癸氧喹酯和托曲珠利治療性預(yù)防犢牛球蟲病的動態(tài)效果評價

黎玉瓊，于有利*，從志鵬，焦曉軍，梁小軍

（1.寧夏農(nóng)林科學院動物科學研究所 銀川 750002；2.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院 陜西楊凌 712000；3.華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院 廣州 510000）

牛球蟲病是由牛源艾美爾球蟲引起的一種全球性疾病，是導致牛腹瀉的常見病原[1]。牛球蟲病臨床癥狀主要為腹瀉、痢疾、里急后重、體重減少、虛弱和精神萎靡[2]，幾乎所有的牛均易感球蟲，1 歲以內(nèi)的犢牛球蟲病的發(fā)病率和死亡率較高[3]，成年牛發(fā)病率較低[4]。在我國，犢牛球蟲病多發(fā)生于3月齡，因為通常2月齡的犢牛面臨混群、斷奶等應(yīng)激導致機體免疫力低下，易感球蟲病。牛感染球蟲后，只有少數(shù)的牛表現(xiàn)出臨床癥狀，大多數(shù)牛呈亞臨床型表現(xiàn)[5]。牛感染球蟲后，腸黏膜的功能被破壞，對腸道造成不可逆的損傷，影響牛的消化能力、降低飼料報酬、增加養(yǎng)殖成本，青年牛則表現(xiàn)為繁殖障礙等[6-7]。

牛球蟲病主要通過糞-口途徑在動物間傳播，該病主要由于短時間內(nèi)攝入大量卵囊引起的。糞便中的卵囊、污染的飼料和水源以及初乳缺乏、放養(yǎng)密度高、營養(yǎng)不良等因素均認為是重要的誘發(fā)因素[8]。通過環(huán)境衛(wèi)生消毒手段對球蟲病控制無明顯效果，臨床上經(jīng)藥物治療雖可以達到殺滅體內(nèi)球蟲的，但是其治療效果有限，因為球蟲幾乎可在腸道內(nèi)完成整個生命周期，對腸道造成嚴重損害。治療性預(yù)防可阻斷球蟲的繁殖和保護腸黏膜損傷是防治球蟲病的首選方法[9]。

本研究選取具有發(fā)病史牛場的3月齡犢牛進行球蟲檢測，并選用托曲珠利和癸氧喹酯藥物分別對犢牛球蟲病進行治療性預(yù)防,并對其療效進行動態(tài)監(jiān)測，進而評價兩種藥物的療效、藥物持效期，為進一步制定“定期監(jiān)測、按需適時驅(qū)蟲、綜合評估、適時穿梭輪換用藥再驅(qū)蟲”高效驅(qū)蟲技術(shù)提供科學依據(jù)。

1 材料

1.1 試驗動物及養(yǎng)殖環(huán)境

選取寧夏某奶牛場72 頭未使用抗球蟲藥物治療且體重無差異的3月齡體重130 kg 左右的荷斯坦母犢牛。該奶牛場飼養(yǎng)管理、環(huán)境管理良好（運動場地大、干燥，飼養(yǎng)密度小，糞便清理及時），但有從同一集團球蟲高污染牧場調(diào)牛史，曾有兩批犢牛轉(zhuǎn)入后發(fā)生臨床球蟲病。

1.2 主要儀器和試劑

多功能電子天平（型號為JD500-2），購自沈陽龍騰電子有限公司產(chǎn)品；重鉻酸鉀（483044），購自Sigma-Aldrich 公司產(chǎn)品；生理鹽水（ST341），購自上海碧云天有限公司產(chǎn)品；6 %癸氧喹酯預(yù)混劑和5 %托曲珠利混懸液，購自浙江匯能動物藥品有限公司。

2 方法

2.1 分組和給藥方案

將未使用抗球蟲藥物治療過的3月齡體重無差異的72 頭犢牛分成3 組，每組24 頭，分別為癸氧喹酯組、托曲珠利組和對照組，每組的犢牛單獨飼養(yǎng)。初次糞檢后分組，分組情況、每組陽性牛數(shù)及給藥方案見表1。

表1 分組方案及給藥方法

2.2 糞便采集及卵囊計數(shù)

