ε-聚賴氨酸對西番蓮果實(shí)采后病害與抗病物質(zhì)代謝的影響

林育釗，陳蕾伊，陳佳怡，蔣璇靚，鄭金水，陳洪彬,3,*

（1.泉州師范學(xué)院海洋與食品學(xué)院，福建 泉州 362000；2.泉州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，福建 泉州 362212；3.近海資源生物技術(shù)福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（泉州師范學(xué)院），福建 泉州 362000）

西番蓮（Passiflora caeruleaL.），亦稱雞蛋果或者百香果，在我國廣西、福建、廣東、臺灣等地區(qū)廣泛栽培[1-2]。西番蓮果實(shí)含有豐富的礦物質(zhì)、酚類、有機(jī)酸、維生素等營養(yǎng)成分[2-3]，因而具有較高的食用價(jià)值。此外，香氣也是影響西番蓮果實(shí)品質(zhì)的重要特性，丁酸乙酯、己酸乙酯、丁酸己酯、醋酸乙酯、α-松油醇、己醛、β-月桂烯等是果實(shí)中重要的香味成分，使得果實(shí)具有濃郁的香氣[4-5]。然而，西番蓮果實(shí)大多成熟和采收于高溫高濕季節(jié)，采后極易發(fā)生果實(shí)感病、腐爛等品質(zhì)敗壞現(xiàn)象，不利于采后貯藏及品質(zhì)保持[2]。病原菌的侵染是誘導(dǎo)西番蓮果實(shí)采后感病、腐爛發(fā)生的關(guān)鍵因素，嚴(yán)重限制果實(shí)采后貯藏、遠(yuǎn)距離貯運(yùn)與銷售，也是西番蓮果實(shí)產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展需要迫切解決的關(guān)鍵問題[6]。目前，使用化學(xué)殺菌劑（例如丙氯靈、二氯異氰尿酸鈉等）雖然能夠控制西番蓮果實(shí)采后病害發(fā)生，但是由此帶來的藥物殘留、人體健康損傷及環(huán)境污染等問題突出，因而化學(xué)殺菌劑不適于西番蓮果實(shí)采后病害控制[7]。因此，很有必要尋找一種安全、有效的采后處理技術(shù)，以控制西番蓮果實(shí)采后病害、腐爛發(fā)生，進(jìn)而提高西番蓮果實(shí)采后貯藏品質(zhì)。

ε-聚賴氨酸（ε-poly-L-lysine，ε-PL）是從白色鏈霉菌（Streptomyces albulus）NO.346中分離而得[8-9]。它是一種安全、有效的抑菌多肽[10-11]，由25～35 個L-賴氨酸殘基通過ε-氨基和α-羧基之間形成的酰胺鍵所形成[11-12]。ε-PL因其具備強(qiáng)抗菌能力、安全性、生物降解性等特性，可在食品中應(yīng)用[11,13]。有研究報(bào)道，ε-PL可控制龍眼[9-10]、草莓[14]等果實(shí)采后病害發(fā)生，進(jìn)而穩(wěn)定果實(shí)品質(zhì)。此外，ε-PL控制采后果實(shí)病害的發(fā)生，可能是由于ε-PL能提高果實(shí)采后抗病相關(guān)酶的活性或者提升木質(zhì)素等抗病物質(zhì)的含量，進(jìn)而誘導(dǎo)果實(shí)采后抗病性[10,15-16]。

