17β-HSDs基因在乳腺癌組織中的表達(dá)及與其臨床病理特征的關(guān)系

魯碩君 李春青 田國(guó)防

乳腺癌屬于常見(jiàn)惡性腫瘤之一,主要好發(fā)于女性人群,同時(shí)也是引起癌癥死亡關(guān)鍵原因[1]。正常情況下,乳腺組織生長(zhǎng)可以受到雌二醇激素(E2)異常上升的刺激[2]。相關(guān)研究顯示[3],E2水平異常增加有利于乳腺癌癌細(xì)胞的生長(zhǎng)以及促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展。17羥脫氫酶(17β-羥化類(lèi)固醇脫氫酶,17β-HSDs)屬于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸/煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH/NAD+)依賴(lài)性還原酶,尤其在雌激素以及雄激素代謝中具有關(guān)鍵作用[3]。17β-HSDs家族迄今發(fā)現(xiàn)15種亞型,主要分為氧化亞型、還原亞型,其中氧化亞型主要有2型、4型、8型等,還原亞型主要有1型、3型、7型等[4]。還原亞型主要以NADPH為輔助因子,可將效力低的雌激素轉(zhuǎn)化為E2,而氧化亞型主要以NAD+為輔助因子,作用與之相反。目前有研究表示[5],17β-HSDs基因同工酶表達(dá)的平衡對(duì)于維持E2水平具有重要的作用,還可參與乳腺癌發(fā)生和發(fā)展。由此,探討17β-HSDs基因在乳腺癌中的作用至關(guān)重要。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本的采集

選取2021年11月至2022年3月在我院治療的82例乳腺癌患者。獲取術(shù)中癌組織標(biāo)本以及距離病灶組織約5 cm以外的癌旁組織標(biāo)本作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):①納入的研究對(duì)象均符合中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)制定的2019版《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范》。其中關(guān)于乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6];手術(shù)前均未進(jìn)行過(guò)任何放化療以及免疫治療;均為女性;均進(jìn)行規(guī)范性手術(shù)治療并且術(shù)后按照2019版《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范》予以標(biāo)準(zhǔn)治療;病例資料完整;均無(wú)合并其他原發(fā)性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn):合并重要臟器功能異常者;拒絕進(jìn)行病理檢查的患者;伴有其他惡性腫瘤疾病史者;既往存在精神疾病史者;合并認(rèn)知功能障礙者。納入的研究對(duì)象均同意手術(shù)過(guò)程中采集癌組織及癌旁組織標(biāo)本。主要收集的臨床資料信息有性別、年齡、腫瘤分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、病理類(lèi)型、雌激素受體(ER)表達(dá)、人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER2)、孕激素受體(PR)及Ki67表達(dá)等。

標(biāo)本保存:獲取上述癌組織及癌旁組織,4%多聚甲醛溶液固定,24 h后,采用高濃度乙醇溶液脫水處理,再予以二甲苯溶液清洗,石蠟包埋。

1.2 主要儀器與試劑

儀器:高倍鏡(廠家:olympus,型號(hào):IXplore SpinSR)。試劑:4%多聚甲醛(上海鈺博生物科技有限公司);高濃度乙醇、二甲苯、蘇木素(北京譜析科技有限公司);石蠟(天根生化科技(北京)有限公司);PBS溶液(上海中喬新舟生物科技公司);1型和2型17β-HSDs抗體(北京西美杰科技有限公司)。

1.3 免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)組織內(nèi)1型和2型17β-HSDs基因表達(dá)

獲取上述保存的癌組織及癌旁組織,切片,厚度為5 μm,脫蠟、水化,予以過(guò)氧化氫-甲醇溶液,15 min后,予以PBS溶液清洗后,分別予以比例為1∶500的1型和2型17β-HSDs抗體,于4 ℃下過(guò)夜,再加入比例為1∶200二抗抗體,室溫環(huán)境下孵育,4 h后,采用DAB-過(guò)氧化氫溶液浸泡,再予以蘇木精溶液,30 s后用自來(lái)水清洗,再加乙醇清洗,甲苯干預(yù),封片。

結(jié)果判斷:組織相應(yīng)部位呈現(xiàn)棕黃色或者棕色的顆粒表示陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞率<10%記為0分;陽(yáng)性細(xì)胞率10%～25%記為1分;陽(yáng)性細(xì)胞率26%～70%記為2分;陽(yáng)性細(xì)胞率>50%記為3分?！?分記為陽(yáng)性。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá),1型與2型17β-HSDs基因相關(guān)性,1型和2型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn),P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織及癌旁組織中表達(dá)

癌組織中1型和2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率(62.20%、65.85%)均高于癌旁組織,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.869,14.057,P均=0.000)。見(jiàn)表1。

表1 1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)(例,%)

