關(guān)蒼術(shù)親脂性化學(xué)成分研究

周媛媛，孫杰，江冰悅，楊詠琪，董柯杉，王萍，方振興，張曉娟

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點(diǎn)實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150036；3.黑龍江省科學(xué)院自然與生態(tài)研究所，黑龍江 哈爾濱 150040）

關(guān)蒼術(shù)（AtractylodesjaponicaKoidz.ex Kitam.）為菊科蒼術(shù)屬多年生草本植物，是一種常見的中藥材，主要分布于我國黑龍江、吉林、遼寧等地，為吉林省道地藥材［1］，其中吉林省延邊州的長白山區(qū)域的關(guān)蒼術(shù)品質(zhì)優(yōu)良。隨著蒼術(shù)的生存環(huán)境遭到嚴(yán)重破壞，野生資源被過度采挖，其野生資源越來越少，而關(guān)蒼術(shù)具有與蒼術(shù)相似的功效。關(guān)蒼術(shù)以其干燥根莖入藥，性味辛、苦、溫，具解表祛寒、利水消腫之功。藥理研究發(fā)現(xiàn)其具有抗炎抗菌、降血糖、抗癌、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等作用。臨床上常被用于治療急慢性肝炎、消化不良、糖尿病、高脂血癥、皮膚瘙癢等疾?。?-3］。本研究對關(guān)蒼術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離鑒定研究，探析其親脂性的化學(xué)成分。

1 儀器與材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠，型號：RE-2000）；萬分之一分析天平（瑞士 Metter Toledo，型號：AL204）；超導(dǎo)核磁共振儀（德國Bruker公司，型號：AV-400）；葡聚糖凝膠（Sephadex）（瑞典Pharmacia Fine，型號：LH-20）；半制備色譜柱（蘇州速研醫(yī)藥科技有限公司，型號：HPLCONE-5SL）；半制備型高效液相色譜（美國Agilent公司，型號：218）；中壓液相色譜儀（美國Grace公司，型號：Reveleris X2）；ESI高分辨質(zhì)譜儀（美國Thermo公司，型號：Q-Exactive）；柱層析硅膠（青島海洋化工廠，200～300目）；薄層硅膠（青島海洋化工廠，GF254）；用于半制備液相的試劑為色譜純，其他所用化學(xué)試劑均為分析純。

關(guān)蒼術(shù)藥材采集于吉林省延邊州的長白山區(qū)域，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院楊炳友教授鑒定為菊科植物關(guān)蒼術(shù)（AtractylodesjaponicaKoidz.ex Kitam.）的干燥根莖。

2 提取與分離

取已經(jīng)陰干的關(guān)蒼術(shù)藥材（10.0 kg）粉碎，使用95%乙醇溶液冷浸提取5次，每次5 h，最終得浸膏664.8 g。使用熱水將浸膏溶解分散，依次使用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯及水飽和正丁醇溶劑進(jìn)行減壓萃取，得其萃取物為石油醚萃取部位（62.4 g）、二氯甲烷萃取部位（150.6 g）、乙酸乙酯萃取部位（28.2 g）。

石油醚萃取部位用硅膠色譜柱，石油醚-乙酸乙酯（1∶0～0∶1）不同比例進(jìn)行梯度洗脫。薄層色譜檢測合并得到5個流分（Fr.A1～Fr.A5），F(xiàn)r.A1流分用硅膠色譜柱，使用石油醚-乙酸乙酯（1∶0～0∶1）不同梯度流動相洗脫后，用薄層色譜檢測合并得4個流分（Fr.A1.1～Fr.A1.4）。Fr.A1.3流分經(jīng)硅膠色譜柱，石油醚-乙酸乙酯（50∶0～0∶1）梯度洗脫后重結(jié)晶，分離得到化合物6（7.1 mg）、化合物8（3.8 mg）和化合物9（4.9 mg）。Fr.A2流分經(jīng)硅膠色譜柱，石油醚-乙酸乙酯（30∶1～0∶1）梯度洗脫后，TLC檢測合并得5個流分（Fr.A2.1～Fr.A2.5），F(xiàn)r.A2.4流分經(jīng)硅膠色譜柱，石油醚-乙酸乙酯（15∶0～0∶1）梯度洗脫后重結(jié)晶，分離得到化合物7（6.3 mg）、化合物1（5.6 mg）。