另外，筆者在前期研究中發(fā)現(xiàn)，可可毛色二孢（Lasiodiplodia theobromae）是致使福建黃金西番蓮果實(shí)采后腐爛的主要病原菌之一，嚴(yán)重降低了果實(shí)采后品質(zhì)。然而，目前鮮見ε-PL提高黃金西番蓮果實(shí)抗病物質(zhì)代謝水平而增強(qiáng)采后抗病性，進(jìn)而抑制果實(shí)采后發(fā)生病害的研究報(bào)道。因此，本研究以福建省近年來快速發(fā)展的黃金西番蓮果實(shí)為研究對象，研究ε-PL抑制L.theobromae接種黃金西番蓮果實(shí)采后病害發(fā)生及其與果皮細(xì)胞膜透性、果實(shí)抗病性及抗病物質(zhì)代謝的關(guān)系，旨在闡明ε-PL抑制L.theobromae侵染所致黃金西番蓮果實(shí)采后病害發(fā)生的作用機(jī)制，為ε-PL維持黃金西番蓮果實(shí)采后品質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、菌株與試劑

以福建省主栽黃金西番蓮品種‘福建百香果3號’（Passiflora caeruleaL.cv.Fujian Baixiangguo NO.3）果實(shí)為研究對象，果實(shí)（8 成熟）采摘于福建南安溪美鎮(zhèn)緣味家庭農(nóng)場，挑選色澤一致、大小均一、無感病、無損傷、健康的果實(shí)，將經(jīng)過清水清洗、次氯酸鈉浸泡10 s（表面消毒）、無菌水（sterile distilled water，SDW）清洗等步驟后的果實(shí)用于后續(xù)研究。

L.theobromae由本課題組自主分離、鑒定及保存。另外，參考Zhang Shen等[17]的方法制備L.theobromae孢子懸浮液，將L.theobromae接種至燕麥米糠瓊脂培養(yǎng)基，在光照下連續(xù)培養(yǎng)21 d，用SDW洗脫成熟孢子，制成1×105/mL的懸浮液。

ε-PL 鄭州拜納佛生物工程股份有限公司；氯化鋇、苯丙氨酸、葡萄糖-6-磷酸二鈉、磷酸氫二鈉、鄰苯二酚、磷酸二氫鈉、氯化鎂、抗壞血酸、亮抑酶酞、丙三醇、三氯乙酸、反式肉桂酸、三磷酸腺苷、昆布多糖、檸檬酸、輔酶A、p-香豆酸、愈創(chuàng)木酚、四硼酸鉀、3,5-二硝基水楊酸等（化學(xué)純）國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CP224C型分析天平 奧豪斯儀器上海有限公司；Infinite M 200 Pro型酶標(biāo)儀 瑞士帝肯公司；SQ510C型高壓滅菌器 重慶雅馬拓科技有限公司；S230型電導(dǎo)率儀 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；H2050R型離心機(jī) 湖南湘儀儀器有限公司；PRX-450A型智能人工氣候箱 浙江寧波賽福實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 果實(shí)采后處理與損傷接種

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，采用0（對照）、50、100、150 mg/L和200 mg/Lε-PL浸泡西番蓮果實(shí)10 min（浸泡時間參照Sun Junzheng等[10]的方法），晾干，采用無菌打孔器在果實(shí)赤道面打孔1 個（直徑5 mm，深度3 mm，下同），并在孔中接種20 μLL.theobromae孢子懸浮液，晾干之后裝盤（10 個/盤），再用聚乙烯薄膜袋包裝，置于（28±1）℃、90%相對濕度（relative humidity，RH）的恒溫箱中貯藏7 d。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，100 mg/Lε-PL處理再接種L.theobromae的西番蓮果實(shí)具有較低的病斑直徑，果實(shí)感病癥狀不明顯。因此，選用100 mg/Lε-PL進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

在獲得ε-PL最佳濃度的基礎(chǔ)上，將挑出來的西番蓮果實(shí)分成2 組，進(jìn)行以下處理（每組均設(shè)3 個重復(fù)）：1）接種L.theobromae組：SDW浸泡果實(shí)10 min后，晾干，打孔，接種20 μL濃度為1×105/mL的L.theobromae孢子懸浮液；2）ε-PL+接種L.theobromae組：ε-PL浸泡果實(shí)10 min后，晾干，打孔，接種20 μL濃度為1×105/mL的L.theobromae孢子懸浮液。

