,可以提高食品的品質(zhì)和營養(yǎng),并賦予食品特殊的風(fēng)味[14],具有重要生物學(xué)功能(如提高免疫力、調(diào)節(jié)腸道菌群及降低膽固醇等[15])。目前由乳酸菌發(fā)酵的GABA,發(fā)酵條件簡(jiǎn)單,可以直接用作食品添加劑[16]或開發(fā)乳酸菌發(fā)酵酸奶。有研究[17]從傳統(tǒng)的發(fā)酵泡菜中分離出67 種乳酸菌,通過高效液相色譜分析有27 株菌株產(chǎn)GABA,在37 ℃培養(yǎng)48 h 后,其中一株GABA 產(chǎn)量達(dá)到3.92 g/L。利用乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)GABA 安全快捷且產(chǎn)量相對(duì)較高,可以直接應(yīng)用到食品中。由此可見利用乳酸菌生產(chǎn)GABA 技術(shù)日漸成熟。篩選出合適的乳酸菌菌株和發(fā)酵條件以大量獲取GABA 是利用生物法獲取GABA領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。

    植物乳桿菌作為乳酸菌系統(tǒng)的一個(gè)分支,具有益生特性,適應(yīng)環(huán)境能力較強(qiáng),能夠定植于人體腸道中,發(fā)揮作用。本研究從東北酸菜和韓國泡菜中篩選獲得高產(chǎn)GABA 的植物乳桿菌菌株,通過16S rDNA 對(duì)其進(jìn)行測(cè)序鑒定乳酸菌種類,并對(duì)該菌株的益生特性進(jìn)行深入研究,旨在為其后續(xù)功能性食品的研究開發(fā)提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    自然發(fā)酵東北酸菜、韓國泡菜:市售;人工胃腸液、GABA 標(biāo)準(zhǔn)品:北京奧博星生物技術(shù)有限公司;冰醋酸:江蘇奧福生物科技有限公司;DNA 提取試劑盒、蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖:北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司。所用試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    PCR 儀(7500fast):美國Applied Biosystems 公司;酶標(biāo)儀(TECAN-F50):瑞士TECAN 公司;電泳儀(DYY-6C):北京六一儀器廠;高速冷凍離心機(jī)(JXN-30/26):上海BBI 公司;-80 ℃冰箱(MDF-U3386S):日本SANYO 電器集團(tuán)。

    1.3 方法

    1.3.1 試劑的配制

    紙層析展開劑:正丁醇∶冰醋酸∶水(體積比)=2∶1∶1,加入0.8% 顯色劑茚三酮。層析洗脫劑:75% 乙醇∶0.1% 硫酸銅(體積比)=38∶2。硼酸緩沖溶液:稱取1.236 8 g 硼酸和0.292 5 g NaCl,溶解定容至100 mL制成A 液,溶解1.907 0 g 硼酸鈉并定容至100 mL 制成B 液;將A 液與B 液混合(體積比1∶9)配制成pH9.0 的硼酸緩沖液,4 ℃避光保存,現(xiàn)用現(xiàn)配。5 mg/mL GABA標(biāo)準(zhǔn)濃儲(chǔ)液溶液:適量去離子水溶解500 mg GABA 粉末并定容至100 mL,4 ℃保存。

    MRS 培養(yǎng)基:蛋白胨10 g,牛肉膏10 g,酵母提取物5 g,磷酸氫二鉀2 g,檸檬酸二銨2 g,乙酸鈉5 g,葡萄糖20 g,吐溫80 1 mL,硫酸鎂(7H2O)0.58 g,硫酸錳(4H2O)0.25 g,蒸餾水1 000 mL,pH6.2,121 ℃滅菌15 min。固體培養(yǎng)基加入瓊脂粉15 g。

    胰蛋白胨酵母膏葡萄糖培養(yǎng)基(tryptone yeast extract and glucose medium,TYG):胰蛋白胨10 g,酵母提取物5 g,葡萄糖20 g,丁二酸鈉5 g,1 000 mL 蒸餾水,加入L-谷氨酸(1 mg/mL)20 mL,pH6.5,115 ℃滅菌25 min。

    溶菌肉湯培養(yǎng)基(lysogeny broth medium,LB):胰蛋白胨10 g,酵母粉5 g,NaCl 10 g,瓊脂粉15 g,蒸餾水1 000 mL,pH6.5,121 ℃滅菌20 min。