二氯甲烷萃取物質(zhì)經(jīng)硅膠硅膠色譜柱，二氯甲烷-甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脫，TLC檢測合并得6個流分（Fr.B1～Fr.B6）。Fr.B1流分經(jīng)硅膠色譜柱，二氯甲烷-甲醇（1∶0～0∶1）梯度洗脫，結(jié)合中壓制備柱進(jìn)行分離純化，得到化合物10（4.8 mg）和化合物5（6.7 mg）。Fr.B3流分經(jīng)硅膠色譜柱，接著使用二氯甲烷-甲醇（50∶1～5∶1）梯度洗脫，再結(jié)合Sephadex LH-20色譜進(jìn)行分離純化，重結(jié)晶得到化合物11（7.6 mg）、化合物2（5.3 mg）和化合物4（6.6 mg）。Fr.B6流分經(jīng)硅膠色譜柱，二氯甲烷-甲醇（15∶1～0∶1）梯度洗脫，結(jié)合半制備型高效液相色譜柱進(jìn)行分離純化，得到化合物12（5.4 mg）和化合物3（4.6 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

無色結(jié)晶（甲醇）。HR-ESI-MSm/z：245.119 6［M + H］+，分子式C15H16O3。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ∶7.63 （1H，d，J=9.8 Hz，H-4），7.32 （1H，d，J=8.8 Hz，H-5），6.82 （1H，d，J=8.8 Hz，H-6），6.26 （1H，d，J=9.8 Hz，H-3），5.24 （1H，t，J=7.2 Hz，H-2'），3.92 （3H，s，7-OCH3），3.52 （2H，d，J=7.2 Hz，H-1'），1.87 （3H，s，H-4'），1.66 （3H，s，H-5'）。13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ∶161.7 （C-2），160.3（C-7），152.7（C-10），143.9 （C-4），132.97（C-3'），125.9 （C-5），121.2 （C-2'），118.0 （C-8），113.2 （C-9），112.6 （C-3），107.5 （C-6），56.3（7-OCH3），25.6（C-5'），21.7 （C-1'），17.7（C-4'）。據(jù)與文獻(xiàn)［4］基本一致，故鑒定化合物1為osthol。

3.2 化合物2

黃色油狀物。HR-ESI-MSm/z：281.153 2 ［M +Na］+，分子式C17H22O2。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ∶6.49 （1H，d，J=2.5 Hz，H-7），6.37 （1H，d，J=2.5 Hz，H-5），6.22 （1H，d，J=9.8 Hz，H-4），5.54 （1H，d，J=9.8 Hz，H-3），5.10（1H，t，J=7.2 Hz，H-3'），2.16 （3H，s，8-CH3），2.09 （2H，m，H-2'），1.67 （2H，t，J=7.0 Hz，H-1'），1.68 （3H，s，H-5'），1.53 （3H，s，H-6'），1.33 （3H，s，2-CH3）。13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ∶148.8（C-6），144.5 （C-8a），131.2 （C-4'），130.9 （C-3），126.1 （C-8），124.3 （C-3'），122.9 （C-4），121.0（C-4a），117.2 （C-7），110.5（C-5），77.4 （C-2），40.5 （C-1'），26.1 （2-CH3），25.6 （C-5'），22.5 （C-2'），17.8 （C-6'），15.8 （8-CH3）。與文獻(xiàn)［5］基本一致，故鑒定化合物2為Atractylochromene。

3.3 化合物3

白色針狀結(jié)晶（甲醇）。HR-ESI-MSm/z：231.050 1 ［M + Na］+，分子式為C10H8O5。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ∶7.64（1H，s，7-OH），7.53（1H，d，J=9.8 Hz，H-4），7.22（1H，s，H-5），6.28（1H，d，J=9.8 Hz，H-3），3.88 （3H，s，8-OCH3）。13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ∶164.0（C-2），146.1（C-4），145.6 （C-8），145.2 （C-6），143.8（C-9），137.3 （C-7），114.7 （C-3），112.9 （C-10），106.1 （C-5），56.7 （8-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］中的6，7-二羥基-8-甲氧基香豆素一致，故鑒定化合物3為6，7-二羥基-8-甲氧基香豆素。

3.4 化合物4

白色針狀結(jié)晶（甲醇）。HR-ESI-MSm/z：245.051 8 ［M + Na］+，分子式為C11H10O5。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ∶7.50（1H，d，J=9.8 Hz，H-4），7.18 （1H，s，H-5），6.22（1H，d，J=9.8 Hz，H-3），3.89 （3H，s，6-OCH3），3.84 （3H，s，7-OCH3）。13CNMR （100 MHz，DMSO-d6）δ∶163.1（C-2），148.2（C-6），146.0（C-4），145.7（C-8），143.3（C-9），137.3（C-7），111.9 （C-10），111.6 （C-3），106.1（C-5），61.8 （7-OCH3），55.8 （6-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］中的8-羥基-6，7-二甲氧基香豆素一致，故鑒定化合物4為8-羥基-6，7-二甲氧基香豆素。

