興安杜鵑3種主要成分的HPLC測定及其對大鼠氣管平滑肌的舒張作用

張穎慧 王晨蔚 周苑婷 陳思淼 張怡然 孫宇婷 張琳

摘要 ［目的］建立同時測定興安杜鵑中金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素含量的高效液相色譜法（HPLC），并探討興安杜鵑提取物及3種主要成分對大鼠氣管平滑肌舒張作用的影響及其作用機制。［方法］采用HPLC法測定興安杜鵑中金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的含量并進行方法學考察。采用離體氣管灌流法取大鼠氣管環(huán)，將氣管環(huán)固定于麥氏浴皿中，使用撲爾敏、吲哚美辛、格列苯脲、左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）、硝苯地平和普萘洛爾進行預孵育，待氣管環(huán)張力穩(wěn)定后，加入60 mmol/L KCl溶液收縮氣管環(huán)，進行興安杜鵑對氣管環(huán)的舒張試驗，觀察大鼠氣管平滑肌張力變化。［結果］興安杜鵑中3種主要成分HPLC測定方法考察結果顯示，3種成分均在2～80 μg/mL線性關系良好，平均回收率分別為金絲桃苷100.3%（RSD=2.63%）、槲皮素102.7%（RSD=2.89%）、杜鵑素102.1%（RSD=2.36%）。在吲哚美辛、格列本脲和普萘洛爾孵育組織中，興安杜鵑提取物及3種單體成分的舒張作用與未孵育組相比沒有顯著差異；在撲爾敏、L-NAME和硝苯地平孵育的組織中，興安杜鵑及金絲桃苷與未孵育的組織相比有顯著差異，舒張作用有所降低。這種現(xiàn)象可能是通過抑制組胺H1受體、一氧化氮合酶途徑和鈣離子通道介導的鈣離子內(nèi)流實現(xiàn)的。［結論］該試驗建立的方法簡單、準確，能快速測定興安杜鵑中金絲桃苷、槲皮素和杜鵑素的含量，為其質(zhì)量評價和控制提供了有效的分析手段；并且這3種成分與興安杜鵑舒張氣管的作用有關，可作為支氣管擴張劑開發(fā)的理論依據(jù)。

關鍵詞 興安杜鵑；HPLC；金絲桃苷；槲皮素；杜鵑素；含量測定；氣管平滑??；舒張作用

中圖分類號 R285? 文獻標識碼 A? 文章編號 0517-6611（2024）03-0163-08

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.03.040

HPLC Determination of Three Main Components of Rhododendron dauricum L. and Their Relaxing Effects on Rat Tracheal Smooth Muscle

Abstract ［Objective］To establish a method for the simultaneous determination of hyperin， quercetin and farrerol in Rhododendron dauricum by HPLC， and to discuss the effects of Rhododendron dauricum extract and its three main components on the relaxation of rat tracheal smooth muscle and the mechanism. ［Method］ The contents of hypericin， quercetin and farrerol in Rhododendron dauricum were determined by HPLC and the methodology was investigated. Rat tracheal rings were obtained by in vivo air tube perfusion method， and fixed in a Mack’s bath. The tracheal rings were pre-incubated with chlorphenamine， indometacin， glibenclamide， L-nitroarginine methyl ester （L-NAME）， nifedipine and propranolol. After the tension of the tracheal ring stabilized， 60 mmol/L KCl solution was added to shrink the tracheal ring. The relaxation experiment of tracheal ring by Rhododendron dauricum was conducted to observe the changes of tracheal smooth muscle tension in rats.［Result］The investigation results of the HPLC determination method for three main components in Rhododendron dauricum showed that the linear relationship between the three components was good in the range of 2-80 μg/mL. The average recovery rates were 100.3% （RSD=2.63%） of hypericin， 102.7% （RSD=2.89%） of quercetin and 102.1% （RSD=2.36%） of farrerol. The diastolic effects of the extract and the three main components of Rhododendron dauricum in the incubated tissue of indometacin， glibenclamide and propranolol were not significantly different from those in the unincubated group. The diastolic effects of Rhododendron dauricum and hypericin in the tissues incubated with chlorphenamine， L-NAME and nifedipine were significantly different from those in the unincubated tissues. This phenomenon may be achieved through inhibition of histamine H1 receptors， nitric oxide synthase pathways， and calcium channel mediated calcium influx.［Conclusion］ The established method is simple， accurate， and can quickly determine the content of hypericin， quercetin and farrerol in Rhododendron dauricum， providing an effective analytical means for quality evaluation and control. In addition， these three components are related to the effect of diastolic trachea of Rhododendron dauricum L.， and can be used as a theoretical basis for the development of bronchodilators.