    1.3.2 產(chǎn)GABA 乳酸菌菌株的篩選

    菌株初篩:取自然發(fā)酵的東北酸菜及韓國泡菜汁水稀釋10 倍,將稀釋液涂布于固體MRS 培養(yǎng)基上,37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h,選取成型單菌落于固體平板上劃線分離,反復(fù)進(jìn)行純化培養(yǎng),最終選取革蘭氏陽性菌株接種于MRS 液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h(2%,體積分?jǐn)?shù)),3 代連續(xù)培養(yǎng),得到有活力的菌株備用。

    菌株復(fù)篩:將初篩得到的菌株接種于TYG 選擇培養(yǎng)基中(2%,體積分?jǐn)?shù)),37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h,連續(xù)培養(yǎng)2 代,備用。

    1.3.3 發(fā)酵液中GABA 的定性分析

    發(fā)酵液中GABA 的定性分析參照熊京京等[18]方法稍作改動(dòng),取1μL 發(fā)酵上清液,在薄層層析硅膠板底部1 cm 處間隔0.7 cm 點(diǎn)樣,GABA 標(biāo)準(zhǔn)液作為對(duì)照。層析缸中放入0.8 cm 的展開劑,將硅膠板平穩(wěn)放入,密封,直至展開劑擴(kuò)展至距離硅膠板上沿1 cm 處時(shí),取出晾干,放入烘箱85 ℃顯色20 min,初篩產(chǎn)GABA的菌株。

    1.3.4 發(fā)酵液中GABA 的定量分析

    將GABA 標(biāo)準(zhǔn)濃儲(chǔ)液依次稀釋配制成0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mg/mL 的GABA 標(biāo)準(zhǔn)溶液。具塞試管中分別加入0.2 mL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液和處理后的發(fā)酵上清液,加入重蒸苯酚1.0 mL(60%)和硼酸鹽緩沖液0.4 mL(pH9.0),混勻后再加入NaClO 溶液1.0 mL(10%),充分振蕩混勻。靜置5 min 后,沸水中加熱10 min,冰浴10 min,溶液變?yōu)樗{(lán)綠色后,加入2.0 mL 60% 乙醇溶液,于645 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值。以GABA 濃度為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算發(fā)酵液中GABA 的含量。

    1.3.5 產(chǎn)GABA 菌株的鑒定及形態(tài)觀察

    菌株的鑒定:GABA 菌株DNA 的提取參照DNA提取試劑盒說明進(jìn)行,利用基因通用引物27f 和1492r擴(kuò)增,通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)體系標(biāo)準(zhǔn)化操作后,產(chǎn)物經(jīng)0.75%瓊脂糖凝膠電泳并通過凝膠成像裝置觀察,進(jìn)行16S rRNA 基因序列測(cè)序。使用美國國家生物技術(shù)信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)的Gen-Bank 數(shù)據(jù)庫對(duì)各菌株序列分析比對(duì),對(duì)同源性較高的模式菌株的16S rDNA 基因序列采用MEGA7.0 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

    菌株的形態(tài)觀察:取分離純化后的菌液1 mL 涂于MRS 培養(yǎng)基上,37 ℃培養(yǎng)48 h 后記錄菌落形態(tài),取菌液革蘭氏染色,在顯微鏡下觀察并拍照。

    1.3.6 菌株的生長(zhǎng)曲線及產(chǎn)酸曲線繪制

    在MRS 液體培養(yǎng)基中接種2% 活化好的菌株,37 ℃培養(yǎng),每2 h 測(cè)定OD600nm值和pH 值,繪制生長(zhǎng)曲線及產(chǎn)酸曲線。

    1.3.7 菌株發(fā)酵上清液對(duì)常見病原菌的抑菌試驗(yàn)

    將實(shí)驗(yàn)室保藏的金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌分別活化,再稀釋至105CFU/mL,取0.1 mL 涂布于LB 培養(yǎng)基上,將無菌的濾紙片放于平板中,做3個(gè)平行組。分別吸取0.3 mL 活化好的菌株發(fā)酵上清液放入濾紙片上,于37 ℃培養(yǎng)24 h,觀察并測(cè)量抑菌圈直徑大小,進(jìn)行3 次平行試驗(yàn)。

    1.3.8 菌株對(duì)膽鹽的耐受性

    向MRS 培養(yǎng)基中加入牛膽鹽,配制成0.2%、0.3%及0.5%的膽鹽培養(yǎng)基,取2%活化后的菌株接種于上述膽鹽養(yǎng)基中,于37 ℃培養(yǎng)24 h 后,進(jìn)行稀釋涂布,做3 組平行試驗(yàn),計(jì)算活菌數(shù)。