通過刺激肛門采集新鮮糞便。各試驗組所有犢牛均分別在第0、7、14、21、28、35、42、49、56、84、112 和196 天逐頭采集新鮮犢牛糞便，4 ℃保存，送至實驗室進行檢驗。根據(jù)麥克馬斯特法計算每克糞便中的卵囊數(shù)（oocysts per gram of feces，OPG）：稱取2 g 糞樣置于干凈的100 mL 燒杯內(nèi)，加入8 mL 飽和食鹽溶液，用玻璃棒搗碎混勻。再加入50 mL 飽和食鹽溶液，混勻后立即用60 目篩網(wǎng)過濾。然后吸取濾液充滿2 個計數(shù)室，在顯微鏡載物臺上靜置3～5 min，在10 倍物鏡下鏡檢計數(shù)。每個計數(shù)室內(nèi)有100 個方格，其體積為1 cm×1 cm×0.15 cm=0.15 cm3。待分別查完2 個計數(shù)室100 個方格內(nèi)的卵囊數(shù)量n1 和n2，按照如下公式計算OPG[10]。

OPG=[( n1+ n2)/(2×0.15)]×60÷2

2.3 體重變化監(jiān)測

不同分組的犢牛分別在第0、7、14、21、28、35、42、49、56、84、112 和196 天進行稱重，計算各組犢牛的平均增重變化。

2.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析

利用SPSS 23.0 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標準誤”表示。采用卡方檢驗對結(jié)果進行差異顯著性分析，p＜0.05 表示差異顯著，p＜0.01 表示差異極顯著，p＞0.05 表示差異不顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 球蟲卵囊數(shù)量變化檢測

通過對用藥前后球蟲卵囊檢測并分析，結(jié)果如表2所示，用藥后第7 天，癸氧喹酯組和托曲珠利組陽性犢牛數(shù)量均減少為1 頭，卵囊排出率均為4.17 %，癸氧喹酯組平均OPG 為400，托曲珠利組平均OPG 為100，陰性對照組陽性犢牛數(shù)量為6 頭，卵囊排出率為25 %，平均OPG 為217。用藥后第14 天，癸氧喹酯組犢牛球蟲陽性數(shù)為0 頭，卵囊排出率為0.00 %，平均OPG 為0，托曲珠利組犢牛球蟲陽性數(shù)為1 頭，卵囊排出率為4.17 %，平均OPG 為100。從第14—49 天，癸氧喹酯組陽性犢牛數(shù)一直為0 頭，卵囊排出率為0.00 %，平均OPG 為0；托曲珠利組陽性犢牛第7—28 天，陽性犢牛數(shù)為1 頭，卵囊排出率均為4.17 %，平均OPG 為100，從35—49 天托曲珠利組陽性犢牛數(shù)為2 頭，卵囊排出率均為8.33 %，平均OPG 從150 增加到300。從56—196 天，各組陽性犢牛數(shù)、卵囊排出率和OPG 均呈現(xiàn)增加的趨勢，癸氧喹酯組陽性犢牛數(shù)5～7 頭，卵囊排出率為20.83 %～29.17 %，平均OPG 560～807；托曲珠利組陽性犢牛數(shù)4～8 頭，卵囊排出率為16.67 %～33.33 %，平均OPG 425～1,394。對照組從0—196 天，陽性犢牛數(shù)量從6 頭增加到11 頭，卵囊排出率從25 %增加到45.83 %，平均OPG 從167 增加到1,123。

表2 不同組犢牛球蟲檢測結(jié)果

在整個試驗周期內(nèi)，對照組陽性犢牛頭數(shù)呈現(xiàn)增長趨勢，2 組藥物治療組陽性犢牛頭數(shù)先減少后增加，但是均顯著低于對照組（圖1）。不同組卵囊排出總量與陽性犢牛頭數(shù)變化趨勢一致，呈線性相關(guān)（圖2）。

圖1 不同組陽性犢牛頭數(shù)及卵囊排出率統(tǒng)計

圖2 不同組陽性牛卵囊排出量及變化趨勢

3.2 體重變化

通過對不同組犢牛體重變化分析，結(jié)果見表3所示，試驗開始后0—35 天，各組犢牛體重均無差異（p＞0.05）；試驗第49 天，癸氧喹酯組與對照組犢牛體重相比差異顯著（p＜0.05），托曲珠利組和對照組犢牛體重相比差異不顯著（p＞0.05）；試驗第56 天，托曲珠利組與對照組犢牛體重相比差異顯著（p＜0.05），癸氧喹酯組與對照組犢牛體重相比差異顯著（p＜0.05）；試驗第84、112 和196 天癸氧喹酯組和托曲珠利組犢牛體重均與對照組相比差異極顯著（p＜0.01）；整個試驗周期內(nèi)癸氧喹酯組和托曲珠利組犢牛體重相比均無差異（p＞0.05）。

