飼糧蛋白質(zhì)水平對(duì)藏羊生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及肉品質(zhì)的影響

■ 陳 渲 吳振嶺 周 力，2 朱凱娜 侯生珍 王志有 桂林生*

（1.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海西寧 810016；2.寧夏大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，寧夏銀川 750021）

藏羊作為青藏高原及毗鄰地區(qū)的特有物種，具有抗寒冷、耐粗飼等特性，不僅是高原地區(qū)十分珍貴的種質(zhì)資源，更是牧民主要經(jīng)濟(jì)來(lái)源[1]。據(jù)報(bào)道，飼糧蛋白質(zhì)水平對(duì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收具有一定的影響，尤其是反芻動(dòng)物瘤胃微生物數(shù)量和內(nèi)環(huán)境等都離不開飼糧蛋白質(zhì)水平的調(diào)節(jié)[2]。此外，蛋白質(zhì)還可以經(jīng)過(guò)脫氨作用轉(zhuǎn)化為脂肪，為動(dòng)物機(jī)體儲(chǔ)存能量[3]。反芻動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育離不開飼糧蛋白質(zhì)，若蛋白質(zhì)水平過(guò)低會(huì)降低藏羊的生長(zhǎng)性能和消化率，然而蛋白質(zhì)水平過(guò)高同樣會(huì)導(dǎo)致一些相關(guān)代謝病的發(fā)生[4-5]。由此可見(jiàn)，適宜的蛋白質(zhì)水平對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要。

飼糧中適宜的蛋白質(zhì)水平不僅能提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，還能改善肉品質(zhì)以及提高養(yǎng)殖效益等[6]。張凱凱等[7]研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)水平在最高時(shí)，羔羊的平均日增重也處于最高值。以羔羊?yàn)檠芯繉?duì)象，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著飼糧蛋白質(zhì)水平升高，其生長(zhǎng)性能會(huì)提高，而飼糧蛋白質(zhì)水平越低則更有利于改善肌肉品質(zhì)[8]。孟凡生等[9]研究進(jìn)一步表明，奶山羊血清指標(biāo)中的總蛋白與白蛋白均隨著飼糧蛋白質(zhì)水平的升高而升高。從上述研究結(jié)論可以看出，飼喂不同蛋白質(zhì)水平飼糧不僅能夠影響飼養(yǎng)成本，同時(shí)還能影響反芻動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、免疫機(jī)能以及肌肉品質(zhì)。然而，截至目前，有關(guān)不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊的生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和肉品質(zhì)影響的相關(guān)報(bào)道較少，這嚴(yán)重制約了我國(guó)藏羊產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展。

因此，試驗(yàn)以高原型藏羊?yàn)檠芯繉?duì)象，探索不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)育肥期藏羊生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和肉品質(zhì)的影響，以期為我高寒牧區(qū)藏羊的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，選擇90 只初始體重相近[（15.40±0.81） kg]且發(fā)育良好的2 月齡高原型藏羊公羔，按照隨機(jī)原則，分為3 個(gè)組，每組30 只，每組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6 只羊。各組分別飼喂蛋白質(zhì)水平為12%（A 組）、14%（B 組）和16%（C 組）的飼糧。整個(gè)試驗(yàn)包括預(yù)試期7 d和正試期90 d。

1.2 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

基礎(chǔ)飼糧參考《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 816—2004）進(jìn)行設(shè)計(jì)[10]，其飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)飼糧的精粗比例按照70∶30 組成，其中的粗料是由燕麥干草和燕麥青貯按照1∶1 干物質(zhì)組成。飼料樣品中DE 含量主要采用烘干法測(cè)定，CP 含量主要采用凱氏定氮法測(cè)定；EE 主要采用索氏浸提法測(cè)定；NDF、ADF 含量采用Van 等[11]的方法測(cè)定；Ca 含量采用高錳酸鉀滴定法測(cè)定；P 含量采用磷鉬酸紫外終點(diǎn)法測(cè)定；其他含量均參照張麗英[12]方法進(jìn)行檢測(cè)，消化能參照以下公式計(jì)算[13]。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

