基于IL-25/NF-κB 信號(hào)通路探討益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯對(duì)支氣管哮喘大鼠氣道炎癥的改善作用

夏阿信，向雙娣，蘇小璞，黃帥亮，余建瑋

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004； 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006）

支氣管哮喘是一種常見(jiàn)慢性氣道炎癥疾病，全球哮喘患者超過(guò)3 億人，我國(guó)成年哮喘患者約4 000萬(wàn)人，其發(fā)病率逐年升高［1］。支氣管哮喘不能根治，但可通過(guò)規(guī)范化治療有效控制癥狀。支氣管哮喘的本質(zhì)是由多種炎癥細(xì)胞、炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子等相互作用產(chǎn)生的慢性氣道炎癥［2］，因此控制氣道炎癥是治療支氣管哮喘的關(guān)鍵。IL-25 是Th2 免疫應(yīng)答的放大器，可以誘導(dǎo)Th2 細(xì)胞釋放細(xì)胞因子如IL-4、IL-5 和IL-13 來(lái)增強(qiáng)2 型免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)IgE 產(chǎn)生和嗜酸性粒細(xì)胞增多，在策劃和放大哮喘的過(guò)敏性炎癥中起著關(guān)鍵作用［3］。NF-κB 是IL-25 的下游信號(hào)通路，可以調(diào)控多種炎癥因子如IL-4、IL-5、IL-13 的表達(dá)來(lái)達(dá)到調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的作用［4］。益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯是國(guó)醫(yī)大師洪廣祥根據(jù)哮喘發(fā)病內(nèi)因“氣陽(yáng)虛弱，衛(wèi)氣不足” 理論創(chuàng)制的防治支氣管哮喘的臨床有效方。以往研究表明，益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯可以降低炎癥因子水平，控制氣道炎癥達(dá)到防治哮喘的目的［5-6］，但其作用機(jī)制尚不明確。本研究旨在探究益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯抑制哮喘大鼠氣道炎癥的作用機(jī)制是否與IL-25/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 6 周齡SPF 級(jí)雄性SD 大鼠60 只，體質(zhì)量180～200 g，購(gòu)自斯貝福（北京） 生物技術(shù)有限公司 ［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK （京）2019-0010］，于江西中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)，溫度20～24 ℃，相對(duì)濕度40% ～60%，通風(fēng)良好，自由飲食飲水。本研究經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理號(hào)JZLLSC20220786）。

1.2 藥物 益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯由黃芪200 g、白術(shù)150 g、防風(fēng)150 g、白芍100 g、桂枝100 g、生姜100 g、大棗100 g、炙甘草50 g、仙茅100 g、仙靈脾150 g 組成，共取生藥1 200 g，藥材由江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院陳浩副主任鑒定為正品。白術(shù)、防風(fēng)、桂枝、白芍、生姜提取揮發(fā)油，其余藥材先加8 倍量冷水浸泡30 min，沸后再煎煮1 h； 第2 次加6 倍量水，煎煮40 min，去渣后過(guò)濾，合并濾液，濃縮，與揮發(fā)油混合成合劑，調(diào)至生藥量2 g/mL，于4 ℃冰箱密封保存。醋酸地塞米松片（國(guó)藥準(zhǔn)字H35020394，規(guī)格0.75 mg/片，批號(hào)LB2198） 購(gòu)自浙江仙琚制藥股份有限公司。

1.3 試劑 卵清蛋白（OVA） （美國(guó)Sigma 公司，貨號(hào)A5503）； 氫氧化鋁（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20210528）； 蘇木素-伊紅（HE） 染色試劑盒 （南昌雨露實(shí)驗(yàn)器材有限公司，批號(hào)220608）； IL-4、IL-5、IL-13 ELISA 試劑盒（江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào) MM-0191R1、MM-0094R1、MM-0085R1）； IL-25 抗體（美國(guó)SAB 公司，批號(hào)5312）； TRAF6 抗體（武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司，批號(hào)A16991）； DAB 顯色試劑盒（武漢賽維爾生物科技有限公司，批號(hào)G1212-200T）； IκBα 抗體、p-IκBα 抗體、NF-κB p65 抗體、p-NF-κB p65 抗體（美國(guó)Cell Signaling Technology 公司，批號(hào)4812S、2859S、8242S、3033S）。