Key words Rhododendron dauricum;HPLC;Hypericin;Quercetin;Farrerol;Content determination;Tracheal smooth muscle;Relaxation

興安杜鵑（Rhododendron dauricum L.）屬杜鵑花科杜鵑花屬，為國家二級重點保護植物，其主要有效成分包括黃酮類、揮發(fā)油類和有機酸類等［1-3］。研究發(fā)現(xiàn)，興安杜鵑具有鎮(zhèn)咳、祛痰的臨床作用，常應用于急性、慢性支氣管炎、支氣管哮喘等病癥的治療［4］。我國研究人員發(fā)現(xiàn)興安杜鵑提取物、金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素可以濃度依賴性舒張鼠胸主動脈［5-8］。支氣管哮喘（bronchial asthma）簡稱哮喘，常以氣道炎癥反應為主要特征，氣管平滑?。╰racheal smooth muscle，TSM）的收縮特性在哮喘發(fā)作中起重要作用［9］。興安杜鵑在哮喘的臨床治療中應用較多［10-11］，但其作用機理仍不明確。為此，該研究建立興安杜鵑3種主要成分含量測量方法，采用離體氣管環(huán)灌流試驗，考察興安杜鵑提取物及3種主要成分對大鼠離體TSM張力的影響，并初步探討興安杜鵑舒張氣管平滑肌的作用機制。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀器。

LC-20AT型高效液相色譜儀（Shimadzu公司）；H1650R型高速離心機（湘儀公司）；AB120型電子分析天平、DXY-6恒溫加熱水浴鍋（SanLiang公司）；生物機能實驗系統(tǒng)、ZH-HX-Z生物信號采集與分析系統(tǒng)、192203張力換能器（淮北正華生物儀器設備有限公司）；BT100蠕動泵（北京東南儀城）；麥氏浴皿（振華生物醫(yī)藥有限公司）；UP-400S超聲波細胞破碎儀（上海熙揚儀器有限公司）。

1.1.2 藥品與試劑。

興安杜鵑葉購自北京同仁堂哈爾濱藥房；撲爾敏、吲哚美辛（Indo）、格列苯脲（Gli）、左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）、硝苯地平、普萘洛爾、茶堿，均購自上海Macklinl公司；金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素，均購自成都Desite公司，純度≥98%；甲醇，購自J&K Scientific；磷酸、甲基亞砜（DMSO）、氯化鉀（KCl）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4）、氯化鈉（NaCl）、碳酸氫鈉（NaHCO3）、氯化鈣（CaCl2）、氯化鎂（MgCl2）、葡萄糖（Glucose），均購自天津市致遠化學試劑有限公司。

1.1.3 實驗動物。

清潔級SD雄性大鼠［12］ 60只，體重220～250 g，購自哈爾濱市雙城區(qū)新興鎮(zhèn)見林養(yǎng)殖場，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（黑）2019-001，飼養(yǎng)時光照周期為0.5 d明、0.5 d暗，期間自由飲水、進食。

1.2 試驗方法

1.2.1 興安杜鵑提取物的制備及其3種主要成分的含量測定。

1.2.1.1 興安杜鵑樣品溶液的制備。

取興安杜鵑粉末（過60目篩）5 g，精密加入100%乙醇100 mL，采用超聲細胞破碎提取法提取，重復2次，合并濾液。12 000 r/min離心10 min，取上清液進行HPLC檢測。

1.2.1.2 標準品溶液的配制。

分別精確稱取5 mg金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素標準品，置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的對照品儲備液，于4 ℃保存。

1.2.1.3 HPLC條件。

采用HPLC分析興安杜鵑中的3種主要成分。液相色譜柱為Diamonsil反相C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～5 min，40%A；5～15 min，40%～50%A；15～20 min，50%～60%A；20～30 min，60%～65%A；30～40 min，65%A），在297和360 nm處同時檢測，柱溫30 ℃，進樣量10 μL，流速為1.0 mL/min。

1.2.2 方法學考察。

1.2.2.1 線性關系考察。

將“1.2.1.2”中3種標準品溶液等比例混合，并用甲醇稀釋為2、10、20、40、60、80 μg/mL，分別按“1.2.1.3”中HPLC條件測定（平行3次），以樣品濃度和峰面積繪制標準曲線。