表3 不同時間點不同組犢牛體重變化

4 討論

隨著規(guī)?；蹋ㄈ猓┡ｐB(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，由艾美爾球蟲等寄生蟲感染引起的奶（肉）牛腹瀉和呼吸道疾病發(fā)病率和死亡率急劇攀升，嚴重威脅著奶（肉）牛產(chǎn)業(yè)和地區(qū)經(jīng)濟的發(fā)展。球蟲感染前期使用藥物抑制卵囊排出是控制球蟲病的最有效途徑，因此預(yù)防牛球蟲病，牛群應(yīng)該進行早期的藥物預(yù)防而非發(fā)病后治療。當出現(xiàn)臨床癥狀或排出蟲卵時，球蟲已經(jīng)損傷腸道并完成繁殖過程[6]。為了阻止球蟲的大量繁殖及隨后的黏膜損傷，選用的預(yù)防藥物必須可以破壞寄生蟲的早期階段如裂殖生殖階段。癸氧喹酯屬喹啉類抗球蟲藥，主要作用是阻礙球蟲子孢子發(fā)育，具有廣譜抗球蟲活性，可用于防治各類球蟲病，用藥時間一般需要覆蓋球蟲的整個生命周期[6,10]。托曲珠利對球蟲的作用時期較廣泛，對球蟲的兩個無性周期均有作用，如抑制裂殖體、小配子體的核分裂和小配子體的壁形成體過程?？诜星槔诜淮?，不僅可以治療球蟲病而且可促進動物獲得球蟲終生免疫力。因此從臨床實踐中驗證藥物的作用效果可為預(yù)防球蟲病的暴發(fā)和制定有效的用藥程序提供科學依據(jù)。

本研究利用癸氧喹酯和托曲珠利分別治療犢牛7 d 后發(fā)現(xiàn)癸氧喹酯組和托曲珠利組的犢牛球蟲感染率顯著低于對照組，表明兩種藥物對球蟲均有有效的抑制和殺滅作用。在用藥后30 天到第49 天時，癸氧喹酯組犢牛一直無球蟲卵囊排出，OPG 值和感染率均為0；同時期僅給藥一次的托曲珠利組，犢牛球蟲感染頭數(shù)增加，OPG 值和球蟲感染率也呈上升趨勢，表明持續(xù)給藥的癸氧喹酯組在治療性預(yù)防方面效果優(yōu)于托曲珠利組；用藥后第56 天至196 天，三組犢牛的球蟲陽性頭數(shù)、卵囊排出率、卵囊排出總量及平均OPG 值均呈現(xiàn)上升趨勢，但癸氧喹酯組和托曲珠利組的各指標均明顯低于陰性對照組，兩個給藥組之間差異不顯著。根據(jù)給藥療程和試驗結(jié)果，可推算出癸氧喹酯藥物治療性預(yù)防的周期約為19 d，托曲珠利藥物治療性預(yù)防的周期約為49 d。本研究同時證明了托曲珠利在用藥1 次后能在一定程度上而不是完全抑制球蟲卵囊的排出，后期仍會發(fā)生球蟲病，因此托曲珠利不能達到一次用藥，終生免疫的效果。另外，托曲珠利僅能通過灌服方式進行給藥，不適用于體型較大的犢牛，而癸氧喹酯可通過拌料的方式飼喂，更便于給藥。

通過統(tǒng)計分析不同組犢牛體重變化發(fā)現(xiàn)試驗第49 天到196天，癸氧喹酯組和托曲珠利組均與陰性對照組犢牛體重相比差異顯著，藥物治療性預(yù)防后的犢牛體重增加量明顯高于對照組，尤其在治療后期更明顯，而整個治療周期中癸氧喹酯組和托曲珠利組犢牛體重相比均無差異。究其原因可能是由于對照組犢牛一直處于球蟲感染狀態(tài)，嚴重影響犢牛的消化能力，降低飼料報酬。連續(xù)使用同種抗球蟲藥物則會產(chǎn)生耐藥性，因此在治療犢牛球蟲病時應(yīng)選取多種藥物輪換或穿梭使用，不可長期使用同類藥物[5]。預(yù)防球蟲病不能僅依賴藥物治療，準確的診斷和流行病學調(diào)查也是科學合理控制球蟲病的前提[11,12]。■