西番蓮果實(shí)經(jīng)上述處理之后，晾干，裝盤（10 個/盤），包裝聚乙烯薄膜袋，貯藏在（28±1）℃、90% RH的恒溫箱中。在貯藏期，隨機(jī)取樣觀察果實(shí)外觀變化，測定果實(shí)病斑直徑，并從果實(shí)發(fā)病部位外10～30 mm內(nèi)取樣，測定相關(guān)指標(biāo)。

1.3.2 果皮細(xì)胞膜透性的測定

參考Gong Di等[18]的方法測定西番蓮果實(shí)的果皮細(xì)胞膜透性，結(jié)果用%表示。

1.3.3 果實(shí)病斑直徑的測定

參考Gong Di等[18]的方法使用十字交叉法測定西番蓮果實(shí)的病斑直徑。

1.3.4 果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定

參照郭欣[7]與Sun Junzheng[10]等的方法測定西番蓮果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果以%表示。

1.3.5 果皮抗病相關(guān)酶活力的測定

參考Sun Junzheng等[10]的方法進(jìn)行測定西番蓮果皮苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase，PAL）活力；果皮4-香豆酰輔酶A連接酶（4-coumarate CoA ligase，4-CL）、肉桂酸-4-羥化酶（cinnamate-4-hydroxylase，C4H）、肉桂醇脫氫酶（cinnamyl alcohol dehydrogenase，CAD）活力的測定均參照郭欣[7]、Sun Junzheng[10]與Tang Jinyan[19]等的方法；果皮多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）和過氧化物酶（peroxidase，POD）活力參考郭欣等[7]的方法進(jìn)行測定；果皮幾丁質(zhì)酶（chitinase，CHI）、β-1,3-葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，GLU）活力參照Tang Jinyan等[19]的方法進(jìn)行測定。另外，參照Bradford[20]的方法測定蛋白質(zhì)含量，上述酶活力均以蛋白質(zhì)含量進(jìn)行計(jì)算。

1.4 數(shù)據(jù)處理

在本實(shí)驗(yàn)中，除測定病斑直徑進(jìn)行10 次重復(fù)之外，其他指標(biāo)均設(shè)置3 次重復(fù)。利用Microsoft Excel 2019軟件進(jìn)行繪圖；利用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 果實(shí)外觀變化和病斑直徑

由圖1A可知，在貯藏0 d時，西番蓮果實(shí)果皮呈現(xiàn)明亮的黃綠色，果實(shí)外形完整。然而，隨著貯藏時間的延長，果實(shí)果皮色澤由黃綠色變成黃色，之后再變成褐色。對于接種L.theobromae組，從貯藏2 d開始，果實(shí)接種處快速長出菌絲，并由白色轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏麑?shí)感病加重；同時接種處伴有嚴(yán)重的黃褐色腐爛癥狀，并向周邊擴(kuò)散，果實(shí)腐敗程度加劇。然而，與接種L.theobromae組比較，ε-PL+接種L.theobromae組的果實(shí)接種處菌絲生長較緩，果實(shí)感病癥狀較輕；同時接種處黃褐色腐爛癥狀較輕，腐爛癥狀向周邊擴(kuò)散速度較慢，果實(shí)腐敗較不嚴(yán)重。

圖1 ε-PL對接種L.theobromae西番蓮果實(shí)外觀（A）和病斑直徑（B）的影響Fig.1 Effect of ε-PL on appearance (A) and lesion diameter (B) of L.theobromae-inoculated passion fruits

果實(shí)病斑直徑是一個評價(jià)果實(shí)采后病害發(fā)生的重要指標(biāo)。由圖1B可知，兩個處理組的西番蓮果實(shí)病斑直徑在貯藏0～1 d均為0，但是從貯藏1 d開始，表現(xiàn)出不同的變化趨勢。相比于接種L.theobromae組，ε-PL+接種L.theobromae組病斑直徑增大速度較為緩慢?；陲@著性分析，ε-PL+接種L.theobromae組的病斑直徑在貯藏4 d顯著低于接種組（P＜0.05），在貯藏5～7 d極顯著低于接種組（P＜0.01）。