    1.3.9 菌株對(duì)酸度的耐受性

    菌株對(duì)酸度的耐受性參照Wang 等[17]的方法稍作修改,于MRS 液體培養(yǎng)基中分別加入鹽酸,配制成酸性培養(yǎng)基(pH2.0、3.0、4.0),取2% 活化后的菌株接種于酸性培養(yǎng)基中,于37 ℃培養(yǎng)24 h 后,進(jìn)行稀釋涂布,做3 組平行試驗(yàn),計(jì)算活菌數(shù)。

    1.3.10 菌株對(duì)人工胃液和人工腸液的耐受性

    參照趙芳等[19]的方法稍作修改,于MRS 液體培養(yǎng)基中接種2% 菌株,37 ℃培養(yǎng)24 h 后取10 mL 菌液,5 000 r/min 離心10 min,沉淀用無菌磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffer saline,PBS)洗滌2 次,收集菌體沉淀加入10 mL PBS 混勻。取1 mL 菌液加入9 mL 模擬人工胃液,37 ℃培養(yǎng)4 h 后,再從模擬人工胃液中取1 mL 菌液加入9 mL 模擬人工腸液,37 ℃培養(yǎng)4 h。每2 h 分別取樣進(jìn)行平板涂布計(jì)數(shù),做3 組平行試驗(yàn)。

    1.3.11 菌株對(duì)常用抗生素的敏感性

    在MRS 固體培養(yǎng)基上均勻涂布2%菌株,用無菌鑷子放置不同的藥敏片,于37 ℃培養(yǎng)24 h,觀察藥敏片周圍是否形成抑菌圈,并測(cè)量直徑,進(jìn)行3 組平行試驗(yàn)。藥敏片為紅霉素30 μg、卡那霉素30 μg、氯霉素30μg、鏈霉素30μg、四環(huán)素30μg。用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈大小。

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析

    通過Excel、GraphPad Prism 6.0 和Design-Expert 12 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 高產(chǎn)GABA 乳酸菌菌株的篩選

    薄層層析定性分析結(jié)果如圖1 所示。

    圖1 菌株發(fā)酵液GABA 薄層層析色譜Fig.1 Thin-layer chromatogram of gamma-aminobutyric acid(GABA)in the strain fermentation broth

    由圖1 可以看出,除了菌株2,菌株1、菌株3、菌株4、菌株5 均有與GABA 標(biāo)準(zhǔn)品相同的比移值(化合物在薄層層析板上移動(dòng)的距離與溶劑前端移動(dòng)的距離之比),初步認(rèn)為4 株菌株均產(chǎn)生GABA。

    比色法定量分析結(jié)果如圖2 所示。

    圖2 5 株菌株GABA 產(chǎn)量對(duì)比Fig.2 Comparison of GABA production among 5 strains

    由圖2 可以看出,菌株2 沒有產(chǎn)生GABA,菌株1、3、4、5 均有GABA 產(chǎn)生,且菌株3 的GABA 產(chǎn)量最高。Cataldo 等[20]從藜麥和莧菜中分離出17 株乳酸菌,30 ℃培養(yǎng)72 h 后,GABA 產(chǎn)量為16~258 mmol/L,從同一來源中篩選出來的乳酸菌的GABA 產(chǎn)量不同。綜上,選用產(chǎn)GABA 能力較強(qiáng)的菌株3 作為后續(xù)試驗(yàn)的主要研究菌株。

    2.2 篩選菌株16S rRNA 序列分析鑒定及形態(tài)學(xué)觀察

    高產(chǎn)GABA 的菌株3 的瓊脂糖凝膠電泳如圖3所示。

    圖3 篩選菌株的DNA 電泳圖Fig.3 DNA electropherogram of the screened strains

    由圖3 可以看出,在1 400 bp 左右有明顯的條帶出現(xiàn)。進(jìn)行16S rRNA 測(cè)序構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹如圖4所示。

    圖4 植物乳桿菌Lp3 的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Phylogenetic tree of Lactobacillus plantarum Lp3

    由圖4 可以看出,該菌株的16S rRNA 與L.plantarumstrain UFLA WFC331 的同源性達(dá)到99.6%,命名為植物乳桿菌Lp3,拉丁文學(xué)名L.plantarumLp3。其菌落形態(tài)及鏡檢結(jié)果如圖5 所示。

