系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腸道菌群特征及其與抗Smith抗體、抗dsDNA抗體相關(guān)性

梁菽燕, 王 奕, 和瑞婷, 張麗亞, 解 南

山西盈康一生總醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科,山西 運城 044000

系統(tǒng)性紅斑狼瘡病因尚不明確,其與自身免疫系統(tǒng)異常激活相關(guān),屬彌漫性結(jié)締組織病的一種,患者體內(nèi)會產(chǎn)生大量自身抗體,使免疫系統(tǒng)攻擊自身組織,進(jìn)而引起全身多臟器及組織受損[1-2]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床癥狀主要表現(xiàn)為全身炎癥反應(yīng),還可出現(xiàn)蝶形紅斑、黏膜潰瘍、關(guān)節(jié)痛及漿膜炎等,嚴(yán)重時可累及腎、心血管、血液系統(tǒng)及消化系統(tǒng),嚴(yán)重危害患者身心健康,且無法根治[3]。因此,早期發(fā)現(xiàn)及治療對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的預(yù)后具有重要意義。腸道菌群與黏膜免疫密切相關(guān),可影響?zhàn)つっ庖咧械奶囟ㄑ装Y因子,進(jìn)而影響免疫系統(tǒng)整體調(diào)節(jié)[4]?？筍mith抗體和抗dsDNA抗體均在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中被發(fā)現(xiàn),但其與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)系尚不明確[5]。本研究旨在探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的腸道菌群特征,以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡與抗Smith抗體、抗dsDNA抗體的相關(guān)性。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將山西盈康一生總醫(yī)院自2020年3月至2022年10月收治的59例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者納入觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn):參照《2020中國系統(tǒng)性紅斑狼瘡診療指南》[6],在全身狀況、血液系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、皮膚黏膜、漿膜腔、肌肉骨骼、腎、抗磷脂抗體、補體、特異抗體等10個方面至少包含1條臨床分類標(biāo)準(zhǔn)且總分≥10分[7];病程≥1年;年齡18～60歲。排除標(biāo)準(zhǔn):近1個月使用過抗生素;存在腸道手術(shù)史;合并其他免疫系統(tǒng)疾病。另將同期體檢健康人群59例納入健康組。健康組中,男性32例,女性27例;年齡18～55歲,平均年齡(34.61±5.92)歲。觀察組中,男性18例,女性41例;年齡20～58歲,平均年齡(37.44±6.22)歲;處于活動期35例,靜止期24例。兩組患者性別比例、年齡比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性?；颊呒捌浼覍倬炇鹬橥鈺?。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 治療方法 參照《2020中國系統(tǒng)性紅斑狼瘡診療指南》[6],以羥氯喹、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、生物制劑、其他措施藥物疊加順序進(jìn)行個體化治療,以期最大程度延緩疾病進(jìn)展。兩組研究對象采取營養(yǎng)豐富、均衡多樣化飲食,采集新鮮糞便中段內(nèi)側(cè)標(biāo)本約1 g,放入無菌保存管中,提取DNA,操作嚴(yán)格根據(jù)試劑盒(日本Takara BIO株式會社)說明書進(jìn)行。采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)對糞便標(biāo)本中的大腸埃希菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌進(jìn)行定量,若無法立刻進(jìn)行檢測,應(yīng)立刻放入-80℃冰箱冷凍保存。引物序列參考文獻(xiàn)[8],由上海生工生物合成,見表1。PCR反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性5 min,95℃ 15 s,退火30 s,74℃延伸45 s,共35個循環(huán),72℃復(fù)性10 min。兩組研究對象在藥物治療前,采集清晨空腹后靜脈血樣5 ml,分離血清,采用酶聯(lián)免疫吸附法測定抗dsDNA抗體,采用免疫印跡法測定抗Smith抗體,所有操作均嚴(yán)格根據(jù)試劑盒(德國歐蒙實驗室)說明書進(jìn)行。