1.4 儀器 PARI Turbo BOY 型超聲霧化器（德國(guó)百瑞公司）； KD-TS3A 全自動(dòng)脫水機(jī)（浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司）； DM2500 生物顯微鏡［徠卡顯微系統(tǒng)（上海） 有限公司］； XT-2000i 全自動(dòng)血液分析儀（日本希森美康公司）； CFX 熒光定量PCR 儀、Chemi Doc XRS 凝膠成像儀（美國(guó)Bio-Rad 公司）； M200PRO-多功能酶標(biāo)儀（江西華科精密儀器有限公司）。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥 將60 只SD 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d 后，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、地塞米松組和益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯低、中、高劑量組，每組10只，參考文獻(xiàn)［7］ 報(bào)道建立哮喘模型。第1 天，對(duì)照組大鼠腹腔注射1 mL 生理鹽水注射液，其余各組大鼠分別腹腔注射新鮮配制的卵清蛋白氫氧化鋁混懸液1 mL （含卵清蛋白100 mg 及氫氧化鋁100 mg） 致敏，并于第8 天重復(fù)第1 天的操作注射1 次。第15 天開(kāi)始予以2% OVA 霧化吸入激發(fā)哮喘，每天霧化1 次，每次30 min，持續(xù)2 周。每天霧化OVA 前1 h，根據(jù)人和大鼠體表面積換算給藥劑量，按照5 mL/kg 灌胃，對(duì)照組給予生理鹽水，益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯低、中、高劑量組分別給予1、2、4 g/mL 藥液，地塞米松組給予0.2 mg/mL 藥液，持續(xù)2 周。最后1 次霧化吸入后24 h 內(nèi)，用20%烏拉坦（6 mL/kg） 腹腔注射麻醉。

2.2 肺泡灌洗液收集及炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù) 結(jié)扎左側(cè)支氣管，用1 mL 生理鹽水進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，重復(fù)3 次。將回收的支氣管肺泡灌洗液（BALF） 使用全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行炎癥細(xì)胞分類計(jì)數(shù)； 剩余BALF 于4 ℃、1 500 r/min 離心10 min，取上清液于－80 ℃保存，待進(jìn)行ELISA 檢測(cè)。

2.3 HE 染色觀察肺組織病理變化 取大鼠右肺中葉置于4%多聚甲醛中浸泡固定。將固定好的肺組織流水沖洗過(guò)夜，全自動(dòng)脫水機(jī)脫水，石蠟包埋，切片機(jī)切4 μm 厚的石蠟切片，60 ℃烤片2 h，行HE 染色，中性樹(shù)膠封片，于光學(xué)顯微鏡下觀察肺組織病理狀態(tài)。

2.4 免疫組化法檢測(cè)肺組織IL-25 蛋白表達(dá) 石蠟切片脫蠟至水，檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液高溫修復(fù)，3%雙氧水溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，3%BSA 封閉，一抗4 ℃孵育過(guò)夜，孵育二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，脫水封片，于顯微鏡下觀察，細(xì)胞核為藍(lán)色，陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色，用Image J 軟件分析陽(yáng)性表達(dá)面積所占的比例。

2.5 ELISA 法檢測(cè)BALF 中IL-4、IL-5 和IL-13 水平 按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品的實(shí)際濃度。

2.6 RT-qPCR 法檢測(cè)肺組織IL-25、TRAF6 mRNA表達(dá) 采用TRIzol 法提取肺組織總mRNA，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)，將提取的RNA 反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再使用熒光定量PCR 儀進(jìn)行擴(kuò)增，以βactin為內(nèi)參，采用2－ΔΔCT公式進(jìn)行分析，引物由武漢賽維爾生物科技有限公司合成，序列見(jiàn)表1。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

2.7 Western blot 法檢測(cè)肺組織IL-25/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá) 提取肺組織總蛋白，按照BCA 蛋白濃度測(cè)定法進(jìn)行蛋白定量，95 ℃金屬浴進(jìn)行蛋白變性，SDS-PAGE 凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，5%BSA 溶液封閉，加一抗于4 ℃冰箱孵育過(guò)夜，TBST 洗膜30 min，孵育二抗1 h，再次洗膜30 min，條帶滴加顯影液，放入化學(xué)凝膠成像儀顯影，用Image J 軟件分析和處理蛋白條帶的灰度值。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 25.0 軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（±s） 表示，組間比較采用單因素方差分析，方差齊用LSD 檢驗(yàn)，以α＝0.05 為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠一般狀態(tài)及行為學(xué)觀察 除對(duì)照組外，模型組和給藥組大鼠在致敏第8 天后均出現(xiàn)輕微的咳嗽。第15 天霧化吸入OVA 后不久大鼠出現(xiàn)四肢撓鼻抓耳，咳嗽喘息，四處竄動(dòng)，過(guò)一會(huì)就靜臥不動(dòng)。大鼠霧化后，毛發(fā)逐漸粗糙，失去光澤，食欲不振，食量變小，喜臥，精神不佳等現(xiàn)象。對(duì)照組大鼠無(wú)異常表現(xiàn)。給藥組經(jīng)地塞米松和益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯干預(yù)后，大鼠一般狀態(tài)及行為改變較模型組均有不同程度的改善。