因此，ε-PL能延緩接種L.theobromae西番蓮果實(shí)采后病害的發(fā)生。

2.2 果皮細(xì)胞膜透性

完整的細(xì)胞膜對植物細(xì)胞正常生命活動具有重要作用[18]，細(xì)胞膜的損傷將影響采后抗病性，一般用細(xì)胞膜透性表示細(xì)胞膜的損傷程度[21]。由圖2可知，西番蓮果實(shí)的果皮細(xì)胞膜透性于貯藏0～7 d快速升高。相比之下，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮細(xì)胞膜透性在貯藏0～7 d低于接種L.theobromae組，并在貯藏2 d達(dá)到顯著水平（P＜0.05），在貯藏4～7 d達(dá)到極顯著水平（P＜0.01）。因此，ε-PL能延緩接種L.theobromae西番蓮果實(shí)采后果皮細(xì)胞膜透性的上升。

圖2 ε-PL對接種L.theobromae西番蓮果實(shí)果皮細(xì)胞膜透性的影響Fig.2 Effect of ε-PL on cell membrane permeability in pericarp of L.theobromae-inoculated passion fruits

2.3 果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)

木質(zhì)素作為植物抗病系統(tǒng)中的重要組成，能抵抗病原菌入侵[7,10]。由圖3可知，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)在貯藏0～5 d快速升高，隨后快速下降。然而，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)在貯藏0～4 d快速升高，隨后快速降低。進(jìn)一步比較可知，與接種L.theobromae果實(shí)的果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)對比，ε-PL+接種L.theobromae組具有較高水平，并在貯藏3、5～7 d具有顯著水平（P＜0.05），在貯藏4 d具有極顯著水平（P＜0.01）。

圖3 ε-PL對接種L.theobromae西番蓮果實(shí)果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.3 Effect of ε-PL on lignin content in pericarp of L.theobromaeinoculated passion fruits

因此，ε-PL可提升接種L.theobromae西番蓮果實(shí)果皮木質(zhì)素水平。

2.4 果皮PAL、C4H、4-CL、CAD和POD活性

PAL、C4H、4-CL、CAD與POD是苯丙烷代謝途徑中的重要酶，參與合成木質(zhì)素[7,10,22]。由圖4A可知，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮PAL活性在貯藏0～1 d較快降低，1～2 d較快升高，2～3 d較快降低，3～6 d加劇提高，之后快速減少。然而，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮PAL活性于貯藏0～1 d快速上升，1～2 d快速減小，2～6 d急劇提高，6～7 d快速下降。與接種L.theobromae果實(shí)對比可知，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮PAL活性在貯藏0～7 d具有較高水平，同時在貯藏3、7 d具有極顯著較高水平（P＜0.01），在貯藏4 d表現(xiàn)為顯著較高水平（P＜0.05）。

圖4 ε-PL對接種L.theobromae西番蓮果實(shí)果皮PAL（A）、C4H（B）、4-CL（C）、CAD（D）和POD（E）活性的影響Fig.4 Effect of ε-PL on activities of PAL (A),C4H (B),4-CL (C),CAD (D)and POD (E) in pericarp of L.theobromae-inoculated passion fruits

由圖4B可知，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮C4H活性在貯藏0～4 d加速上升，4～5 d較快降低，隨后快速提高。然而，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮C4H活性在貯藏0～5 d變化趨勢與接種L.theobromae組類似，但在貯藏5～7 d卻較快升高。另外，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮C4H活性在貯藏0～7 d高于接種L.theobromae組，且于貯藏3～5 d顯著高于接種L.theobromae組（P＜0.05）。

