活動性肺結(jié)核患者血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST及單核細胞P糖蛋白水平及其臨床意義

張會玲, 高海彥

武威市涼州醫(yī)院檢驗科,甘肅武威 733000

活動性肺結(jié)核(active pulmonary tuberculosis,APTB)是以結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)繁殖活躍且毒性極高為主要特征的肺結(jié)核,易造成傳播和感染,采用有效的監(jiān)測指標早期評估對控制結(jié)核病的傳播具有重要意義[1]。隨著近年分子免疫和細胞學的發(fā)展,細胞因子和免疫細胞在APTB免疫機制中的作用已成為APTB臨床研究的熱點[2]。Fad D9重組蛋白是以脂肪酸-CoA連接酶形式參與結(jié)核桿菌脂質(zhì)降解過程的脂質(zhì)代謝相關(guān)基因,可誘導(dǎo)Th1細胞因子,對結(jié)核桿菌在體內(nèi)擴散具有抑制作用[3]?？扇苄园准毎只乖?4亞型(sCD14-ST)是細菌表面脂多糖與單核巨噬細胞結(jié)合形成的可溶性糖蛋白片段,常作為急性時相反應(yīng)標志物應(yīng)用于感染性疾病的臨床診斷[4]。單核細胞P糖蛋白(monocyte P-glycoprotein,Pgp)是ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體家族中最具代表性的蛋白,可上調(diào)細胞外排轉(zhuǎn)運體的表達,有利于維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)[5]。目前臨床關(guān)于血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST及Pgp與結(jié)核病病情的相關(guān)報道較少,因此本研究分析APTB患者血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp水平及其臨床意義,旨在為APTB的臨床診斷提供新的監(jiān)測指標。

1 資料和方法

1.1 研究對象

選取本院2019年1月—2021年1月收治的96例APTB患者納入APTB組,年齡(39.17±5.12)歲,男57例,女39例,血沉(37.13±7.49)mm/h。納入標準:符合APTB診斷標準[6];接受2HRZE/4HR治療方案;臨床資料完整。排除標準:合并乙肝病毒、丙肝病毒或人類免疫缺陷病毒感染;合并慢性腎臟疾病、惡性腫瘤;3個月內(nèi)使用免疫抑制劑;未規(guī)律服用抗結(jié)核藥物;合并骨關(guān)節(jié)炎、風濕病等自身免疫疾病。所有患者均行胸部CT檢查,按照肺部病灶有無空洞和病灶肺葉數(shù)(病灶肺葉≥3個或病灶肺葉<3個)分亞組。另選擇同期體檢健康且經(jīng)γ干擾素釋放試驗(interferon-gamma release assay,IGRA)檢測陰性或者陽性各48例分別納入健康對照(health control,HC)組和結(jié)核潛伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)組。HC組年齡(38.74±5.26)歲,男26例,女22例。LTBI組年齡(38.05±5.11)歲,男25例,女23例。各組一般資料比較差異無顯著性(P>0.05)。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過,所有受試者均知情同意。

1.2 Fad D9重組蛋白的檢測

以MTB H37Rv為模板基因組,使用Fad D9基因(序列號888574)的上下游引物進行聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR),產(chǎn)物經(jīng)擴大培養(yǎng)、裂解和純化后獲得Fad D9重組蛋白,并進行電泳鑒定純度。采集各組空腹靜脈血3 mL,離心后按1∶100稀釋為一抗,以過氧化物酶標記的山羊抗人IgG按1∶3 000稀釋為二抗,將Fad D9重組蛋白作為抗原包被96孔板,檢測Fad D9重組蛋白抗體特異性反應(yīng)水平。以Fad D9重組蛋白為抗原與全血樣本37 ℃共孵育20～24 h,離心分離血漿,并進行IGRA,ELISA試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司。將檢測結(jié)果與試劑盒中的標準管進行比對,檢測Fad D9重組蛋白在臨床血漿樣本中激起的細胞免疫水平,以血清Fad D9重組蛋白水平表示Fad D9重組蛋白表達水平。

1.3 血清sCD14-ST和Pgp水平的檢測

采用酶聯(lián)免疫法檢測各組血清sCD14-ST和Pgp水平,試劑盒由上海機純實業(yè)有限公司和陜西伊諾納爾生物科技有限公司生產(chǎn),所有檢驗操作均嚴格按試劑說明書執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計學處理

2 結(jié) 果

2.1 各組Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp水平的比較

Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp水平APTB組>LTBI組>HC組;且有空洞組高于無空洞組,病灶肺葉≥3個組高于<3個組(P<0.05;表1)。

2.2 Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp的診斷效能

血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp對APTB診斷和APTB、LTBI鑒別有良好效能(P<0.001;圖1和圖2)。

圖1 血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp對APTB診斷的ROC曲線

圖2 血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST、Pgp對LTBI鑒別診斷的ROC曲線

3 討 論

APTB患者肺組織內(nèi)MTB持續(xù)增殖且傳播活躍,影像學檢查可見肺部斑片狀滲出或形成空洞和播散性病變[7]。有研究顯示,APTB臨床表現(xiàn)具有明顯的異質(zhì)性,檢測相關(guān)因子水平變化情況,對判斷結(jié)核的活動性及監(jiān)測評估病情具有重要的意義[8]。

本研究結(jié)果顯示,APTB組血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp水平均高于LTBI組和HC組,與張君麗等[3]研究結(jié)果類似,說明上述指標在APTB組與LTBI組中均顯著升高,其中APTB組各指標升高更為顯著。γ干擾素(interferon-γ,IFN-γ)是對MTB感染具有控制作用的細胞因子,Fad D9重組蛋白可通過調(diào)控IFN-γ的分泌發(fā)揮其對MTB在體內(nèi)傳播的細胞免疫作用[9]。機體感染MTB時,細胞吞噬MTB過程中有大量溶酶體酶參與,促使細胞膜上sCD14大量釋放入血[10]。本研究ROC曲線結(jié)果顯示,血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp對APTB和LTBI鑒別具有較好的診斷效能,血清Fad D9重組蛋白診斷效能高于sCD14-ST和Pgp,說明血清Fad D9重組蛋白可作為APTB篩查和MTB潛伏感染的可靠監(jiān)測指標。

本研究結(jié)果顯示,APTB患者血清Fad D9重組蛋白、sCD14-ST和Pgp水平在有空洞和病灶肺葉≥3個的APTB患者中異常升高。大量T細胞表位的Fad D9蛋白可誘導(dǎo)Th1型細胞免疫反應(yīng),其血清含量可評估機體免疫損傷程度。sCD14-ST是產(chǎn)生于CD14細菌感染中的N端片段,機體出現(xiàn)免疫系統(tǒng)抑制時,抗原免疫逃逸使病情加重。嚴重的MTB感染時,細胞可通過誘導(dǎo)上調(diào)Pgp表達,以減少外源性有害物質(zhì)傷害。麥精蘭[11]與馬清艷等[12]研究發(fā)現(xiàn),血清標志物sCD14-ST與Pgp在耐多藥肺結(jié)核患者血清水平升高與病情進展有關(guān),與本研究類似,提示Fad D9重組蛋白、sCD14-ST及Pgp對APTB病情嚴重程度評估具有一定的監(jiān)測意義。

綜上所述,Fad D9重組蛋白、sCD14-ST及Pgp在APTB患者血清中明顯升高,且與肺部病灶的嚴重程度有關(guān)。本研究的不足之處在于未就上述指標對APTB療效評估的價值進行探討,后續(xù)仍需加大樣本量深入研究驗證。