3.2 益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯對(duì)支氣管哮喘大鼠BALF 中炎癥細(xì)胞的影響 與對(duì)照組比較，模型組中的白細(xì)胞（WBC）、嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）、嗜堿性粒細(xì)胞（BAS）、中性粒細(xì)胞 （NEU）、淋巴細(xì)胞（LYM） 及單核細(xì)胞 （MON） 數(shù)量升高 （P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯各劑量組上述炎癥細(xì)胞數(shù)量均減少（P＜0.05，P＜0.01），見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠BALF 中炎癥細(xì)胞數(shù)量比較（×109/mL，±s，n＝9）Tab.2 Comparison of inflammatory cells in BALF of rats in each group （×109/mL，±s，n＝9）

表2 各組大鼠BALF 中炎癥細(xì)胞數(shù)量比較（×109/mL，±s，n＝9）Tab.2 Comparison of inflammatory cells in BALF of rats in each group （×109/mL，±s，n＝9）

注： 與對(duì)照組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別WBCEOSNEULYMMONBAS正常組0.65±0.210.21±0.120.10±0.030.26±0.110.08±0.040.00±0.00模型組5.93±0.22??1.27±0.27??0.79±0.19??2.45±0.44??1.35±0.34??0.07±0.02??地塞米松組1.53±0.08＃＃0.33±0.08＃＃0.21±0.06＃＃0.78±0.10＃＃0.20±0.08＃＃0.01±0.00＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯低劑量組4.32±0.46＃＃0.81±0.11＃＃0.65±0.08＃1.91±0.62＃0.89±0.17＃＃0.05±0.02＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯中劑量組2.91±0.42＃＃0.57±0.13＃＃0.35±0.10＃＃1.45±0.41＃＃0.52±0.12＃＃0.03±0.02＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯高劑量組2.29±0.24＃＃0.45±0.14＃＃0.34±0.08＃＃1.05±0.25＃＃0.42±0.23＃＃0.03±0.01＃＃

3.3 益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯對(duì)支氣管哮喘大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)的影響 與對(duì)照組比較，模型組肺組織支氣管管壁增厚，管腔狹窄變形，平滑肌增生，杯狀細(xì)胞化生，黏性分泌物增多，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；與模型組比較，益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯各劑量組及地塞米松組肺組織炎癥浸潤(rùn)情況得到不同程度改善，見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠肺組織病理形態(tài)（HE，×200）Fig.1 Pathological morphology of rat lung tissue in each group （HE，×200）

3.4 益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯對(duì)支氣管哮喘大鼠肺組織IL-25 蛋白表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織切片顯示棕色細(xì)胞增多，IL-25 蛋白表達(dá)升高（P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯各劑量組肺組織IL-25 蛋白表達(dá)降低（P＜0.01），見(jiàn)圖2。

圖2 各組大鼠肺組織IL-25 蛋白表達(dá)（IHC，±s，×200，n＝3）Fig.2 Expression of IL-25 protein in rat lung tissue of each group （IHC，±s，×200，n＝3）

3.5 益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯對(duì)支氣管哮喘大鼠BALF 中IL-4、IL-5、IL-13 水平的影響 與對(duì)照組比較，模型組大鼠BALF 中IL-4、IL-5、IL-13 水平升高（P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯各劑量組大鼠BALF 中IL-4、IL-5、IL-13水平降低（P＜0.01），見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠BALF 中IL-4、IL-5、IL-13 水平比較（ng/L，±s，n＝9）Tab.3 Comparison of IL-4，IL-5 and IL-13 levels in rat BALF of each group （ng/L，±s，n＝9）

表3 各組大鼠BALF 中IL-4、IL-5、IL-13 水平比較（ng/L，±s，n＝9）Tab.3 Comparison of IL-4，IL-5 and IL-13 levels in rat BALF of each group （ng/L，±s，n＝9）