由圖4C可知，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮4-CL活性于貯藏0～4 d快速提高，4～6 d快速下降，隨后加速升高。但是，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮4-CL活性在貯藏0～3 d加劇提升，3～5 d快速減小，5～6 d快速升高，6～7 d較快減少。另外，與接種L.theobromae組相比，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮4-CL活性始終處于較高水平，且于貯藏2～3、5、7 d達(dá)到顯著水平（P＜0.05），在貯藏6 d具有極顯著水平（P＜0.01）。

由圖4D可知，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮CAD活性于貯藏0～2 d加劇上升，2～3 d加速降低，3～4 d快速提高，隨后較快下降。然而，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮CAD活性于貯藏0～4 d急劇上升，隨后快速減少。此外，和接種L.theobromae果實(shí)對比，ε-PL+接種L.theobromae組在貯藏期維持較高果皮CAD活性，并在貯藏3～7 d具有顯著較高水平（P＜0.05）。

由圖4E可得，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮POD活性在貯藏0～1 d加速升高，1～4 d較快降低，4～5 d快速提高，5～6 d快速下降，6～7 d緩慢上升。但是，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮POD活性于貯藏0～4 d加劇提高，4～5 d緩慢下降，之后加速降低。另外，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮POD活性在貯藏2～7 d高于接種組，并在貯藏3 d有極顯著水平（P＜0.01），在貯藏4～5、7 d有顯著水平（P＜0.05）。

因此，ε-PL保持L.theobromae接種西番蓮果實(shí)較高的果皮PAL、C4H、4-CL、CAD及POD活性。

2.5 果皮PPO活性

PPO可氧化酚類物質(zhì)，從而產(chǎn)生對病原菌有毒的醌類物質(zhì)[7,22-23]。由圖5可知，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮PPO活性在貯藏0～4 d加劇提高，4～5 d快速下降，5～6 d緩慢上升，6～7 d加速減少。然而，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮PPO活性于貯藏0～3 d急劇上升，3～4 d快速降低，4～5 d快速提高，之后加速減少。此外，和接種組對比，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮PPO活性均保持較高水平，同時在貯藏1 d具有顯著水平（P＜0.05），在貯藏3、5 d具有極顯著水平（P＜0.01）。

圖5 ε-PL對接種L.theobromae西番蓮果實(shí)果皮PPO活性的影響Fig.5 Effect of ε-PL on PPO activity in pericarp of L.theobromaeinoculated passion fruits

因此，ε-PL能維持接種L.theobromae西番蓮果實(shí)較高水平的果皮PPO活性。

2.6 果皮GLU和CHI活性

GLU與CHI也是防御病原菌入侵果實(shí)的關(guān)鍵酶[24]。從圖6A發(fā)現(xiàn)，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮GLU活性于貯藏0～1 d快速降低，1～2 d快速上升，2～3 d快速減小，隨后加速升高。但是，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮GLU活性在貯藏0～1 d緩慢上升，1～2 d緩慢降低，2～5 d加劇上升，5～6 d快速減少，6～7 d快速提高。另外，和接種組比較，ε-PL+接種L.theobromae組于貯藏0～1、3～7 d保持較高果皮GLU活性，同時在貯藏3～7 d具有極顯著水平（P＜0.01）。

圖6 ε-PL對接種L.theobromae西番蓮果實(shí)果皮GLU（A）和CHI（B）活性的影響Fig.6 Effect of ε-PL on activities of GLU (A) and CHI (B) in pericarp of L.theobromae-inoculated passion fruits

從圖6B發(fā)現(xiàn)，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮CHI活性于貯藏0～1 d較快下降，1～5 d較快上升，5～6 d快速減小，6～7 d快速提高。但是，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮CHI活性于貯藏0～1 d快速升高，1～3 d緩慢上升，3～5 d加速提升，5～6 d較快減少，隨后急劇增高。另外，與接種組比較，ε-PL+接種L.theobromae組的果皮CHI活性在貯藏期維持較高水平，并在貯藏4～5 d達(dá)極顯著水平（P＜0.01），在貯藏6～7 d達(dá)顯著水平（P＜0.05）。