    圖5 植物乳桿菌Lp3 的菌落及菌體形態(tài)Fig.5 Colony and cell morphology of L.plantarum Lp3

    由圖5 可以看出,該菌株的菌落凸起,呈乳白色,圓形光滑,半透明,邊緣整齊;菌體呈桿狀,革蘭氏陽性。

    2.3 L.plantarum Lp3 菌株的生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)酸曲線

    L.plantarumLp3 菌株的生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)酸曲線如圖6 所示。

    圖6 植物乳桿菌Lp3 生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)酸曲線Fig.6 Growth and acid production curves of L.plantarum Lp3

    由圖6 可以看出,該菌株在0~2 h 生長(zhǎng)緩慢,2~12 h 生長(zhǎng)速率快速上升,進(jìn)入對(duì)數(shù)期,因該菌株是從活化二代后的菌液中分離出來的,所以菌種活力較強(qiáng),代謝快;12 h 后生長(zhǎng)逐漸放緩進(jìn)入平穩(wěn)期,在22 h 時(shí),菌株活力最高。由產(chǎn)酸曲線可知L.plantarumLp3 菌株在接種0~6 h 發(fā)酵液pH 值下降迅速,快速產(chǎn)酸,6 h 后pH 值緩慢降低。說明該菌株有良好的生長(zhǎng)和產(chǎn)酸能力。馬莉等[21]研究結(jié)果與本研究L.plantarumLp3 菌株的生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)酸曲線的趨勢(shì)一致。

    2.4 L.plantarum Lp3 菌株對(duì)常見病原菌的抑制

    分別取L.plantarumLp3 菌株發(fā)酵上清液及pH 值調(diào)至7.0 的上清液進(jìn)行抑菌試驗(yàn),對(duì)3 種常見病原菌的抑制作用如表1 所示。

    表1 植物乳桿菌Lp3 的抑菌效果Table 1 Antibacterial effects of L.plantarum Lp3

    由表1 可知,該菌株對(duì)3 種致病菌均有比較好的抑制效果,對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別為15.69、32.27、23.44 mm,對(duì)沙門氏菌的抑制作用最強(qiáng)。當(dāng)發(fā)酵上清液的pH 值調(diào)至7.0時(shí),L.plantarumLp3 抑菌能力均降低,尤其是沙門氏菌和金黃色葡萄球菌。Halimi 等[22]研究發(fā)現(xiàn),發(fā)酵乳桿菌的低pH 值培養(yǎng)上清液對(duì)金葡菌及銅綠假單胞菌均有較強(qiáng)的抑菌能力。綜上,L.plantarumLp3 菌株具有較強(qiáng)的抑菌能力。

    2.5 L.plantarum Lp3 菌株的耐受性

    益生菌的重要特性之一是耐受能力,腸道環(huán)境膽鹽濃度較高,因此L.plantarum菌株的耐膽鹽能力顯得尤為重要。植物乳桿菌Lp3 體外耐膽鹽能力如圖7所示。

    圖7 植物乳桿菌Lp3 體外耐膽鹽能力Fig.7 Bile salt tolerance of L.plantarum Lp3 in vitro

    由圖7 可以看出,當(dāng)膽鹽濃度為0.2、0.3 g/100 mL和0.5 g/100 mL 時(shí),培養(yǎng)24 h 后L.plantarumLp3 菌株的活菌數(shù)可達(dá)6.84、6.96、7.12 lg(CFU/mL),且活菌數(shù)符合乳酸菌發(fā)揮作用的最低值,表明L.plantarumLp3菌株耐膽鹽能力較強(qiáng)。作為革蘭氏陽性菌,植物乳桿菌具有較厚的細(xì)胞壁,可能是該菌株對(duì)膽鹽環(huán)境耐受的原因之一。王祎然等[23]從酸湯中篩選出的6 株乳酸菌在相同膽鹽濃度下培養(yǎng)3 h 后存活率均超過88%。腸道由于胃酸的存在酸性較高,因此L.plantarum菌株的耐酸能力也很重要。L.plantarumLp3 菌株的耐酸能力如圖8 所示。

    圖8 植物乳桿菌Lp3 體外耐酸能力Fig.8 Acid tolerance of L.plantarum Lp3 in vitro

    由圖8 可以看出,在pH 值2.0、3.0 和4.0 的條件下,L.plantarumLp3 菌株在24 h 后的活菌數(shù)分別為7.29、7.72、8.28 lg(CFU/mL),存活率仍能達(dá)到90% 以上,表明L.plantarumLp3 菌株具有良好的耐酸能力。王帥靜等[24]對(duì)7 株菌株在pH2.0 和pH3.0 時(shí)培養(yǎng)幾乎不生長(zhǎng)。