注： 與對(duì)照組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃＃P＜0.01。

組別IL-4IL-5IL-13正常組116.70±7.1724.12±1.1626.55±1.65模型組199.10±9.70??45.40±1.32??61.10±1.50??地塞米松組129.90±6.40＃＃26.90±0.94＃＃33.63±1.88＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯低劑量組173.50±6.75＃＃39.42±1.75＃＃53.28±3.38＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯中劑量組165.60±6.57＃＃35.17±1.36＃＃45.13±3.59＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯高劑量組146.00±7.94＃＃31.50±1.60＃＃38.63±2.37＃＃

3.6 益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯對(duì)支氣管哮喘大鼠肺組織IL-25、TRAF6 mRNA 表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織IL-25、TRAF6 mRNA 表達(dá)升高（P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯各劑量組大鼠肺組織IL-25、TRAF6 mRNA 表達(dá)降低（P＜0.01），見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠肺組織IL-25、TRAF6 mRNA 表達(dá)比較（±s，n＝3）Tab.4 Comparison of IL-25 and TRAF6 mRNA expressions in rat lung tissue of each group （±s，n＝3）

表4 各組大鼠肺組織IL-25、TRAF6 mRNA 表達(dá)比較（±s，n＝3）Tab.4 Comparison of IL-25 and TRAF6 mRNA expressions in rat lung tissue of each group （±s，n＝3）

注： 與對(duì)照組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃＃P＜0.01。

組別IL-25TRAF6對(duì)照組1.01±0.011.00±0.01模型組5.67±2.09??2.06±0.34??地塞米松組1.28±0.02＃＃1.18±0.02＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯低劑量組4.64±0.57＃＃1.48±0.03＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯中劑量組3.31±0.33＃＃1.34±0.02＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯高劑量組2.29±0.25＃＃1.28±0.03＃＃

3.7 益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯對(duì)支氣管哮喘大鼠肺組織IL-25/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織IL-25、TRAF6、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65 蛋白表達(dá)升高（P＜0.01）； 與模型組比較，地塞米松組和益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯各劑量組大鼠肺組織IL-25、TRAF6、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65 蛋白表達(dá)均降低（P＜0.01），見(jiàn)圖3、表5。

圖3 各組大鼠肺組織IL-25/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白條帶圖Fig.3 Protein bands of IL-25/NF-κB signaling pathway in rat lung tissue of each group

表5 各組大鼠肺組織IL-25/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)比較（±s，n＝3）Tab.5 Comparison of expressions of IL-25/NF-κB signaling pathway related proteins in rat lung tissue of each group （±s，n＝3）

表5 各組大鼠肺組織IL-25/NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)比較（±s，n＝3）Tab.5 Comparison of expressions of IL-25/NF-κB signaling pathway related proteins in rat lung tissue of each group （±s，n＝3）

注： 與對(duì)照組比較，??P＜0.01； 與模型組比較，＃＃P＜0.01。

組別IL-25TRAF6p-IκBα/IκBαp-NF-κB p65/NF-κB p65對(duì)照組0.36±0.050.52±0.010.32±0.030.36±0.01模型組0.78±0.03??0.82±0.02??0.82±0.82??0.72±0.09??益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯低劑量組0.58±0.10＃＃0.73±0.01＃＃0.63±0.14＃＃0.56±0.03＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯中劑量組0.48±0.05＃＃0.68±0.04＃＃0.46±0.02＃＃0.50±0.02＃＃益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯高劑量組0.43±0.07＃＃0.67±0.01＃＃0.44±0.03＃＃0.47±0.01＃＃地塞米松組0.36±0.03＃＃0.62±0.02＃＃0.39±0.03＃＃0.43±0.02＃＃

4 討論

支氣管哮喘中醫(yī)學(xué)稱“哮病”，國(guó)醫(yī)大師洪廣祥指出“氣陽(yáng)虛弱是哮喘發(fā)作的重要內(nèi)因”。氣陽(yáng)虛弱重在肺、脾、腎三臟，肺失宣降，脾失運(yùn)化，腎失蒸化水液，形成痰瘀互結(jié)，內(nèi)伏于肺，導(dǎo)致哮喘發(fā)病。洪廣祥根據(jù)眾多古代醫(yī)籍記載和長(zhǎng)期臨床經(jīng)驗(yàn)提出“益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)法” 防治哮喘的觀點(diǎn)，并擬定了益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯，該方通過(guò)溫補(bǔ)肺脾腎三臟陽(yáng)氣，使肺的宣發(fā)肅降功能、脾之運(yùn)化水濕功能、腎之蒸化水液功能得以正常，使痰消瘀散，氣道炎癥減輕，氣道反應(yīng)性降低，以減少或控制哮喘的反復(fù)發(fā)作，從而達(dá)到防治哮喘的目的［8］。

