泗水裘皮羊電刺激采精參數(shù)研究

王慶軍，王 龍，王啟鳴，王曉燕，常仲樂*

（1.山東省臨朐縣畜牧業(yè)發(fā)展中心寺頭畜牧獸醫(yī)工作站，山東 臨朐 262606；2.山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，山東 泰安）

泗水裘皮羊又稱泗河綿羊，是羊亞科羊?qū)賱游?，原產(chǎn)于山東省濟寧市的泗河兩岸，培育歷史悠久，生物學特性獨特。泗水裘皮羊品質(zhì)獨特，頭長多角，是中國的稀有品種。泗水裘皮羊體格健壯，善于爬山，可終年放牧。其屬裘肉兼用羊，毛被光澤，毛股清晰，花案美觀，皮薄堅韌，羔皮可與灘羊二毛皮媲美，是山東省地方優(yōu)良家畜品種。泗水裘皮羊繁殖性能較低。正常情況下，母羊的性成熟一般在10 個月以上，公、母羊1～1.5 歲方能配種繁殖。發(fā)情無明顯季節(jié)性。一般飼養(yǎng)條件下，成年母羊可兩年產(chǎn)三胎，一般一胎單羔，產(chǎn)雙羔較少。由于受肉羊市場沖擊，許多裘皮羊養(yǎng)殖戶開始引進小尾寒羊以及其他肉、毛品種和裘皮羊同群飼養(yǎng)，并用其公羊雜交裘皮羊，不僅直接造成裘皮羊種群混亂，純度下降，且致使數(shù)量日趨減少，導致保種形勢十分嚴峻。為保存瀕危遺傳資源，精液冷凍保存是一個有效的方法，但泗水裘皮羊膽小怕人，無法采用假陰道采精，為了順利采集泗水裘皮羊精液，有必要探索泗水裘皮羊電刺激采精參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 選擇純種，年齡2～6 歲之間，體格健壯，睪丸發(fā)育正常和左右對稱，繁殖機能正常的泗水裘皮羊公羊作為采精對象。

1.1.2 主要器材與試劑 電刺激采精器（電刺激頻率固定、電壓可調(diào)，電流隨電壓變化）、普通生物顯微鏡、恒溫臺、剪毛剪、保定架、集精杯，假陰道、精液密度分光光度計、75%醫(yī)用酒精、75%酒精棉球、0.9%生理鹽水、0.1%新潔爾滅、0.1%高錳酸鉀溶液、3%氯化鈉溶液等。

1.2 方法

1.2.1 采精前準備 采精所用器皿、器械均首先用清水洗滌，其次用酒精消毒，最后用生理鹽水沖洗干凈，干燥后備用。符合標準的公羊保定在保定架上，然后采精前剪凈尿道口周圍被毛，依次用高猛酸鉀溶液、生理鹽水清洗消毒干凈、擦干。

1.2.2 采精操作方法 將電刺激棒用稀釋的新潔爾滅溶液浸濕后，連接到電刺激采精器上，掀起尾部毛，緩緩全部插入肛門。打開采精器電源開關，從低電壓緩慢調(diào)整電壓，在一定電壓下持續(xù)10 s，立即將電壓調(diào)節(jié)旋轉(zhuǎn)到零點，并將電刺激棒拔出放到盛有新潔爾滅溶液的桶中。在陰莖伸出時，一名技術人員一只手持一端裝著集精杯的假陰道，另一只手托住陰莖使其被假陰道包裹，注意觀察是否有精液排出，最后陰莖不再伸出時用手將包皮中的精液趕凈，確保精液全部從假陰道壁流向集精杯中。

1.2.3 精液品質(zhì)鑒定 記錄每次的采精量，用精液密度分光光度計測定精子密度；把稀釋后的精液滴到載玻片上，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察呈直線前進的精子，從而計算出精子活率；對分別在7～12 V、15～20 V 和25～30 V 刺激下采出的精液進行精液品質(zhì)比較，進而分析不同電壓與精液品質(zhì)的關系；選取在25～30 V 刺激下5 只公羊所采出的精液進行精液品質(zhì)比較，進而分析在相同電壓（25～30 V）下不同個體精液品質(zhì)的差異。精子活率=直線前進的精子數(shù)/總精子數(shù)。

1.2.4 精液稀釋 精液稀釋液配制：Ⅰ液（鮮精時用），葡萄糖（3 g）+檸檬酸鈉（3 g）+雙蒸水（純凈水）100 mL，過濾，除雜質(zhì)，加入青霉素20 萬單位、鏈霉素0.2 g 過濾除菌，保存在4 ℃待用，用前取出80 mL 加入卵黃20 mL 充分搖勻備用；II 液（冷凍保存液）：取I 液44 mL+6 mL甘油。按比例對采出的精液進行精液稀釋。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗數(shù)據(jù)采用 IBM SPSS Statistics 27 進行數(shù)據(jù)分析，采精成功率、精子活率采用x2檢驗，精液量和精液密度采用方差分析，結(jié)果以平均值±標準誤差（Mean ± SE）表示。

2 結(jié)果

2.1 泗水裘皮羊?qū)﹄姶碳げ删姆磻?/h3>

試驗中發(fā)現(xiàn)在將探頭全部插入直腸提供電刺激后，電壓逐漸升高至12 V 后，公羊均能對電刺激做出反應，表現(xiàn)為后腿登直肌肉僵硬、陰莖勃起；刺激電壓18 V 以內(nèi)公羊陰莖雖有勃起，但陰莖卻少見伸出包皮外；電壓低時排精需要的刺激時間長，從排精清至最后排完精所用的時間也長（表1）。試驗中還發(fā)現(xiàn)個體在利用電刺激采精時，電刺激至排精時間也存在差異，有時反應敏感電刺激至排精時間短，有時反應不敏感電刺激后并很長時間才能排精。