1.2.2.2 精密度試驗。

將“1.2.1.2”中3種標準品溶液等比例混合，按照“1.2.1.3”中HPLC條件測定，單日內(nèi)平行進樣6組，得出3種主要成分峰面積的相對標準偏差（RSD）。

1.2.2.3 穩(wěn)定性試驗。

取室溫放置的興安杜鵑樣品溶液，于48 h內(nèi)不同時間進樣，按照“1.2.1.3”中HPLC條件測定，得出3種主要成分峰面積的RSD。

1.2.2.4 重復性試驗。

取6份“1.2.1.1”制備的興安杜鵑樣品溶液，按照“1.2.1.3”HPLC條件測定，得出3種主要成分峰面積的RSD。

1.2.2.5 加樣回收率試驗。

取3組已知興安杜鵑含量的樣品溶液，分別混入高、中、低濃度標準品溶液，按照“1.2.1.1”方法制備樣品溶液，按照“1.2.1.3”中HPLC條件測定，得出3種主要成分的回收率及RSD。

1.2.2.6 樣品含量測定。

將“1.2.1.1”制備的興安杜鵑樣品按照“1.2.1.3”中HPLC條件對3種主要有效成分進行測定，記錄峰面積，計算興安杜鵑樣品中3種主要成分的含量。

52卷3期????????? 張穎慧等 興安杜鵑3種主要成分的HPLC測定及其對大鼠氣管平滑肌的舒張作用

1.2.3 興安杜鵑樣品及其3種主要成分受試樣品的制備。

采用超聲細胞破碎提取法提取，提取液經(jīng)減壓濃縮及真空干燥制備成浸膏（1 g浸膏相當于2 g生藥）。臨用前，用克雷伯-亨斯雷特溶液（Kerbs-H）配制成濃度為10 mg/mL的受試樣品，并在進行氣管舒張試驗時，麥氏浴皿中的終濃度分別為0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg/mL。

分別將金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素配制成0.46、0.30、0.30 mg/mL的受試藥物母液，臨用前，用Kerbs-H溶液稀釋，使其在麥氏浴皿中的終濃度分別為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16 mg/mL。

1.2.4 氣管舒張試驗裝置及條件。

將試驗裝置依次連接，如圖1，麥氏浴皿中加入恒溫Krebs-H溶液，打開氧氣閥門持續(xù)通入氧氣（氣泡大小以不影響張力換能器為宜）。然后打開生物信號采集分析系統(tǒng)，設置張力為30 g，采樣通道1，放大倍數(shù)100 mV，上限30 Hz，下限直流。預熱儀器30 min。

1.2.5 大鼠氣管環(huán)的制備［13］。

利用頸椎脫臼法處死大鼠，取出完整氣管，將氣管迅速放入充氧、預冷的Kerbs-H溶液（NaH2PO4 1.18 mmol/L、MgCl2 1.20 mmol/L、NaHCO3 24.80 mmol/L、CaCl2 2.52 mmol/L、KCl 4.70 mmol/L、NaCl 118.30 mmol/L、Glucose 11.10 mmol/L）中，裁制成長度3～4 mm的氣管環(huán)，剪掉包覆其上的結締組織和脂肪，備用。

1.2.6 大鼠氣管環(huán)張力的測定。

通過2個鐵鉤將氣管環(huán)固定在裝有10 mL Kerbs-H溶液的麥氏浴皿中。Kerbs-H溶液溫度控制在（37.0±0.5）℃，5%CO2～95%O2穩(wěn)定充氣。調(diào)節(jié)靜息張力為1 g，平衡90 min，每15 min更換一次新鮮的Kerbs-H溶液。平衡結束后，用60 mmol/L KCl溶液刺激氣管環(huán)，重復3次，使其發(fā)生最大幅度收縮，待氣管環(huán)穩(wěn)定30 min后，開始氣管舒張試驗。

1.2.7 興安杜鵑對TSM的舒張作用。

1.2.7.1

興安杜鵑提取物及其3種主要成分對KCl預收縮的氣管環(huán)張力的影響。為了研究興安杜鵑提取物及其3種主要成分對氣管環(huán)平滑肌的舒張作用，首先用收縮劑60 mmol/L的KCl使氣管環(huán)預收縮7 min，然后依次加入興安杜鵑提取液、金絲桃苷、杜鵑素、槲皮素、茶堿和DMSO，其中茶堿和DMSO分別為陽性對照和陰性對照，試驗濃度設計如表1所示，記錄氣管最大舒張值，并按以下公式計算舒張率：