DE（MJ/kg）=0.209×CP%+0.322×EE%+0.084×CF%+0.002×NFE%2+0.046×NFE%-0.627

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)于青海省海北藏族自治州海晏縣金藏牧場(chǎng)中進(jìn)行。藏羊采用全舍飼分欄飼養(yǎng)，試驗(yàn)期間所有羊只均自由采食，自由飲水。飼糧按照設(shè)計(jì)的比例均勻攪拌，每天上午（08：00）和下午（17：00）各飼喂藏羊1 次。按照正常免疫程序進(jìn)行免疫接種，其他飼養(yǎng)管理嚴(yán)格按照羊場(chǎng)的規(guī)定嚴(yán)格執(zhí)行。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從每組中選取5 只試驗(yàn)羊進(jìn)行屠宰，并迅速采集背最長(zhǎng)肌兩份，其中一份剔除肌肉表面筋膜和脂肪，用于肉品質(zhì)的檢測(cè)；另外一份置于4%多聚甲醛磷酸緩沖液（0.1 mol/L，pH 為7.4）固定時(shí)間不少于48 h。

1.4.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定

試驗(yàn)開始與試驗(yàn)結(jié)束上午晨飼前對(duì)所有試驗(yàn)羊進(jìn)行空腹稱重，同時(shí)準(zhǔn)確記錄每天的投料量以及剩料量，并計(jì)算其平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）以及料重比（F/G）。

平均日增重（g）=[終末體重（kg）-初始體重（kg）]/試驗(yàn)天數(shù)（d）

平均日采食量（kg）=總采食量（kg）/[試驗(yàn)天數(shù)（d）×試驗(yàn)羊數(shù)（只）]

料重比=平均日采食量/平均日增重

1.4.2 血清生化指標(biāo)測(cè)定

于正試期的第90 天晨飼前，從每組中隨機(jī)選取5 只健康的試驗(yàn)羊進(jìn)行頸靜脈采血，室溫下傾斜片刻后，放入離心機(jī)中3 500 r/min 離心20 min，并收集上清液于無(wú)酶離心管中，置于-20 ℃保存。然后將血清樣本送至青海省人民醫(yī)院，使用邁瑞血細(xì)胞分析儀（型號(hào)：BC7500-cs）檢測(cè)血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）含量以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性[14]。

1.4.3 肌肉糖酵解分析

從-80 ℃取出肌肉樣本，精確稱取1 g 樣品剪碎后，加入10 倍體積PBS 溶液（0.01 mol/L，pH 7.4）置于勻漿器中進(jìn)行勻漿。樣品充分勻漿后，在4 ℃下4 000 r/min離心10 min，然后收集上清液置于-20 ℃。按試劑盒的要求檢測(cè)糖原（glycogen）含量、琥珀酸脫氫酶（succinate dehydrogenase, SDH）、蘋果酸脫氫酶（malate dehydrogenase, MDH）和乳酸脫氫酶（lactic dehydrogenase, LDH）活性。測(cè)定步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，試劑盒購(gòu)自江蘇酶標(biāo)生物科技有限公司。

1.4.4 肌肉組織學(xué)特性研究

首先將固定好的肉樣修成適宜的組織塊，放入30%葡萄糖溶液中進(jìn)行脫水，置于冷凍切片機(jī)中（-20 ℃）進(jìn)行冷凍，然后進(jìn)行H.E.染色（伊紅-蘇木素法），再使用中性樹膠進(jìn)行封片。使用光學(xué)顯微鏡觀察肌肉樣本的切片，每個(gè)切片隨機(jī)選取3 個(gè)不同的區(qū)域進(jìn)行拍照，使觀察的肌纖維數(shù)量高于500 根。使用Image-Pro Plus 6.0分析軟件測(cè)量肌纖維直徑、橫截面積和密度，并記錄數(shù)據(jù)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2020 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理，然后利用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（oneway ANOVA），再用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較分析，試驗(yàn)結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05 作為差異顯著的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊生長(zhǎng)性能的影響

由表2 可知，各組試驗(yàn)羊的初始體重均差異不顯著（P>0.05），表明具有良好的同質(zhì)性。隨著飼糧蛋白質(zhì)水平的提高，藏羊的終末體重、平均日增重、平均日采食量呈上升的趨勢(shì)，但未達(dá)到顯著水平（P>0.05），而料重比成下降趨勢(shì)（P>0.05）。

表2 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊生長(zhǎng)性能的影響

2.2 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊血清生化指標(biāo)的影響

由表3 可知，C 組血清的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于A 組（P<0.05），C 組和B 組間差異不顯著（P>0.05）。A 組和C 組血清的葡萄糖含量顯著高于B 組（P<0.05），A 組與C 組間差異不顯著（P>0.05）。B 組血清的總蛋白含量顯著高于A 組（P<0.05），A 組與C 組間差異不顯著（P>0.05）。各組間血清的三酰甘油、總膽固醇、白蛋白、尿素氮含量及谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均差異不顯著（P>0.05）。

