不同熱處理方式對三七莖葉中皂苷含量的影響

顏紅嬌，郭 琰，趙 月，趙聲蘭

（云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，昆明 650500）

三七莖葉為五加科人參屬植物三七［Panax notoginseng（Burk）F. H. Chen］的干燥莖葉，主產(chǎn)于云南省文山州各縣，稱為“文山七”，另廣西田陽、靖西、田東、德保等地也有種植，習(xí)稱“田七”，為著名的道地藥材。其具有止血、消腫、定痛的功效，主治出血癥、癰腫毒瘡［1］、跌打損傷、瘀血腫痛。2017 年被云南省衛(wèi)生和計劃生育委員會列為地方新食品資源［2］。其主要有效成分地下部位以人參皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1為主，三者之和應(yīng)大于5%［3］，地上部位以Rb3為主，相關(guān)標準規(guī)定葉中含量應(yīng)大于1%［4］，莖葉中含量應(yīng)大于0.5%［2］。現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于若干中成藥的制作［3］和食品加工［5］。

原二醇型人參皂苷在酶［6］、微生物［7］、化學(xué)試劑［8］、熱處理的作用下會轉(zhuǎn)化為天然三七中不存在或稀少的人參皂苷。通過炮制加工，三七中不同皂苷的相對含量會發(fā)生變化［9］，高溫高壓條件對皂苷成分有一定的破壞作用［10］，可促進皂苷的降解與重構(gòu)［11］，使三七莖葉中部分原生皂苷轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的次級皂苷［12］或稀有皂苷如F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2等［13］，稀有皂苷對心血管疾?。?4］、代謝性疾?。?5］等具有較好的治療效果。熱處理是中藥炮制及食品加工的主要方法，但國內(nèi)外關(guān)于三七的熱處理研究多集中在其地下部位［10］，有關(guān)莖葉的熱處理皂苷轉(zhuǎn)化研究相對較少。

本研究以三七莖葉為研究對象，經(jīng)高溫高壓蒸制、油炸、九蒸九曬、微波和超聲等方式炮制加工后，利用高效液相色譜儀檢測9 種單體皂苷成分（Rb1、Rc、Rb2、Rb3、F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2）含量的變化情況，為三七莖葉的炮制［9］、開發(fā)利用及稀有人參皂苷的轉(zhuǎn)化制備奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

DFY-600 型搖滾式高速萬能粉碎機，溫嶺市林大機械有限公司；YXQ-LS-50SⅡ型立式壓力蒸汽滅菌鍋，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；1260型高效液相色譜儀，安捷倫科技（中國）有限公司；DHG-9240A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；SK7210HP 型電熱恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司；JA-20001 型電子天平，廣州玉治儀器有限公司；C21-J01 型電磁爐，杭州九陽生活電器有限公司。

1.2 供試材料及藥劑

干燥三七莖葉，于2021 年12 月購自云南省文山市，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)趙榮華教授鑒定為五加科人參屬植物三七的干燥莖葉；甲醇、乙腈為色譜純，購自Sigma-Alrdich 公司；金龍魚植物調(diào)和食用油、純凈水，市售。

三七莖葉粉的制備：取干燥三七莖葉，粉碎，過80 目篩，待用。

1.3 高溫高壓蒸制

分別稱取三七莖葉粉6 份，各3 g，加入純凈水30 mL，121 ℃分別處理5、10、20、40、80、120 min，取出后置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥至恒定質(zhì)量，搗碎成粉末，待用。

1.4 油炸

取干燥三七莖葉50 g，噴水潤濕，靜置2 h 至質(zhì)地變軟，分成3 份，分別放入燒開的油鍋中炸1、2、3 min，撈出，瀝干油。用研缽搗碎，再用石油醚萃取3 次，棄去石油醚部位，干燥余下部位后，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥至恒定質(zhì)量，搗碎成粉末，待用。

1.5 九蒸九曬

取干燥三七莖葉300 g，噴水潤濕，靜置2 h 至質(zhì)地變軟，蒸鍋隔水蒸2 h，而后鋪于干凈盤子中，于陽光下曬干。次日取前1 d 曬干的三七莖葉，噴水潤濕，靜置2 h 至質(zhì)地變軟，重復(fù)蒸制、曬干步驟。于第3、6、9 天結(jié)束時分別取100 g 干燥樣品搗碎成粉末，待用。

1.6 微波處理

分別稱取三七莖葉粉3 份，各3 g，在微波爐中火、中高火、高火條件下分別處理20 min，取出后放涼待用。

1.7 超聲處理

分別稱取三七莖葉粉3 份，各3 g，分別加入純凈水30 mL，超聲60 ℃處理2、3、4 h，取出后置于電熱鼓風(fēng)干燥箱中50 ℃干燥至恒定質(zhì)量，搗碎成粉末，待用。

1.8 單體皂苷的測定

1.8.1 液相條件 參照云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院藥食資源開發(fā)實驗室探索的能同時測定12 種單體皂苷的液相條件（專利號：CN114487231A）。

1.8.2 供試品溶液的制備 參照《中華人民共和國藥典（一部）》（2020 年）三七含量測定中HPLC 測定皂苷含量方法制備供試品溶液。精密稱取“ 1.3”至“1.7”制備的供試品粉末各0.3 g，加入甲醇于25 mL容量瓶中，定容置刻度，靜置過夜，置于80 ℃水浴中保持微沸2 h，放涼并定容，最后用0.25 μm 有機濾膜過濾，即得供試品溶液。