1.2.7.2

撲爾敏對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。首先向浴皿中加入10-5 mol/L撲爾敏組胺H1受體拮抗劑，孵育30 min，當氣管環(huán)張力維持常態(tài)時，加入60 mmol/L的KCl用于預收縮氣管環(huán)，當氣管環(huán)張力達到峰值時，再分別加入興安杜鵑提取液、金絲桃苷、杜鵑素、槲皮素，設置對照組為未孵育的氣管環(huán)，整體試驗濃度設計如表2所示，并記錄氣管最大舒張值。

1.2.7.3 Indo對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

首先向浴皿中加入10-5 mol/L Indo環(huán)氧合酶抑制劑，孵育時間與加樣方式同“1.2.7.2”，并記錄氣管最大舒張值。

1.2.7.4 Gli對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

首先向浴皿中加入10-5 mol/L Gli KATP 通道阻斷劑，孵育時間與加樣方式同“1.2.7.2”，并記錄氣管最大舒張值。

1.2.7.5 L-NAME對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

首先向浴皿中加入10-4 mol/L L-NAME一氧化氮合酶抑制劑，孵育時間與加樣方式同“1.2.7.2”，并記錄氣管最大舒張值。

1.2.7.6 硝苯地平對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

首先向浴皿中加入10-5 mol/L硝苯地平鈣通道阻滯劑，孵育時間與加樣方式同“1.2.7.2”，并記錄氣管最大舒張值。

1.2.7.7 普萘洛爾對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

首先向浴皿中加入10-5 mol/L普萘洛爾β2腎上腺素受體阻滯劑，孵育時間與加樣方式同“1.2.7.2”，并記錄氣管最大舒張值。

1.3 統(tǒng)計學處理

各項試驗結果數(shù)據(jù)均以“±S”表示，采用Excel 2019軟件進行統(tǒng)計分析，兩樣本進行t檢驗。

2 結果與分析

2.1 HPLC色譜分析

“1.2.1.3”HPLC條件下得到金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素的混合標準品與提取樣品分析圖譜如圖2所示，金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素保留時間分別為18.05、26.48、36.06 min，標準品溶液與樣品溶液目標峰的保留時間相吻合，靈敏度高，峰形符合標準。

2.2 方法學考察

2.2.1 線性關系考察。

根據(jù)“1.2.2.1”中線性關系考察方法，計算得出3種主要成分的回歸方程及決定系數(shù)，見表3。

2.2.2 精密度試驗。

根據(jù)“1.2.2.2”中精密度試驗考察方法，求得各標準品峰面積的RSD。結果顯示，金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素峰面積的RSD分別為1.23%、1.57%、0.96%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗。

根據(jù)“1.2.2.3”中穩(wěn)定性試驗考察方法，求得樣品中3種主要成分峰面積的RSD。結果顯示，金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素峰面積的RSD分別為1.15%、1.33%、1.27%，表明供試品溶液中金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素在48 h內(nèi)表現(xiàn)穩(wěn)定。

2.2.4 重復性試驗。

根據(jù)“1.2.2.4”中重復性試驗考察方法，求得3種主要成分峰面積的RSD。結果顯示，金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素峰面積的RSD分別為1.95%、1.13%、1.61%，表明該方法重復性良好。

2.2.5 加樣回收率試驗。

根據(jù)“1.2.2.5”中回收率試驗考察方法，求得各興安杜鵑樣品中3種主要成分的平均回收率和RSD，結果見表4。

2.2.6 含量測定。

根據(jù)“1.2.1.3”中HPLC條件對3種主要成分含量進行測定，測得金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素含量分別為1.58、1.81、1.77 mg/g（圖3）。

2.3 興安杜鵑對TSM的舒張作用

2.3.1 興安杜鵑提取物及其3種主要成分對KCl預收縮的氣管環(huán)張力的影響。

大鼠氣管環(huán)用收縮劑60 mmol/L的KCl預收縮7 min后，不同濃度的樣品溶液、陽性對照液和空白對照液分別對預收縮的氣管環(huán)進行舒張，舒張結果見表5。由表5可知，對于以KCl預收縮后的氣管環(huán)，興安杜鵑提取物包括其3種主要成分均有不同程度的舒張作用，并呈濃度依賴性關系，處理⑥、處理⑦和處理⑧各受試樣品舒張率不低于93.4%，舒張作用與茶堿相當。