表1 腸道菌群引物序列

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組的腸道菌群數(shù)量,以及抗Smith抗體、抗dsDNA抗體陽性率;分析系統(tǒng)性紅斑狼瘡與抗Smith抗體、抗dsDNA抗體的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 兩組腸道菌群數(shù)量比較 觀察組大腸埃希菌菌群數(shù)量為(4.35±0.65)×107,高于健康組的(3.98±0.45)×107,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組雙歧桿菌、乳酸桿菌菌群數(shù)量分別為(5.82±0.46)×107、(4.25±1.07)×107,均低于健康組的(6.32±0.45)×107、(5.49±0.47)×107,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 兩組抗Smith抗體、抗dsDNA抗體陽性率比較 觀察組抗Smith抗體、抗dsDNA抗體陽性率分別為35.59%(21/59)、22.03%(13/59),均高于健康組的0(0)、0(0),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 系統(tǒng)性紅斑狼瘡與抗Smith抗體、抗dsDNA抗體的相關(guān)性分析 系統(tǒng)性紅斑狼瘡與抗Smith抗體、抗dsDNA抗體均呈正相關(guān)(r值分別為0.373、0.411,P<0.05)。

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡與雌激素含量密切相關(guān),口服雌激素類避孕藥或長期口服雌激素進(jìn)行激素替代治療者患系統(tǒng)性紅斑狼瘡的風(fēng)險會增加,妊娠期患者因雌激素分泌量增多,系統(tǒng)性紅斑狼瘡病情也會隨之加重[9-10]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡無法徹底治愈,一旦患上需終生服藥治療,藥物治療可減輕并阻止其對臟器造成損害,緩解病情進(jìn)展[11-12]。隨著醫(yī)學(xué)發(fā)展,系統(tǒng)性紅斑狼瘡預(yù)后有了顯著提高,患者10年存活率已超過90%,15年存活率也有80%[13-14]。

腸道菌群是存在于胃腸道內(nèi)的正常微生物群,與自身免疫性疾病密切相關(guān),也是腸道的生物屏障,參與機體新陳代謝[15]。本研究發(fā)現(xiàn),與健康組相比,觀察組大腸埃希菌數(shù)量增多,雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量減少。大腸埃希菌為腸道菌群中的致病菌之一,當(dāng)雙歧桿菌和乳酸桿菌減少時,競爭力和抑制作用均降低,導(dǎo)致大腸埃希菌處于生長優(yōu)勢,造成系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腸道菌群失調(diào),進(jìn)而引起機體免疫功能受損[16-17]。楊文宏等[18]研究表示,腸道菌群可調(diào)控體內(nèi)炎性因子,雙歧桿菌可影響B(tài)細(xì)胞、白細(xì)胞介素-10及轉(zhuǎn)化生長因子的轉(zhuǎn)化分泌,乳酸桿菌則對重組人轉(zhuǎn)化生長因子、白細(xì)胞介素-6具有刺激作用。除此之外,系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腸道菌群特征也受地區(qū)、飲食及生活方式影響。Li等[19]研究指出,我國上海與北京的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腸道菌群特征相同,但與西班牙系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腸道菌群特征相反,證實系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腸道菌群特征與人種、飲食文化相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示:觀察組抗Smith抗體、抗dsDNA抗體陽性率均高于健康組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);系統(tǒng)性紅斑狼瘡與抗Smith抗體、抗dsDNA抗體均呈正相關(guān)(r分別為0.373、0.411,P<0.05)?？筍mith抗體為抗核抗體的一種,對系統(tǒng)性紅斑狼瘡具有高度特異性,檢測抗Smith抗體時無需考慮系統(tǒng)性紅斑狼瘡是否處于活動期,但僅有30%的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者可檢出抗Smith抗體陽性,因此需要聯(lián)合其他檢查進(jìn)行診斷[20-21]?？筪sDNA抗體為一種抗DNA抗體,與狼瘡性腎炎發(fā)病機制密切相關(guān),隨著疾病活動程度改變,其與抗Smith抗體聯(lián)合檢查有助于提高系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷率[22]。

綜上所述,與正常人群比較,系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的大腸埃希菌增多,雙歧桿菌和乳酸桿菌減少。系統(tǒng)性紅斑狼瘡與抗Smith抗體、抗dsDNA抗體呈正相關(guān),可通過檢測抗Smith抗體、抗dsDNA抗體來診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡。糞便樣本中雜質(zhì)較多,可能潛在生物或化學(xué)反應(yīng)等影響因素干擾檢測結(jié)果,且檢測結(jié)果可能受糞便新鮮程度的影響,因此,應(yīng)科學(xué)對待本研究的科學(xué)性和客觀性。