2.2 Spearman相關(guān)性分析1型和2型17β-HSDs基因

Spearman相關(guān)性結(jié)果顯示,1型與2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)性(γ=-0.322,P=0.003)。

2.3 1型和2型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

乳腺癌患者不同腫瘤分期、不同腫瘤直徑、不同ER、PR、HER2狀態(tài)1型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同年齡、病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目1型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

不同腫瘤分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、ER、PR、HER2狀態(tài)的2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同年齡、病理類(lèi)型、Ki67的1型和2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 1型和2型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系/例

3 討論

17β-HSDs基因家族與乳腺癌相關(guān)的因子主要有1型、2型等[7]。本次研究主要探討1型、2型17β-HSDs基因在乳腺癌中的作用。研究稱(chēng)[8],1型17β-HSDs基因通過(guò)酶轉(zhuǎn)化E1在原位提供E2中發(fā)揮重要作用,進(jìn)而刺激雌激素依賴(lài)性細(xì)胞的增殖。1型17β-HSDs基因可存在于多種乳腺癌組織[9]。2型17β-HSDs基因與1型作用相反,可催化E2到E1,且與1型17β-HSDs基因比較,2型17β-HSDs基因轉(zhuǎn)化為E2的活性更低,主要通過(guò)調(diào)節(jié)E1與E2之間的平衡,從而發(fā)揮對(duì)乳腺上皮細(xì)胞的保護(hù)作用[10]。但目前關(guān)于2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織內(nèi)的表達(dá)依舊存在質(zhì)疑。

本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),癌組織1型和2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率62.20%、65.85%均高于癌旁組織,提示1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織內(nèi)表達(dá)較高。進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn),1型和2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率之間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性,此項(xiàng)研究結(jié)果符合1型和2型17β-HSDs基因在E1及E2相互轉(zhuǎn)化中的作用。進(jìn)一步分析1型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系,發(fā)現(xiàn)ER陽(yáng)性及Ki67表達(dá)率高者1型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率更高。ER、PR表達(dá)可用于預(yù)測(cè)乳腺癌患者的預(yù)后,一般將其作為關(guān)鍵診療依據(jù),ER/PR陽(yáng)性者,可以采用內(nèi)分泌治療,且患者預(yù)后較好[11]。Ki67屬于關(guān)鍵細(xì)胞增殖標(biāo)志物,正常情況下,接受新輔助化療的患者,Ki67表達(dá)較低[12]。由此,檢測(cè)Ki67表達(dá)可預(yù)測(cè)療效。而本研究Ki67表達(dá)率高者中1型17β-HSDs基因明顯較表達(dá)率低者更高,說(shuō)明1型17β-HSDs基因可以成為預(yù)測(cè)乳腺癌患者療效的指標(biāo)[13]。另外本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn),腫瘤分期越高及腫瘤直徑越大的患者1型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)反而較低,說(shuō)明1型17β-HSDs基因陽(yáng)性可能主要存在于惡性程度低且腫瘤直徑小的患者。HER2狀態(tài)對(duì)于指導(dǎo)乳腺癌抗HER2治療具有重要作用[14]。本研究發(fā)現(xiàn)HER2表達(dá)越高者1型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)也較低,提示1型17β-HSDs基因可以成為乳腺癌患者抗HER2治療后預(yù)測(cè)預(yù)后的指標(biāo)。

觀察2型17β-HSDs基因與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系,發(fā)現(xiàn)不同腫瘤分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、ER、PR、HER2狀態(tài)的2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率比較,存在統(tǒng)計(jì)差異,且腫瘤分期越高、腫瘤直徑越大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目越多者2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率越高。進(jìn)一步說(shuō)明與浸潤(rùn)性小葉癌比較,2型17β-HSDs基因更容易表達(dá)在浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者,同時(shí)也提示2型17β-HSDs基因在惡性程度高、腫瘤直徑大且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目多的患者中表達(dá)更高[15]。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)ER、PR陽(yáng)性中2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率反而較低,提示2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌患者,采用內(nèi)分泌治療,效果可能不太理想。

綜上所述,1型和2型17β-HSDs基因在乳腺癌組織中均呈現(xiàn)高表達(dá),且與臨床病理參數(shù)有關(guān),臨床上通過(guò)檢測(cè)1型和2型17β-HSDs基因表達(dá),有利于了解乳腺癌疾病發(fā)病機(jī)制,還可作為預(yù)測(cè)患者預(yù)后依據(jù)。本次研究也存在不足,關(guān)于乳腺癌病理特征指標(biāo)與1型和2型17β-HSDs基因陽(yáng)性表達(dá)率的相關(guān)性還需要進(jìn)一步探討,同時(shí)17β-HSDs家族中包括多種亞型,是否存在其他亞型也與乳腺癌病理特征有關(guān)值得深入研究。