2.3.2 撲爾敏對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

大鼠氣管環(huán)經(jīng)撲爾敏預孵育和KCl預收縮后，不同濃度的樣品溶液和空白對照液分別對預收縮的氣管環(huán)進行舒張，舒張結果見表6。由表6可知，在預孵育的組織中，興安杜鵑提取物包括其3種主要成分均有不同程度的舒張作用，并呈濃度依賴性關系，當樣品溶液終濃度在0.10 mg/mL以上（處理⑥～⑧）時，槲皮素組和杜鵑素組與未孵育組無顯著差異（P>0.05）；提取物組和金絲桃苷組與未孵育組均有顯著差異（P<0.001）且舒張作用明顯減弱，這說明興安杜鵑舒張TSM可能受組胺H1受體影響，且發(fā)揮作用的活性成分可能是金絲桃苷。

2.3.3 Indo對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

大鼠氣管環(huán)經(jīng)Indo預孵育和KCl預收縮后，不同濃度的樣品溶液和空白對照液分別對預收縮的氣管環(huán)進行舒張，舒張結果見表7。由表7可知，在預孵育的組織中，興安杜鵑提取物包括其3種主要成分均有不同程度的舒張作用，并呈濃度依賴性關系，與未孵育組相比，處理⑦和處理⑧各樣品對TSM的舒張作用無顯著差異（P>0.05）。這說明興安杜鵑舒張TSM可能不受環(huán)氧合酶（COX）抑制劑影響。

2.3.4 Gli對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

大鼠氣管環(huán)經(jīng)Gli預孵育和KCl預收縮后，不同濃度的樣品溶液和空白對照液分別對預收縮的氣管環(huán)進行舒張，舒張結果見表8。由表8可知，在預孵育的組織中，興安杜鵑提取物包括其3種主要成分均有不同程度的舒張作用，并呈濃度依賴性關系，與未孵育組相比，處理處理⑦和處理⑧各樣品（除杜鵑素組處理⑦外）對TSM的舒張作用無顯著差異（P>0.05）。這說明興安杜鵑舒張TSM可能不受鉀離子通道影響。

2.3.5 L-NAME對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

大鼠氣管環(huán)經(jīng)L-NAME預孵育和KCl預收縮后，不同濃度的樣品溶液和空白對照液分別對預收縮的氣管環(huán)進行舒張，舒張結果見表9。由表9可知，在預孵育的組織中，興安杜鵑提取物包括其3種主要成分均有不同程度的舒張作用，并呈濃度依賴性關系。與未孵育組相比，各濃度提取物及金絲桃苷對TSM的舒張作用有顯著差異（P<0.05）；當樣品溶液終濃度在0.08 mg/mL以上時（處理⑤～⑧），槲皮素組（除處理⑥外）和杜鵑素組無顯著差異（P>0.05）。這說明興安杜鵑舒張TSM可能與一氧化氮合酶途徑有關，且發(fā)揮作用的活性成分可能是金絲桃苷。

2.3.6 硝苯地平對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

大鼠氣管環(huán)經(jīng)硝苯地平預孵育和KCl預收縮后，不同濃度的樣品溶液和空白對照液分別對預收縮的氣管環(huán)進行舒張，舒張結果見表10。由表10可知，在預孵育的組織中，興安杜鵑提取物包括其3種主要成分均有不同程度的舒張作用，并呈濃度依賴性關系。各濃度提取物及金絲桃苷對TSM的舒張作用顯著低于未孵育組（P<0.001）；在樣品溶液終濃度0.12 mg/mL以上（處理⑦、⑧）時，槲皮素組和杜鵑素組與未孵育組無顯著差異（P>0.05）。這說明興安杜鵑對TSM的舒張可能與鈣離子內(nèi)流有關，且發(fā)揮作用的活性成分可能是金絲桃苷。

2.3.7 普萘洛爾對興安杜鵑舒張氣管平滑肌的影響。

大鼠氣管環(huán)經(jīng)普萘洛爾預孵育和KCl預收縮后，不同濃度的樣品溶液和空白對照液分別對預收縮的氣管環(huán)進行舒張，舒張結果見表11。由表11可知，在預孵育的組織中，興安杜鵑提取物包括其3種主要成分均有不同程度的舒張作用，并呈濃度依賴性關系。與未孵育組相比，在處理⑥中提取物及金絲桃苷的舒張作用顯著高于未孵育組，處理⑦、處理⑧中提取物及3種主要成分與未孵育組沒有顯著差異（P>0.05），這說明興安杜鵑舒張TSM可能不受β2受體影響。