3.5 化合物5

白色針狀結(jié)晶（甲醇）。HR-ESI-MSm/z：177.168 8 ［M + H］+，分子式為C10H8O3。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ∶7.74 （1H，d，J=9.8 Hz，H-4），7.22 （1H，d，J=8.0 Hz，H-5），6.86（1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-6），6.80 （1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.19 （1H，d，J=9.8 Hz，H-3），3.87 （3H，s，7-OCH3）。13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ∶161.0（C-7），160.4 （C-2），156.0（C-9），145.3 （C-4），127.8 （C-5），111.8 （C-10），111.5 （C-3），113.2（C-6），103.5 （C-8），56.8 （7-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］中的7-甲氧基香豆素基本一致，故鑒定化合物5為7-甲氧基香豆素。

3.6 化合物6

白色粉末。HR-ESI-MSm/z：413.708 8［M +H］+，分子式為C29H48O。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ∶5.75 （1H，s，H-4），1.18 （3H，s，19-CH3），0.96 （3H，d，J=6.2 Hz，21-CH3），0.88 （3H，t，J=6.6 Hz，29-CH3），0.83 （3H，d，J=7.6 Hz，26-CH3），0.79 （3H，d，J=7.6 Hz，27-CH3），0.72（3H，s，18-CH3）。13CNMR（100 MHz，CDCl3）δ∶200.1 （C-3），172.2（C-5），123.6 （C-4），56.3 （C-17），56.2 （C-14），53.7（C-9），45.5 （C-24），42.2 （C-13），39.4 （C-12），38.5 （C-10），36.0 （C-20），35.9 （C-1），35.5 （C-8），33.9 （C-22），33.8 （C-2），33.0 （C-6），32.4（C-7），29.0 （C-25），28.7 （C-16），26.4 （C-23），24.0 （C-15），23.5 （C-28），21.0 （C-11），19.7（C-26），19.0 （C-27），18.7 （C-21），17.2 （C-19），12.0 （C-29），11.8 （C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］對照基本一致，故鑒定化合物6為豆甾-4-烯-3-酮。

3.7 化合物7

白色針狀結(jié)晶（甲醇）。HR-ESI-MSm/z：491.754 2［M + Na］+，分子式為C32H52O2。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶5.58 （1H，dd，J=8.0，2.5 Hz，H-15），4.48 （1H，dd，J=9.8，6.0 Hz，H-3），2.06（3H，s，H-32），1.17 （3H，s，H-27），0.98 （6H，s，H-29，30），0.96 （3H，s，H-24），0.91 （3H，s，H-23），0.89 （3H，s，H-28），0.85 （3H，s，H-26），0.79 （3H，s，H-25）。13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ∶170.8（C-31），158.0（C-14），116.9 （C-15），81.7（C-3），55.8 （C-5），48.6 （C-9），48.3 （C-18），40.8（C-19），38.2 （C-8），37.9 （C-4，13），37.6 （C-1，10），37.2 （C-22），36.8 （C-12），35.8 （C-17），35.5 （C-21），34.1 （C-16），33.2 （C-29），33.0（C-7），30.5 （C-27），29.6 （C-28），29.1 （C-20），27.7 （C-23），25.5 （C-26），23.0 （C-2），21.1 （C-30），21.0（C-32），18.6 （C-6），17.3 （C-11），16.8（C-24），15.1 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報道一致，故鑒定化合物7為蒲公英萜醇乙酸酯。

3.8 化合物8

白色針晶（甲醇），HR-ESI-MSm/z：233.147 4［M + H］+，分子式為C15H20O2。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶4.89 （1H，d，J=1.0 Hz，H-15α），4.81（1H，dd，J=11.5，6.4 Hz，H-8），4.58 （1H，d，J=1.0 Hz，H-15β），2.74 （1H，m，H-6α），2.41 （1H，dt，J=13.0，2.3 Hz，H-3α），2.30 （1H，m，H-9α），2.29（1H，m，H-6β），2.01（1H，td，J=13.0，5.6 Hz，H-3β），1.88 （1H，dt，J=12.8，1.4 Hz，H-5），1.84 （3H，t，J=1.6 Hz，H-13），1.66 （1H，m，H-1α），1.60（2H，m，H-2），1.34 （1H，m，H-1β），1.15 （1H，t，J=11.6 Hz，H-9β），0.88 （3H，s，H-14）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ∶174.6 （C-12），162.3 （C-7），148.2 （C-4），119.9 （C-11），106.8 （C-15），78.4（C-8），49.6 （C-5），47.2 （C-9），40.3 （C-1），37.2 （C-10），36.4 （C-3），25.8 （C-6），22.4 （C-2），16.8 （C-14），8.8 （C-13）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［11］相比一致，故化合物8鑒定為白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ。