    2.6 L.plantarum Lp3 菌株對(duì)模擬人工胃腸液的耐受性

    益生菌菌株的重要標(biāo)準(zhǔn)是在人體胃腸道中存活的能力[25]。L.plantarumLp3 菌株先后暴露在模擬人工胃腸液的環(huán)境中,活菌數(shù)如圖9 所示。

    圖9 植物乳桿菌Lp3 在模擬胃腸液中的存活情況Fig.9 Survival of L.plantarum Lp3 in simulated gastrointestinal fluid

    如圖9 所示,隨著在人工胃腸液中處理時(shí)間的延長(zhǎng),L.plantarumLp3 菌株的活菌數(shù)降低。這說明L.plantarumLp3 菌株對(duì)人工胃腸液具有較好的耐受性,能顯著抵抗胃腸道環(huán)境,具備一定的益生特性。Wang等[17]將L.plantarumHU-C2W 先暴露于模擬胃液環(huán)境培養(yǎng)3 h,然后接種到模擬腸液環(huán)境培養(yǎng)12 h,乳桿菌的存活率從67.75%降至43.82%。

    2.7 L.plantarum Lp3 菌株對(duì)常用抗生素的敏感性

    細(xì)菌會(huì)產(chǎn)生臨床耐藥性,耐藥基因可以遺傳,從而威脅宿主,因此有必要對(duì)乳酸菌進(jìn)行抗生素敏感性試驗(yàn)[26]。L.plantarumLp3 菌株對(duì)常用抗生素的敏感性如表2 所示。

    表2 植物乳桿菌Lp3 的抗藥性比較Table 2 Antibiotic resistance of L.plantarum Lp3

    如表2 所示,L.plantarumLp3 菌株對(duì)卡那霉素和鏈霉素不敏感,對(duì)紅霉素、氯霉素和四環(huán)素較為敏感,但仍在安全濃度的范圍內(nèi)。結(jié)果表明L.plantarumLp3 菌株對(duì)胃腸中常用的抗生素具有一定的敏感性。

    3 結(jié)論

    GABA 是一種自然界含量較少的氨基酸,提取困難,微生物發(fā)酵法作為一種安全且高產(chǎn)GABA 的方式,越來越受到人們的重視。本研究從東北酸菜和韓國泡菜中篩選出高產(chǎn)GABA 的菌株3,通過16Sr DNA序列分析鑒定其為植物乳桿菌,命名為L(zhǎng).plantarumLp3。該菌株生長(zhǎng)性能良好,對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌均有比較好的抑制效果,具有良好的耐膽鹽及耐酸能力。L.plantarumLp3 菌株在體外模擬胃腸液環(huán)境中表現(xiàn)出良好的生存能力,對(duì)常用的紅霉素、氯霉素和四環(huán)素等抗生素具有一定的敏感性。L.plantarumLp3 益生性能適合作為食用菌種應(yīng)用于食品開發(fā)。