表3 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊血清生化指標(biāo)的影響

2.3 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊肌肉糖酵解和酶活性的影響

由表4 可知，C 組肌肉的糖原含量顯著高于A 組（P<0.05）。C組肌肉的蘋果酸脫氫酶活性顯著高于其他兩組（P<0.05）。各組間肌肉的琥珀酸脫氫酶和乳酸脫氫酶活性差異均不顯著（P>0.05）。

表4 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊肌肉糖酵解和酶活性的影響

2.4 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊肌纖維發(fā)育的影響

由表5 可知，C 組肌纖維直徑顯著高于B 組（P<0.05）。B 組和C 組肌纖維密度顯著高于A 組（P<0.05），且B 組和C 組間差異不顯著（P>0.05）。B 組橫截面積顯著高于C組（P<0.05）。

表5 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊肌肉特性的影響

3 討論

3.1 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊生長(zhǎng)性能的影響

飼糧營(yíng)養(yǎng)水平在促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育和維持機(jī)體生理活動(dòng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[15-16]。據(jù)報(bào)道，日糧營(yíng)養(yǎng)水平作為畜禽生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵因素，若提供適宜的營(yíng)養(yǎng)水平飼糧能充分發(fā)揮或促進(jìn)其生長(zhǎng)性能，從而增加養(yǎng)殖效益。研究表明，在飼糧蛋白質(zhì)水平為8.5%、9.5%和10.5%，其蛋白質(zhì)水平越高，絨山羊的增重就越高，且蛋白質(zhì)水平為10.5%組的料重比顯著低于8.5%組和9.5%組[17]。張繼偉[18]研究發(fā)現(xiàn)，絨山羊日增重和干物質(zhì)采食量均隨著飼糧蛋白質(zhì)水平的提高而增加，而料重比則是隨著蛋白質(zhì)水平的提高而降低。此外，侯鵬霞等[19]研究發(fā)現(xiàn)，添加飼糧蛋白質(zhì)水平為15%、21%的羔羊日增重顯著低于18%的羔羊。馮蕾等[20]研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，飼糧蛋白水平為14.6%的牛平均日增重高于11.6%。以上研究說(shuō)明，添加不同蛋白質(zhì)水平飼糧均會(huì)對(duì)動(dòng)物的平均日增重、采食量等產(chǎn)生不同程度的影響。本試驗(yàn)中，各組藏羊的終末體重、平均日增重及平均日采食量隨著飼糧蛋白質(zhì)水平的提高呈上升的趨勢(shì)，而料重比則相反。由此可知，飼糧蛋白質(zhì)水平越高，藏羊的生長(zhǎng)發(fā)育就越快，飼料轉(zhuǎn)化效率就越高；反之飼糧蛋白質(zhì)水平越低，藏羊的生長(zhǎng)發(fā)育就越慢。

3.2 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊血清生化指標(biāo)的影響

動(dòng)物機(jī)體血清生化指標(biāo)能夠反映動(dòng)物的健康、免疫力、生理和病理變化[21]。目前血清生化指標(biāo)檢測(cè)方法廣泛應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)性能和生長(zhǎng)狀況等方面的研究。葡萄糖是維持動(dòng)物健康的重要保障[22]。從本試驗(yàn)來(lái)看，C 組葡萄糖含量高于其他兩組?？赡苁秋暭Z蛋白質(zhì)水平在16%時(shí)機(jī)體對(duì)能量的消化吸收較充分，所以葡萄糖濃度較高。谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶能夠反映機(jī)體肝功能狀況[23]。從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，A 組中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于C 組，且A 組與B 組間差異不顯著。提示在蛋白質(zhì)水平12%飼糧條件下，藏羊的肝細(xì)胞膜可能受損或處于病理性變化，從而導(dǎo)致谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性上升，這與李紅麗[24]研究結(jié)果不一致，究其原因可能是動(dòng)物品種、飼養(yǎng)環(huán)境以及生長(zhǎng)階段的差異造成。總蛋白、白蛋白、尿素氮含量可以反映機(jī)體的蛋白質(zhì)沉積和代謝情況[25-26]。劉薇等[27]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧蛋白質(zhì)水平處于中等時(shí)，嶗山奶山羊血清中總蛋白含量顯著高于低蛋白組。在本試驗(yàn)中，A 組中總蛋白含量顯著低于B 組，且B 組與C 組間差異不顯著。說(shuō)明使用蛋白質(zhì)水平為12%的飼糧不利于增強(qiáng)藏羊的免疫機(jī)能。