3.9 化合物9

白色針晶（甲醇），HR-ESI-MSm/z：233.146 9［M + H］+，分子式為C15H20O2。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶5.06 （1H，t，J=10.0 Hz，H-8），4.93（1H，s，H-15α），4.67（1H，s，H-15β），2.64（1H，dd，m，H-6α），2.61 （1H，m，H-6β），2.39 （1H，d，J=5.5 Hz，H-5），2.36 （1H，d，J=13.8 Hz，H-3α），2.28 （1H，dd，J=13.8，10.0 Hz，H-9α），2.03 （1H，m，H-3β），1.88 （3H，s，H-13），1.36 （1H，dd，J=13.8，8.8 Hz，H-9β），0.69 （3H，s，H-14）。13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ∶175.0（C-12），162.5（C-7），148.3（C-4），121.0 （C-11），108.5 （C-15），77.8 （C-8），44.6 （C-9），43.1 （C-5），43.0（C-1），36.7 （C-3），35.5 （C-10），24.9 （C-6），23.3 （C-2），21.2（C-14），8.8 （C-13）。以上數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)［12］相比一致，故鑒定化合物9為白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ。

3.10 化合物10

白色結(jié)晶（甲醇）HR-ESI-MSm/z：261.182 8［M + H］+，分子式為C15H26O2。1H-NMR （pyridine-d5，400 MHz）δ∶4.81 （1H，d，J=2.0 Hz，H-15a），4.60（1H，d，J=2.0 Hz，H-15b），2.63 （1H，d，J=11.4 Hz，H-5），2.35 （1H，dd，J=11.0，13.2 Hz，H-3a），2.02（1H，m，H-3b），1.53 （6H，s，H-12，13），0.86 （3H，s，H-14）。13C-NMR （pyridine-d5，100 MHz）δ∶151.8（C-4），106.1 （C-15），76.1 （C-7），75.4 （C-11），44.7 （C-5），42.5（C-1），37.9 （C-3），37.0（C-9），36.5 （C-10），30.4 （C-6），27.5 （C-8），25.9（C-12），25.5 （C-13），24.0 （C-2），16.2 （C-14）。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，鑒定化合物10為桉葉-4（15）-烯-7β，11-二醇。

3.11 化合物11

無色針狀結(jié)晶（MeOH）。HR-ESI-MSm/z：201.177 7［M + Na］+，分子式為C10H10O3。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ∶7.79 （1H，d，J=16.8 Hz，H-7），7.41（2H，d，J=8.2 Hz，H-2，6），6.89 （2H，d，J=8.2 Hz，H-3，5），6.33 （1H，d，J=16.8 Hz，H-8），3.80 （3H，s，9-OCH3）。13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ∶160.5（C-9），158.0（C-4），145.5（C-8），130.1（C-2，6），127.5 （C-1），116.2 （C-3，5），115.1 （C-7），51.9 （9-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報道基本一致，故鑒定化合物11為反式對羥基桂皮酸甲酯。

3.12 化合物12

淡黃色粉末，ESI-MSm/z：205 ［M + Na］+，分子式為C9H10O4。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ∶9.79（1H，s，1-CHO），7.22 （2H，s，H-2，6），3.88 （6H，s，3，5-OCH3），3.76 （1H，s，4-OH）。13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ∶191.3 （1-CHO），148.3 （C-3，5），141.5（C-4），129.0（C-1），107.1（C-2，6），56.9（3，5-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報道對照基本一致，故鑒定化合物12為3，5-二甲氧基-4-羥基-苯甲醛，即丁香醛。

4 討論

關(guān)蒼術(shù)作為吉林省的道地藥材，具有發(fā)汗解表、明目祛風(fēng)、健脾燥濕等功效。隨著蒼術(shù)資源的不斷減少，關(guān)蒼術(shù)具有某些與蒼術(shù)相似的化學(xué)成分，如蒼術(shù)中的蒼術(shù)醇、蒼術(shù)酮等，具有和蒼術(shù)相似的功效，逐漸被開發(fā)作為蒼術(shù)的替代品使用。目前關(guān)蒼術(shù)已知的化合物有60多種，主要為倍半萜、炔類［16］、有機(jī)酸及其酯類。本實驗共分離出12種化合物，包括香豆素類、酯類、萜類等。通過鑒定，分別為osthol（1）、Atractylochromene（2）、6，7-二羥基-8-甲氧基香豆素（3），8-羥基-6，7-二甲氧基香豆素（4），7-甲氧基香豆素（5）、豆甾-4-烯-3-酮（6）、蒲公英萜醇乙酸酯（7）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ（8）、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（9）、桉葉-4（15）-烯-7β，11-二醇（10）、反式對羥基桂皮酸甲酯（11）、丁香醛（12）。其中osthol、6，7-二羥基-8-甲氧基香豆素，8-羥基-6，7-二甲氧基香豆素，7-甲氧基香豆素、豆甾-4-烯-3-酮、桉葉-4（15）-烯-7β，11-二醇、反式對羥基桂皮酸甲酯、丁香醛均為首次分離得到。