    猜你喜歡
    膽鹽產(chǎn)酸乳酸菌
    乳桿菌在膽鹽 MRS 培養(yǎng)基中的傳代穩(wěn)定性
    Ligilactobacillus sp.BD7642關(guān)鍵膽鹽水解酶的發(fā)掘
    禽用乳酸菌SR1的分離鑒定
    提高乳酸菌耐膽鹽能力的研究
    生物化工(2020年3期)2020-01-07 23:51:31
    薄荷復(fù)方煎液對(duì)齲病及牙周病常見致病菌生理活性的抑制作用
    產(chǎn)酸沼渣再利用稻秸兩級(jí)聯(lián)合產(chǎn)酸工藝研究
    芍藥總多糖抑齲作用的體外研究
    乳酸菌成乳品市場(chǎng)新寵 年增速近40%
    乳飲品中耐胃酸乳酸菌的分離鑒定與篩選
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:04
    高致齲性變異鏈球菌臨床分離株的初步篩選
    免费看av在线观看网站| 高清视频免费观看一区二区 | 欧美精品国产亚洲| 男女视频在线观看网站免费| 日韩一区二区三区影片| 内地一区二区视频在线| 婷婷色av中文字幕| 最后的刺客免费高清国语| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产成人一区二区在线| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 最近中文字幕高清免费大全6| 六月丁香七月| 久久久久久久午夜电影| 久久精品国产自在天天线| 亚洲av福利一区| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国模一区二区三区四区视频| 久久久精品94久久精品| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美高清性xxxxhd video| 免费看光身美女| 亚洲精品,欧美精品| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 久久精品国产亚洲av天美| 大香蕉97超碰在线| 波野结衣二区三区在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久精品免费免费高清| 亚洲三级黄色毛片| 精品熟女少妇av免费看| 国产成年人精品一区二区| 一区二区三区免费毛片| 又爽又黄a免费视频| 亚洲性久久影院| 看十八女毛片水多多多| 99久久精品一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产黄色免费在线视频| 床上黄色一级片| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲三级黄色毛片| 日韩欧美 国产精品| 亚洲自偷自拍三级| 大片免费播放器 马上看| 91久久精品国产一区二区三区| 最新中文字幕久久久久| 亚洲综合色惰| 国模一区二区三区四区视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产精品一区二区在线观看99 | 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲不卡免费看| 麻豆成人av视频| kizo精华| 国产精品久久久久久久久免| 最后的刺客免费高清国语| 免费在线观看成人毛片| 在线播放无遮挡| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲最大成人av| 久久人人爽人人片av| 欧美变态另类bdsm刘玥| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 亚洲精品乱久久久久久| 欧美bdsm另类| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 69人妻影院| 亚洲性久久影院| 久久久亚洲精品成人影院| 麻豆国产97在线/欧美| 国产精品嫩草影院av在线观看| 大香蕉97超碰在线| 国产精品熟女久久久久浪| 午夜亚洲福利在线播放| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 久久韩国三级中文字幕| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产老妇女一区| 国产成人免费观看mmmm| 日韩亚洲欧美综合| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲最大成人中文| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 久久亚洲国产成人精品v| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久99热6这里只有精品| 国产精品99久久久久久久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 好男人视频免费观看在线| av黄色大香蕉| 国产精品一区二区性色av| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产美女午夜福利| 高清视频免费观看一区二区 | 精品久久久噜噜| 国内精品一区二区在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 日本免费在线观看一区| 精品熟女少妇av免费看| 身体一侧抽搐| 亚洲av国产av综合av卡| 在线观看美女被高潮喷水网站| 男人狂女人下面高潮的视频| 色网站视频免费| 亚洲av成人av| 一级黄片播放器| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美成人a在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产免费一级a男人的天堂| 夫妻午夜视频| 99久国产av精品| 国产黄片美女视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美日本视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩欧美精品免费久久| 联通29元200g的流量卡| 久久99蜜桃精品久久| 久久97久久精品| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 免费观看在线日韩| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 18+在线观看网站| 亚洲欧美日韩东京热| 在线播放无遮挡| 国产成人a区在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 精品久久久久久久久av| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 色哟哟·www| 国产69精品久久久久777片| 少妇高潮的动态图| 亚州av有码| 久久人人爽人人片av| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 插阴视频在线观看视频| a级一级毛片免费在线观看| 国产三级在线视频| 一本久久精品| 中国美白少妇内射xxxbb| 热99在线观看视频| av女优亚洲男人天堂| 亚洲无线观看免费| 亚洲av.av天堂| 熟女人妻精品中文字幕| 九草在线视频观看| 一边亲一边摸免费视频| 91精品国产九色| 在线天堂最新版资源| 国产成人福利小说| 超碰97精品在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产91av在线免费观看| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲自拍偷在线| 男女视频在线观看网站免费| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产日韩欧美在线精品| 精品人妻视频免费看| 97热精品久久久久久| a级一级毛片免费在线观看| 日韩中字成人| 成年人午夜在线观看视频 | 久久久久久国产a免费观看| 少妇熟女欧美另类| 国产日韩欧美在线精品| 特大巨黑吊av在线直播| 夫妻午夜视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 