因此，ε-PL能保持接種L.theobromae西番蓮果實(shí)較高的果皮GLU和CHI活性。

3 討論

細(xì)胞膜損傷與病原菌入侵密切相關(guān)。較高的細(xì)胞膜透性是果實(shí)采后細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)喪失、抗病性下降、病害發(fā)生的促進(jìn)因素[21,25-26]。在本研究中，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮細(xì)胞膜透性（圖2）和果實(shí)病斑直徑（圖1B）在貯藏期均呈現(xiàn)上升趨勢?；谙嚓P(guān)性分析可知，接種果實(shí)的病斑直徑（圖1B）與果皮細(xì)胞膜透性（圖2）具有極顯著的正相關(guān)關(guān)系（P＜0.01），相關(guān)系數(shù)為0.917。由此可推斷，L.theobromae侵染加速西番蓮果實(shí)病害發(fā)生與細(xì)胞膜損傷有關(guān)。然而，與接種L.theobromae組相比，ε-PL+接種L.theobromae組在貯藏期具有較低果實(shí)病斑直徑（圖1B）、果皮細(xì)胞膜透性（圖2）。因此，ε-PL能減輕接種L.theobromae果實(shí)果皮細(xì)胞膜損傷程度，穩(wěn)定果實(shí)抗病性，從而減緩果實(shí)發(fā)生病害。這與Chen Yihui等[21]的研究結(jié)果一致，即水楊酸減緩龍眼果實(shí)發(fā)生病害，是由于水楊酸維持較好的果皮細(xì)胞膜完整性。

另外，木質(zhì)素是果實(shí)抗病防御系統(tǒng)中的重要成分，當(dāng)果實(shí)受到病原菌侵染時，迅速積累木質(zhì)素，形成物理屏障，抑制病原菌進(jìn)一步入侵[7,10,23]。本研究發(fā)現(xiàn)，接種L.theobromae組的西番蓮果實(shí)果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)在貯藏0～5 d不斷累積上升，之后卻呈現(xiàn)下降趨勢（圖3），而病斑直徑在貯藏1～7 d不斷升高（圖1B）。這可能是因?yàn)樵谫A藏前期，L.theobromae入侵西番蓮果實(shí)后，西番蓮果實(shí)的抗病防御機(jī)制被激活，將不斷累積木質(zhì)素等抗病物質(zhì)，進(jìn)而提高果實(shí)抗病水平而應(yīng)對病原菌早期入侵；但在L.theobromae侵染后期，由于果實(shí)的抗病物質(zhì)（木質(zhì)素等）水平下降，誘導(dǎo)果實(shí)抗病性喪失，進(jìn)而引發(fā)果實(shí)發(fā)生病害。因此，L.theobromae侵染加速西番蓮果實(shí)采后抗病性喪失、病害發(fā)生與其果實(shí)果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)下降有關(guān)。進(jìn)一步對比發(fā)現(xiàn)，在貯藏期，ε-PL+接種L.theobromae組具有較高的果皮木質(zhì)素質(zhì)量分?jǐn)?shù)（圖3），而具有較小的果實(shí)病斑直徑（圖1B）。因此，ε-PL抑制L.theobromae侵染所致西番蓮果實(shí)采后病害發(fā)生，是由于ε-PL促進(jìn)果實(shí)果皮累積木質(zhì)素，進(jìn)而增強(qiáng)果實(shí)采后抗病性。這與黃曉杰等[27]的研究結(jié)果一致，即茉莉酸甲酯延緩藍(lán)莓果實(shí)發(fā)生病害與果實(shí)保持較高木質(zhì)素水平有關(guān)。類似地，Ren Yanfang等[24]研究報(bào)道，硝普酸鈉能提高芒果果實(shí)木質(zhì)素含量，進(jìn)而延緩果實(shí)采后炭疽病的發(fā)生。