表1 泗水裘皮羊?qū)﹄姶碳げ删姆磻?/p>

2.2 電刺激采精電壓對泗水裘皮羊采精成功率的影響

試驗中發(fā)現(xiàn)電刺激采精電壓對泗水裘皮羊采精成功率的影響較大，7～12 V 的采精成功率為42%，是三種電壓中最低的，25～30 V 的采精成功率最高達到67.9%，7～12 V 的采精成功率顯著低于25～30 V 的采精成功率（表2）。

表2 不同電壓刺激泗水裘皮羊采精成功率

2.3 電刺激采精電壓對精液品質(zhì)的影響

在 7 ～12 V 刺激下的精液量平均為1.18 mL，15 ～20 V 刺激下的精液量平均為0.92 mL，25 ～30 V 刺激下的精液量平均為0.67 mL，是三種電壓中采集精液量最少的電壓，25～30 V 電壓下采集的精液量與7～12 V 刺激下的精液量差異顯著（P＜0.05）；7～12 V 刺激下的精子密度平均為6.14 億/mL，15～20 V 刺激下的精子密度平均為7.36 億/mL，25～30V 刺激下的精子密度平均為8.11 億/mL，雖然在25～30V刺激下的精子密度最高，但三種電壓刺激下的精子密度差異不顯著；利用三種不同電壓實施電刺激采精所采精子的活率差異不顯著（P＜0.05）（表3）。

表3 泗水裘皮羊電刺激采精電壓與精液品質(zhì)關系

2.4 相同電刺激采精電壓下不同個體精液品質(zhì)的差異

在相同電壓下，個體之間的平均精液量和精子活率差異不顯著（P＞0.05），不同個體密度存在較大差異，1 號精子密度最高，2 號精子密度最低，差異顯著（P<0.05）（表4）。試驗中還發(fā)現(xiàn)精液的顏色主要以乳白色為主，精子密度在5～10 億/mL 時基本呈現(xiàn)乳白色，密度高于13 億/mL 時呈現(xiàn)灰白色，密度不足2 mL 時呈現(xiàn)淡白透明色。

表4 25～30V 電壓下泗水裘皮羊不同個體精液品質(zhì)的差異

2.5 月份對泗水裘皮羊的精液品質(zhì)的影響

5月、6月采集的精液量差異不大但均高于11月采集的精液量，差異顯著（P＜0.05），9月、10月與其它月份采精精液量差異不顯著；不同月份的精子密度差異不顯著（P＞0.05），5、6月的精子活率較低，但不同月份的差異不顯著，見表5。

表5 不同月份泗水裘皮羊的精液品質(zhì)

3 討論與結(jié)論

目前，在國內(nèi)外采精中，電刺激采精技術是使用較為廣泛的一種技術。在我國畜牧生產(chǎn)中電刺激采精技術應用也越來越廣泛，在耗牛、藏羊、滇南小耳豬等動物人工采精中常用電刺激采精法采集精液，還有在林麝、朱鹮及塔里木馬鹿等一些瀕危物種也常用電刺激采精法采集精液。孫萬林等人進行了藏羊電刺激采精實驗，用電刺激采精完成對藏羊的精液采集[1]。目前尚未見泗水裘皮羊電刺激采精研究的相關文獻報道。

趙貴軍等人對電刺激采精效果進行了分析，其中電擊棒插入肛門的深度為（7.1±0.7）cm，采精效果和排精時間均較好[2]。本試驗電擊棒插入肛門的深度為16 cm，采精效果和排精時間比趙貴軍等人的研究要好，但考慮到品種不同、電壓不同和年齡不同會出現(xiàn)差異，這方面還需繼續(xù)深入研究。

王燕文等人對耗牛電刺激采精技術的研究表明，耗牛電刺激采精時15～25 V 最易采出，精液質(zhì)量好，密度高[3]。而本試驗中泗水裘皮羊在25～30 V 采精量較其余兩組為最少，但精子活率和密度均較高。這說明不同動物對電刺激的敏感性不同，采精最佳的電刺激電壓也不同[4]；刺激電壓在較低電壓和緩慢往上加的情況下，可能會使副性腺分泌物過多，導致精清過多，從而使精液量較多，精子密度下降，這與表3 的數(shù)據(jù)相符合。

余忠祥對高寒牧區(qū)藏羊公羊電刺激采精試驗的效果觀察表明，不管高原型藏羊年齡相同或不同，種公羊平均采精量、精液顏色、平均精子密度及平均精子活力均會因為個體之間差異有高有低[5]，與本表4 的試驗結(jié)果相似，不同個體在相同電壓電刺激下，每個個體的平均采精量、平均精子密度及平均精子活力存在著個體差異。泗水裘皮羊個體對電壓敏感性的不同，也會造成在相同電壓下個體的平均采精量、平均精子活率及平均精子密度均有所差異，這是由于個體睪丸發(fā)育后體睪大小及曲精細管長短造成的生精機能差異所導致的。

張笑科等人不同季節(jié)對豬精液品質(zhì)的研究中表明，春季精液體積顯著高于夏、秋、冬季（P<0.05）；精液密度、精子活力和總精子數(shù)在秋、冬季均顯著高于春、夏季（P<0.05）[6]。而本試驗表5 中的試驗結(jié)果與其相似，采精量5月份均高于其他采精月份。精子活率和精子密度在9、10月份均高于其他采精月份，但差異不顯著。在不同月份個體的平均采精量、平均精子活率及平均精子密度均有所差異，這可能是因為熱應激和冷應激使泗水裘皮羊繁殖機能下降所導致的。