毛片一级片免费看久久久久| 午夜免费观看性视频| 美女大奶头视频| 99久国产av精品国产电影| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 一二三四中文在线观看免费高清| 国产探花在线观看一区二区| 国产不卡一卡二| 国产老妇伦熟女老妇高清| 十八禁网站网址无遮挡 | 尾随美女入室| 国产一区亚洲一区在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲av一区综合| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美+日韩+精品| 最近最新中文字幕免费大全7| 三级毛片av免费| 网址你懂的国产日韩在线| 一级a做视频免费观看| 午夜福利成人在线免费观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 男女边摸边吃奶| 毛片一级片免费看久久久久| 久久亚洲国产成人精品v| 色吧在线观看| 99久国产av精品| 日本免费在线观看一区| 一级毛片 在线播放| 久久99热这里只频精品6学生| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 少妇熟女欧美另类| 久久久久国产网址| 国产精品一及| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产一级毛片在线| 97超碰精品成人国产| 蜜臀久久99精品久久宅男| 91在线精品国自产拍蜜月| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品99久久久久久久久| 国产成人精品一,二区| 午夜福利在线在线| 69人妻影院| 欧美极品一区二区三区四区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 天堂√8在线中文| 久久久色成人| 在线播放无遮挡| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产av国产精品国产| 免费在线观看成人毛片| 国产午夜精品一二区理论片| 日韩av不卡免费在线播放| 一级毛片久久久久久久久女| 如何舔出高潮| 久久久久久久久久久免费av| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲国产成人一精品久久久| videos熟女内射| 亚洲欧美精品自产自拍| 乱人视频在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久免费精品人妻一区二区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 欧美激情在线99| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩av免费高清视频| 国产69精品久久久久777片| www.av在线官网国产| www.色视频.com| 亚洲精品国产av成人精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 婷婷色综合大香蕉| 久久韩国三级中文字幕| 免费少妇av软件| 午夜福利在线在线| 一区二区三区四区激情视频| 久久精品国产亚洲av天美| 日本黄大片高清| 精品久久国产蜜桃| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产探花在线观看一区二区| 久久99精品国语久久久| 久久韩国三级中文字幕| 一级爰片在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲国产欧美人成| 国产精品一二三区在线看| 日本熟妇午夜| av免费观看日本| 国产精品女同一区二区软件| 一本一本综合久久| 国产淫语在线视频| 亚洲经典国产精华液单| eeuss影院久久| 六月丁香七月| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 综合色丁香网| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 午夜爱爱视频在线播放| 欧美xxⅹ黑人| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日韩国内少妇激情av| 夫妻午夜视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲av.av天堂| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 2022亚洲国产成人精品| 最近的中文字幕免费完整| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产精品熟女久久久久浪| 久久久久久久久久久免费av| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲,欧美,日韩| 国国产精品蜜臀av免费| 一级爰片在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 日本一本二区三区精品| 七月丁香在线播放| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲av.av天堂| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日本色播在线视频| 国产精品久久久久久久久免| 91av网一区二区| 久久精品国产亚洲网站| 男人舔奶头视频| 久久久久精品性色| 久久久久久九九精品二区国产| 99久国产av精品国产电影| 国产老妇女一区| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产成人freesex在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一级毛片aaaaaa免费看小| 色吧在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 97超视频在线观看视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 免费看美女性在线毛片视频| 国产精品99久久久久久久久| 嫩草影院新地址| 尾随美女入室| 日本免费a在线| 97超碰精品成人国产| 色综合站精品国产| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 一级av片app| 免费高清在线观看视频在线观看| 日本黄色片子视频| 91av网一区二区| 婷婷色av中文字幕| 日韩中字成人| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲欧洲国产日韩| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲精品,欧美精品| 麻豆乱淫一区二区| 国产一区二区三区av在线| 久久精品久久久久久久性| 国产精品福利在线免费观看| 免费在线观看成人毛片| 日韩欧美精品v在线| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 极品教师在线视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产乱人偷精品视频| 亚洲av.av天堂| 国产大屁股一区二区在线视频| www.