3 結論與討論

該研究設立了同時測定興安杜鵑中金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素3種主要成分的雙波長-梯度洗脫高效液相色譜方法。所設立的含量測定方法靈敏度高、專屬性好，準確度和精密度均符合規(guī)范，測得金絲桃苷、槲皮素、杜鵑素含量分別為1.58、1.81、1.77 mg/g。

TSM與其細胞上的多種受體和離子通道以及復雜的受體機制有關［13］。有研究報道，組胺H1受體拮抗劑對組胺引起的血管擴張、平滑肌收縮、血壓下降等表現(xiàn)出強烈的抑制作用［14］。興安杜鵑各樣品在撲爾敏孵育的大鼠氣管環(huán)上有明顯的濃度依賴性舒張作用，各濃度的興安杜鵑提取物及金絲桃苷的舒張作用明顯低于未孵育的組織，這表明興安杜鵑可能對組胺H1受體產(chǎn)生抑制作用，推測興安杜鵑發(fā)揮氣管舒張作用的活性成分可能是金絲桃苷。環(huán)氧合酶（COX）抑制劑可以抑制氣管內(nèi)皮細胞釋放前列環(huán)素（PGI2）引起平滑肌收縮［15］。興安杜鵑各樣品在Indo孵育的大鼠氣管環(huán)上有明顯的濃度依賴性舒張作用，當樣品溶液終濃度在第6個濃度以上（處理⑦、⑧）時，各樣品溶液的舒張作用與未孵育組無顯著差異，表明興安杜鵑可能不會通過COX通道誘導TSM舒張。鉀離子通道阻斷劑通過抑制細胞的ATP敏感鉀通道使細胞膜去極化，觸發(fā)肌細胞的收縮［16］。興安杜鵑各樣品在Gli孵育的大鼠氣管環(huán)上有明顯的濃度依賴性舒張作用，當樣品溶液終濃度在第6個濃度以上（處理⑦、⑧）時，各樣品溶液（除杜鵑素組處理⑦外）的舒張作用與未孵育組無顯著差異，表明興安杜鵑可能不會通過鉀離子通道誘導TSM舒張。

一氧化氮合酶可通過cGMP升高，促使平滑肌舒張［17］。興安杜鵑各樣品在L-NAME孵育的大鼠氣管環(huán)上有明顯的濃度依賴性舒張作用，各濃度的興安杜鵑提取物及金絲桃苷的舒張作用明顯低于未孵育組，表明興安杜鵑可能對NO的形成有增強作用，推測興安杜鵑發(fā)揮氣管舒張作用的活性成分可能是金絲桃苷。鈣離子通道阻滯劑可通過降低鈣離子（Ca2+）內(nèi)流，使細胞內(nèi)的Ca2+減少，從而引起平滑肌收縮［18-19］。興安杜鵑各樣品在硝苯地平孵育的大鼠氣管環(huán)上有明顯的濃度依賴性舒張作用，各濃度的興安杜鵑提取物及金絲桃苷的舒張作用均顯著低于未孵育組，表明興安杜鵑對鈣離子通道可能存在抑制作用，推測興安杜鵑發(fā)揮氣管舒張作用的活性成分可能是金絲桃苷。β2受體拮抗劑可引起血漿腎素活性降低、血管收縮、支氣管痙攣［20］。興安杜鵑各樣品在普萘洛爾孵育的大鼠氣管環(huán)上有明顯的濃度依賴性舒張作用，當樣品溶液終濃度在第6個濃度以上（處理⑦、⑧）時，各樣品溶液的舒張作用與未孵育組無顯著差異，表明興安杜鵑可能不會通過β2受體誘導TSM舒張。

該研究結果表明，興安杜鵑對由KCl收縮的未孵育的TSM具有明顯的濃度依賴性的舒張作用。其中，在撲爾敏、L-NAME、硝苯地平預孵育組中，金絲桃苷對TSM的舒張作用顯著低于未孵育組，推測興安杜鵑發(fā)揮氣管舒張作用的活性成分可能是金絲桃苷。并且這種強烈的舒張作用可能是通過抑制組胺H1受體、一氧化氮合酶途徑和鈣離子通道介導的鈣離子內(nèi)流來實現(xiàn)的。該研究可能存在以下局限性，興安杜鵑對TSM舒張作用可能在磷酸二酯酶、毒蕈堿受體、糖皮質(zhì)激素受體激活和可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的刺激等方面起作用［21］，以上途徑將是下一步的研究內(nèi)容。

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