支氣管哮喘是一種常見(jiàn)的慢性氣道炎癥性疾病，可導(dǎo)致咳嗽、喘息、呼吸急促和胸悶等癥狀［9］。哮喘癥狀是主要由氣道炎癥引起的，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管黏膜充血水腫，黏液分泌增多，導(dǎo)致氣道重塑和氣道高反應(yīng)性［10］。大量研究表明，細(xì)胞因子在支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制中產(chǎn)生重要的作用［11］。當(dāng)受到過(guò)敏原刺激時(shí)，抗原被樹(shù)突狀細(xì)胞捕獲后，誘導(dǎo)Th0 細(xì)胞向Th2 細(xì)胞分化并激活產(chǎn)生炎癥因子，如IL-4、IL-5 和IL-13［12］。IL-4 和IL-13可以誘導(dǎo)B 細(xì)胞合成IgE，導(dǎo)致肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞致敏，從而釋放促炎介質(zhì)，刺激黏液高分泌和氣道高反應(yīng)性，而IL-5 主要負(fù)責(zé)嗜酸性粒細(xì)胞的成熟和募集［13］。本研究發(fā)現(xiàn)，益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯可以改善大鼠哮喘癥狀； 降低哮喘大鼠BALF 中炎癥細(xì)胞數(shù)量及IL-4、IL-5 和IL-13 水平； 改善肺組織支氣管結(jié)構(gòu)及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況，減少黏液分泌和上皮杯狀細(xì)胞化生，抑制氣道炎癥反應(yīng)。

IL-25 也稱為IL-17E，是IL-17 細(xì)胞因子家族的獨(dú)特成員，可以局部或全身地促進(jìn)和增強(qiáng)輔助性T 型2 （Th2） 反應(yīng)［14］。研究表明，IL-25 及其同源受體IL-17RB/RA 的表達(dá)在哮喘病癥中顯著上調(diào)［15］。研究還發(fā)現(xiàn)IL-25 可以誘導(dǎo)典型的嗜酸性粒細(xì)胞炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重塑，表現(xiàn)為杯狀細(xì)胞增生，上皮下膠原沉積和血管生成［16］。IL-25在與IL-17RB/IL-17RA 復(fù)合物結(jié)合后，ACT1 被招募到IL-17RB 的SEFIR 結(jié)構(gòu)域上，ACT1 再招募TRAF6 至受體IL-17RB 上激活下游NF-κB 信號(hào)通路［17］。NF-κB 通路是參與生理過(guò)程和疾病發(fā)生的重要細(xì)胞信號(hào)通路之一，它在控制免疫功能、炎癥、應(yīng)激反應(yīng)、分化、凋亡和細(xì)胞存活方面起重要作用［18］。在細(xì)胞未受到刺激時(shí)，NF-κB 與抑制性IκBα 蛋白結(jié)合，以非活性狀態(tài)存在于細(xì)胞質(zhì)中［19］，當(dāng)機(jī)體受到過(guò)敏原刺激時(shí)，IκBα 會(huì)迅速磷酸化并被降解，與NF-κB 解離，然后NF-κB 轉(zhuǎn)位進(jìn)入核內(nèi)并激活靶基因，誘導(dǎo)Th2 細(xì)胞應(yīng)答分泌促炎細(xì)胞因子如IL-4、IL-5、IL-13，從而參與調(diào)控炎癥反應(yīng)［20］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯能夠下調(diào)肺組織IL-25、TRAF6 mRNA 和蛋白表達(dá)，抑制IκBα、NF-κB p65 磷酸化，說(shuō)明益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯能夠有效抑制IL-25/NF-κB 信號(hào)通路活化，抑制炎癥反應(yīng)。

綜上所述，益氣溫陽(yáng)護(hù)衛(wèi)湯可有效緩解哮喘大鼠的哮喘癥狀，抑制氣道炎癥，其作用與抑制IL-25/NF-κB 信號(hào)通路活化，減少炎癥因子表達(dá)有關(guān)。