色视频.com| av黄色大香蕉| xxx大片免费视频| 成人综合一区亚洲| 高清av免费在线| 久久这里有精品视频免费| 国国产精品蜜臀av免费| 日韩成人伦理影院| 观看美女的网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 成人午夜高清在线视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 亚洲综合精品二区| 国产高潮美女av| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产高清三级在线| 亚洲内射少妇av| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产亚洲最大av| 久久久欧美国产精品| 国产精品精品国产色婷婷| 日韩成人伦理影院| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 免费大片黄手机在线观看| 成人午夜高清在线视频| 欧美区成人在线视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 熟女人妻精品中文字幕| 黄片无遮挡物在线观看| 成年av动漫网址| 亚洲综合色惰| 日韩电影二区| 欧美性感艳星| 看十八女毛片水多多多| 午夜免费激情av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 水蜜桃什么品种好| 国产精品无大码| 极品教师在线视频| 久久久久久久久大av| 丝袜喷水一区| 丰满乱子伦码专区| 日本熟妇午夜| 丰满少妇做爰视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产成人aa在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 免费看日本二区| 久久精品国产自在天天线| 别揉我奶头 嗯啊视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 赤兔流量卡办理| 嫩草影院精品99| 欧美激情国产日韩精品一区| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲电影在线观看av| 乱系列少妇在线播放| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 免费看日本二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 一级爰片在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 一个人看视频在线观看www免费| 久久韩国三级中文字幕| 欧美xxⅹ黑人| 人妻系列 视频| 久久国产乱子免费精品| 国产在线一区二区三区精| 久久久久久久久久黄片| 成人午夜精彩视频在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 伦理电影大哥的女人| av在线播放精品| 免费av观看视频| 在线a可以看的网站| 国产黄色免费在线视频| av国产久精品久网站免费入址| 我的老师免费观看完整版| 大片免费播放器 马上看| av.在线天堂| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩欧美精品v在线| 丝瓜视频免费看黄片| xxx大片免费视频| 国产精品人妻久久久久久| 嫩草影院新地址| 亚洲成人av在线免费| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲人成网站在线播| 日韩三级伦理在线观看| 中文资源天堂在线| 国产精品久久视频播放| 22中文网久久字幕| 一级av片app| 高清日韩中文字幕在线| 免费看不卡的av| 国产高清有码在线观看视频| 精品熟女少妇av免费看| 韩国高清视频一区二区三区| 99热网站在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产av国产精品国产| 精品不卡国产一区二区三区| 大片免费播放器 马上看| 女人久久www免费人成看片| 禁无遮挡网站| 在线观看av片永久免费下载| 国产精品蜜桃在线观看| www.色视频.com| 精品一区二区三卡| 一边亲一边摸免费视频| 可以在线观看毛片的网站| 精品一区在线观看国产| 免费无遮挡裸体视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产成人一区二区在线| 六月丁香七月| 日韩av不卡免费在线播放| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品不卡视频一区二区| 午夜福利在线观看吧| 久久热精品热| 午夜精品国产一区二区电影 | 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产精品久久久久久av不卡| 22中文网久久字幕| 国产91av在线免费观看| 国产黄a三级三级三级人| 国产一区二区三区综合在线观看 | 嫩草影院入口| 边亲边吃奶的免费视频| 午夜福利成人在线免费观看| 高清av免费在线| 天天一区二区日本电影三级| 免费观看的影片在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 直男gayav资源| 麻豆国产97在线/欧美| www.av在线官网国产| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲熟女精品中文字幕| 精品久久久噜噜| 天美传媒精品一区二区| 日本黄大片高清| 免费看日本二区| 亚洲18禁久久av| av在线亚洲专区| 久久久久九九精品影院| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 中文字幕av成人在线电影| 一级片'在线观看视频| 色播亚洲综合网| 亚洲性久久影院| 免费大片18禁| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产精品一区二区三区四区久久| 高清毛片免费看| 精品国产三级普通话版| 欧美高清性xxxxhd video| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 熟妇人妻不卡中文字幕| 草草在线视频免费看| 日日啪夜夜爽| 久久久久久久久久黄片| 夜夜爽夜夜爽视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 99久久精品一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 国产一级毛片七仙女欲春2| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲无线观看免费| 国内精品宾馆在线| 美女大奶头视频| 免费观看精品视频网站| 国产免费视频播放在线视频 | 五月天丁香电影| 美女主播在线视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 午夜久久久久精精品| 舔av片在线| 99视频精品全部免费 在线| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 亚洲欧美日韩东京热| 成人性生交大片免费视频hd| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 精品久久久久久久末码| 日本与韩国留学比较| 天堂网av新在线| 成人午夜高清在线视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 又爽又黄a免费视频| 亚洲av一区综合| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲不卡免费看| 亚洲最大成人av| 欧美三级亚洲精品| 亚洲av不卡在线观看| 一级毛片电影观看| 国产有黄有色有爽视频| 极品教师在线视频| 一级毛片电影观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 极品教师在线视频| 欧美另类一区| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产 一区 欧美 日韩| 日本爱情动作片www.在线观看| 午夜福利高清视频| 天堂影院成人在线观看| 亚洲av一区综合| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 校园人妻丝袜中文字幕| 在线观看av片永久免费下载| 国产综合懂色| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲av中文av极速乱| 国产成人精品一,二区| 在线观看免费高清a一片| freevideosex欧美| 免费少妇av软件| 亚洲精品影视一区二区三区av| 黄片无遮挡物在线观看| 99久久精品一区二区三区| 久久久久九九精品影院| 久久精品国产自在天天线| 在线播放无遮挡| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲av.av天堂|