1.9 總皂苷測定

1.9.1 標準曲線繪制 對照品溶液的制備：稱取人參皂苷Rb1對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含1 mg 對照品的溶液，即得。精密吸取對照品溶液20、30、40、50、60、70、80、90、100 μL，分別置于敞口試管中，于80 ℃水浴鍋中加熱揮發(fā)去溶劑，加入5%香草醛冰醋酸試液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，充分混勻后60 ℃恒溫水浴加熱15 min，然后立即用冰水冷卻5 min，再加入5 mL 冰醋酸，搖勻，消除氣泡。以試劑作為空白對照。參照紫外-可見分光光度法（通則0401），在波長542 nm 處測定其吸光度，以吸光度為縱坐標（Y），以標準品Rb1的溶液濃度為橫坐標（X），繪制標準曲線。

1.9.2 總皂苷測定 精密稱定“1.3”至“1.7”各樣品粉末0.3 g，加甲醇定容至25 mL 容量瓶中，超聲處理30 min，冷卻后用甲醇補足重量，即為供試品溶液。分別精密吸取25 μL，置于敞口試管中，于80 ℃水浴鍋上加熱揮發(fā)去溶劑，加入5%香草醛冰醋酸試液0.2 mL、高氯酸0.8 mL ，充分混勻后60 ℃恒溫水浴加熱15 min，然后立即用冰水冷卻5 min，再加入5 mL 冰醋酸，搖勻，消除氣泡。以試劑作為空白對照。參照紫外-可見分光光度法（通則0401），在波長542 nm 處測定其吸光度，將吸光度（OA）代入標準曲線，計算濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 單體皂苷含量

本研究中將Rb1、Rc、Rb2、Rb3這4 種皂苷稱為原生皂苷，Rb1、Rc、Rb2、Rb3、F2、Rg3、Rk1、CK、Rh29 種單體皂苷合稱為綜合皂苷，F(xiàn)2、Rg3、Rk1、CK、Rh2稱為稀有皂苷。對“1.9.2”項下的各供試品溶液中的9種單體皂苷含量進行統(tǒng)計，結(jié)果見圖1。

圖1 不同熱處理方式下三七莖葉9 種單體皂苷的含量

未經(jīng)炮制的三七莖葉中檢出F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2；經(jīng)過炮制后，三七莖葉原生皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rb3含量均有不同程度的減小，而稀有人參皂苷F2、Rg3、Rk1、CK、Rh2的含量有不同程度的升高。尤其是油炸2、3 min 后4 種原生皂苷全部消失，轉(zhuǎn)化的稀有皂苷CK 和Rk1達到最高。但微波中高火處理20 min 后，原生皂苷全部消失，轉(zhuǎn)化的稀有皂苷量也很少。

2.2 原生皂苷、稀有人參皂苷、綜合皂苷含量變化

原生皂苷、轉(zhuǎn)化的稀有人參皂苷、綜合皂苷含量見圖2。

圖2 不同熱處理方式下三七莖葉原生皂苷、稀有皂苷和綜合皂苷含量的變化

由圖2 可知，不同炮制方法的皂苷轉(zhuǎn)化效率從大到小依次為油炸、微波中火、高溫高壓120 min、60 ℃超聲處理。

2.3 標準曲線和總皂苷

標準曲線方程為Y=2.705 2X-0.025 7，R2=0.993 3，表明可信度較高。繪制的標準曲線見圖3，總皂苷含量的測定結(jié)果見圖4。

圖3 標準曲線

圖4 三七莖葉不同熱處理后總皂苷含量的變化

由圖4 可知，三七莖葉在九蒸九曬和微波高火處理后，總皂苷含量大幅下降，表明高溫雖然會增加三七莖葉中稀有皂苷的含量，但同時會降低總皂苷含量；值得注意的是，在諸多炮制方法中，高溫高壓蒸制相比于其他炮制方法，對總皂苷含量的影響不減反增。

3 小結(jié)與討論

三七莖葉中的原生皂苷在100 ℃以下很難發(fā)生轉(zhuǎn)化，如60 ℃超聲處理和傳統(tǒng)的九蒸九曬處理，不僅不容易將原生皂苷轉(zhuǎn)化為稀有人參皂苷，還會減少原生皂苷的含量。而在高溫的條件下原生皂苷的轉(zhuǎn)化效率較高，其中油炸1、2、3 min 時，稀有皂苷總含量均超過總皂苷含量的50%。但是，高溫條件增加稀有皂苷含量的同時，會降低總皂苷的含量。而在眾多熱處理方式中，蒸制法不僅能增加稀有皂苷的含量，同時還可以增加總皂苷的含量。

原生皂苷Rb1容易轉(zhuǎn)化生成稀有人參皂苷CK［16］，稀有人參皂苷CK 具有抗腫瘤［14］、降低血糖濃度［17］、改善糖尿病并發(fā)癥［18］以及保護肝臟［14］的療效，在臨床上具有積極的治療作用。本研究中，高溫高壓和油炸的熱處理方式對Rb1轉(zhuǎn)化為稀有人參皂苷CK 的轉(zhuǎn)化相關(guān)系數(shù)R2為0.840 0，而Rb3的R2為0.920 0，說明可信度較高，這為油炸三七莖葉藥膳及相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)的工藝奠定了較好基礎(chǔ)。