鳥氨酸脫羧酶抗酶2 在結(jié)直腸癌中的表達及臨床意義

朱 俊，曹 維

（1 如皋博愛醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 226500；2 南通大學附屬醫(yī)院消化內(nèi)科）

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是目前全球發(fā)病率及死亡率較高的惡性腫瘤[1]，國內(nèi)發(fā)病率呈逐年升高趨勢[2]，約20%CRC 患者在發(fā)現(xiàn)時已有轉(zhuǎn)移，預后較差[3]，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療可顯著提高患者生存率。已證實鳥氨酸脫羧酶抗酶（ornithine decarboxylase antizyme，OAZ）作為腫瘤抑制因子抑制腫瘤的發(fā)生及發(fā)展進程[4-5]，是腫瘤治療的潛在靶點。OAZ通過多胺過度積累誘導的核糖體移碼機制對多胺的生物合成起負調(diào)控作用，減緩腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)化速度[6]。已知的OAZ 基因家族主要包括OAZ1、OAZ2、OAZ3 和機制不明的OAZ4。OAZ1 在體內(nèi)外均可抑制鳥氨酸脫羧酶（ornithine decarboxylase，ODC）活性[7]，對許多腫瘤具有抑制作用。OAZ2 與OAZ1 作用相似，但有研究表明其僅在體內(nèi)抑制ODC 活性[8]。OAZ2 通過調(diào)節(jié)多胺代謝，在胃癌[9]、神經(jīng)母細胞瘤[10]中起腫瘤抑制作用，在一定程度上可以增強甚至替代OAZ1 的腫瘤抑制作用[11]。本研究選取2018 年1月—2022 年12 月如皋博愛醫(yī)院普外科經(jīng)手術(shù)切除病理證實的80 例結(jié)直腸癌組織及其配對癌旁組織，采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（RT-qPCR）檢測OAZ2 mRNA 表達，分析OAZ2 表達與結(jié)直腸癌臨床和病理參數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 手術(shù)切除的80 例結(jié)直腸癌組織及其配對癌旁組織，均經(jīng)病理證實為腺癌，組織標本置液氮罐凍存待測。80 例患者中男性36 例，女性44例；年齡≤65 歲44 例，＞65 歲36 例；分化程度：高分化46 例，中低分化34 例；浸潤深度：T1～T2 期57例，T3～T4 期23 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30 例。

1.2 OAZ2 mRNA 檢測方法 采用TRIzol 試劑盒（Sigma-Aldrich，美國）從組織中提取總RNA，取每個樣品2 μg RNA，使用FastStart Universal SYBR Green Master（Roche，美國）和LightCycler 480 PCR系統(tǒng)（Roche，美國）進行RT-qPCR。以cDNA 為模板，反應體系：10 μL PCR 混合物，0.5 μL 正向和反向引物，2μL cDNA 模板和反應所需的水，最終反應體積為20 μL。PCR 反應步驟：95 ℃變性30 s，然后94 ℃15 s，56 ℃30 s，72 ℃20 s，共45 個循環(huán)。引物采用Primer 5.0 軟件設計，由Invitrogen（上海）公司合成，引物序列見表1。

表1 引物序列

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理分析。計數(shù)資料以頻數(shù)和率表示，組間差異性比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 OAZ2 mRNA 在結(jié)直腸癌中的表達 結(jié)直腸癌組織中OAZ2 mRNA 表達水平低于配對的癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖1。

圖1 結(jié)直腸癌及其癌旁組織OAZ2 mRNA 表達

2.2 OAZ2 mRNA 表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 按照80 例結(jié)直腸癌組織OAZ2 mRNA表達量中位數(shù)，分為高表達和低表達各40 例。結(jié)果顯示，OAZ2 mRNA 表達與腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，中、低分化結(jié)直腸癌組織中OAZ2 mRNA表達低于高分化結(jié)直腸癌組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌組織中OAZ2 mRNA 表達低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），OAZ2 mRNA 表達與患者性別、年齡、腫瘤浸潤深度無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

表2 OAZ2 mRNA 表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理參數(shù)關(guān)系 n（%）

3 討論

多胺在DNA 復制、RNA 轉(zhuǎn)錄翻譯、血管生成等過程中發(fā)揮重要作用。過量多胺堆積會造成細胞異型增生和惡性增殖，導致腫瘤的發(fā)生發(fā)展。ODC 是多胺生物合成過程中的限速酶，協(xié)助外源性鳥氨酸轉(zhuǎn)化為機體生長代謝所需的多胺（腐胺、精胺和亞精胺），內(nèi)源性ODC 抑制劑的失效造成ODC 水平異常升高，多胺過度累積，從而導致細胞惡性增殖[12]。ODC 作為促癌基因在乳腺癌、結(jié)直腸癌等許多癌癥中高表達。

OAZ 是ODC 內(nèi)源性抑制酶，通過抑制ODC 的活性而抑制多胺代謝，進而抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞凋亡，是重要的腫瘤抑制因子[13]。OAZ2 在胃癌和神經(jīng)母細胞瘤中通過調(diào)節(jié)多胺代謝抑制腫瘤生長，也可通過抑制轉(zhuǎn)錄因子NFκB 影響細胞周期[14]。OAZ2 還可能修復因miR-34a 水平降低導致的結(jié)直腸癌患者化療藥物耐藥性，推測OAZ2 在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。本文研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中OAZ2 mRNA 表達水平低于配對的癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。中、低分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌組織中OAZ2 mRNA 表達低于高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示OAZ2 可能參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展，有望作為潛在的腫瘤治療新靶點。