膽固醇、三酰甘油含量可以反映機(jī)體脂質(zhì)的代謝情況[28]。從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，各組間總膽固醇、三酰甘油含量差異不顯著。由此推測(cè)在不同日糧蛋白質(zhì)水平下藏羊?qū)χ|(zhì)代謝沒(méi)有顯著差異。另外，尿素氮作為體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝主要產(chǎn)物之一，其含量可體現(xiàn)機(jī)體內(nèi)氮的代謝情況[29]。在本試驗(yàn)中，各組間尿素氮含量差異不顯著。這進(jìn)一步表明使用適宜蛋白水平飼糧對(duì)藏羊氮利用無(wú)不利影響。

3.3 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊肌肉糖酵解和酶活性的影響

在缺氧條件下，肌肉中肌糖原會(huì)發(fā)生一系列酶促反應(yīng)轉(zhuǎn)變成乳酸，并且會(huì)一直到糖酵解酶失活或肌糖原耗盡而終止。因此，糖原酵解潛力能夠衡量肌肉糖酵解的程度與速率，是評(píng)價(jià)肉質(zhì)特性的重要指標(biāo)之一[30]。研究表明，加快糖酵解的速度，使宰后羊肉的糖原含量減少，乳酸含量增加，降低pH，從而可以影響肌肉的熟肉率、滴水損失和剪切力[31]。其他試驗(yàn)也證實(shí)，改變糖酵解速度可能對(duì)宰后羊肉產(chǎn)生不同的影響[32]。從本試驗(yàn)來(lái)看，C組的糖原含量顯著高于A組。表明飼喂16%蛋白質(zhì)水平飼糧能夠改善肌肉品質(zhì)。乳酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶以及琥珀酸脫氫酶與衡量肌肉能量代謝有關(guān)[33]。白艷蘋等[34]研究表明，添加乳酸菌后顯著提高了琥珀酸脫氫酶的酶活性。另外此試驗(yàn)也證明了添加乳酸菌后顯著降低了乳酸脫氫酶的酶活性。琥珀酸脫氫酶和蘋果酸脫氫酶，是有氧代謝途徑中限速酶[35]。從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，A 組與B 組蘋果酸脫氫酶活性顯著低于C 組。這進(jìn)一步表明了過(guò)低蛋白質(zhì)飼糧顯著降低藏羊肌肉代謝酶活性。此外，肌肉中乳酸脫氫酶的活性是衡量機(jī)體無(wú)氧酵解、有氧代謝能力的標(biāo)志性酶之一[36]。從本試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，各組間乳酸脫氫酶活性差異不顯著，因相關(guān)內(nèi)容較少，其潛在作用機(jī)理還有待進(jìn)一步深入研究。

3.4 不同蛋白質(zhì)水平飼糧對(duì)藏羊肌纖維發(fā)育的影響

骨骼肌代謝能力在很大程度上取決于肌纖維的可塑性，而肌纖維的收縮能力、線粒體含量和代謝特性與肌纖維的發(fā)育緊密相關(guān)[37]。據(jù)報(bào)道，肌肉生長(zhǎng)發(fā)育常伴隨著肌纖維直徑、面積的增加以及肌纖維密度的減少來(lái)實(shí)現(xiàn)[38]。在動(dòng)物出生之后，一般情況下不會(huì)改變肌纖維的數(shù)目，但是隨著環(huán)境變化、發(fā)育階段、飼料類型等不同，肌纖維類型也會(huì)隨之發(fā)生改變[39-40]。肌纖維密度、直徑、橫截面積是衡量肉品質(zhì)的重要指標(biāo)，一般認(rèn)為直徑、橫截面積越小，而密度越大，表明肉越嫩[41]。隨著飼糧蛋白質(zhì)水平的升高，發(fā)現(xiàn)羔羊的肌纖維密度隨之升高[42]。其他試驗(yàn)也證實(shí)，飼糧蛋白質(zhì)水平越高，育肥豬的橫截面積都會(huì)相應(yīng)減少，從而提高肌纖維的密度[43]。在本試驗(yàn)中，B 組的肌纖維直徑顯著低于C 組，并且數(shù)值最小，此外，B 組與C 組肌纖維密度顯著高于A 組。由此推測(cè)，飼喂14%蛋白水平飼糧能夠提高藏羊肌肉的嫩度。

4 結(jié)論

綜上，在本試驗(yàn)條件下，飼糧蛋白水平為16%時(shí)，有利于增強(qiáng)藏羊的生長(zhǎng)性能，飼糧蛋白水平為14%時(shí)，有利于增強(qiáng)育肥期藏羊肌肉品質(zhì)。