此外，PAL、C4H、4-CL、CAD、POD、PPO、GLU與CHI等抗病酶在果實(shí)應(yīng)對病原菌入侵反應(yīng)中起著重要作用[7,10,22,24]。其中，PAL、C4H、4-CL、CAD、POD等抗病酶可參與木質(zhì)素的合成及累積，在抵御病原菌侵染中具有關(guān)鍵作用[7,10,22-23]。PPO可催化酚類發(fā)生氧化而形成醌，進(jìn)而抑制病原菌的生長[7,10]。GLU與CHI分別能降解病原菌細(xì)胞壁的β-1,3-葡聚糖與幾丁質(zhì)，從而抑制病原菌的生長[7,28-29]。本研究發(fā)現(xiàn)，相比于接種L.theobromae的西番蓮果實(shí)，ε-PL維持接種L.theobromae西番蓮果實(shí)在貯藏0～7 d具有較高的果皮PAL、C4H、4-CL、CAD活性，在貯藏2～7 d具有較高的果皮POD活性（圖4），這促進(jìn)了果實(shí)累積木質(zhì)素；ε-PL也保持接種果實(shí)在貯藏0～7 d有較高的果皮PPO活性（圖5），這有利于PPO催化酚類而生成醌，進(jìn)而抑制L.theobromae對果實(shí)的侵染；ε-PL還維持接種果實(shí)在貯藏1、3～7 d有較高的果皮GLU活性，在貯藏0～7 d有較高的果皮CHI活性（圖6），這有助于破壞L.theobromae細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)而抑制其生長。因此，ε-PL抑制L.theobromae侵染所致的西番蓮果實(shí)采后病害發(fā)生，是由于ε-PL提高接種L.theobromae西番蓮果實(shí)的果皮PAL、C4H、4-CL、CAD、POD、PPO、GLU及CHI等抗病相關(guān)酶的活性，累積果皮木質(zhì)素等抗病物質(zhì)，進(jìn)而提高果實(shí)采后抗病性。類似地，Sun Junzheng等[10]研究表明，ε-PL能提升龍眼果實(shí)的PAL、CAD、C4H、4-CL與POD等抗病酶的活性，促進(jìn)木質(zhì)素的累積，進(jìn)而增強(qiáng)果實(shí)采后抗病能力，延緩龍眼果實(shí)采后病害的發(fā)生。Liu Yongxiang等[28]研究發(fā)現(xiàn)，L-賴氨酸可以提高梨果實(shí)的GLU與CHI活性，進(jìn)而提高果實(shí)抗病性而控制采后病害發(fā)生。另外，劉曉佳等[30]研究報(bào)道，苯并噻二唑可提升柑橘果實(shí)的PAL、POD、PPO、CHI和GLU等抗病酶活性，提升果實(shí)對病原菌入侵的抗性水平。

4 結(jié)論

綜上，100 mg/Lε-PL可有效維持接種L.theobromae西番蓮果實(shí)的果皮細(xì)胞膜完整性，還能提升接種果實(shí)與果皮木質(zhì)素合成有關(guān)的相關(guān)酶（PAL、C4H、4-CL、CAD、POD等）活性而促進(jìn)累積木質(zhì)素，提高接種果實(shí)果皮的PPO、GLU及CHI等酶活性，從而增強(qiáng)果實(shí)采后抗病性，抑制L.theobromae侵染所致的果實(shí)采后病害發(fā)生。因此，ε-PL可作為一種安全的采后處理技術(shù)以增強(qiáng)西番蓮果實(shí)的抗病能力，進(jìn)而抑制果實(shí)采后發(fā)生病害、穩(wěn)定其采后品質(zhì)。